紫外分光光度法測(cè)定纈草中總纈草素類成分的含量

羅喜榮 苑天紅 楊軍 余德順

摘要：采用紫外分光光度法測(cè)定纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）中總纈草素的含量。結(jié)果表明，纈草素在５～２５ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)，其濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系（ｒ＝０．９９９ ８），該方法回收率為９８．９４％～１０１．０７％，準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于纈草中總纈草素含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）；總纈草素

中圖分類號(hào)：Ｒ２８４．１文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）18－4111-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ oｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｂｙ ＵＶ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＬＵＯ Ｘｉ－ｒｏｎｇ１，ＹＵＡＮ Ｔｉａｎ－ｈｏｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｊｕｎ２，ＹＵ Ｄｅ－ｓｈｕｎ２

（１．Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ University， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ sｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ revealed a ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５～２５ μｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ８）． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ rate ｗａｓ ９８．９４％～１０１．０７％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ waｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Vａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ

纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）為敗醬科纈草屬，多生于海拔８００～２ ５００ ｍ的山坡草地和林下，是一種多年生耐寒開花植物，分布于中國(guó)西南及東北地區(qū)，具有鎮(zhèn)靜催眠、神經(jīng)保護(hù)、保護(hù)腎臟、調(diào)節(jié)循環(huán)系統(tǒng)、抗抑郁和抗腫瘤等藥理活性［１］。纈草素類成分（Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ）是纈草的主要活性成分，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗焦慮、抗病毒、抗胃癌、解痙和舒張血管等藥理作用［２－７］。纈草化學(xué)成分復(fù)雜，不同來源纈草有效成分組成和含量均有差異，目前纈草中纈草素類成分含量的測(cè)定方法有ＨＰＬＣ法和電位滴定法［８，９］，這類方法通常操作復(fù)雜，分析成本高。本試驗(yàn)采用紫外分光光度法測(cè)定纈草藥材中總纈草素含量，旨在為建立纈草素快速分析方法提供參考。

１材料與方法

１．１材料

纈草采自貴州某地，粉碎后過６０目篩，待用。

纈草素標(biāo)準(zhǔn)品（四川維克奇生物科技公司）；分析純甲醇和乙酸乙酯。

１．２儀器

Ｔ６新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、ＫＱ５２００超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

１．３方法

１．３．１標(biāo)準(zhǔn)品制備稱取適量纈草素，用甲醇配制成１００ μｇ／ｍＬ的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別取不同體積（０．２５～１．２５ ｍＬ）的纈草素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于５ ｍＬ比色管中，用甲醇定容至刻度，搖勻，配制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

１．３．２樣品制備準(zhǔn)確稱取纈草粉０．５ ｇ于具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯５０ ｍＬ，浸泡２４ ｈ后，超聲提取４０ ｍｉｎ，過濾，用乙酸乙酯定容至５０ ｍＬ，取濾液０．２ ｍＬ揮干，用甲醇溶解后定容于５ ｍＬ比色管中。

１．３．３測(cè)定以甲醇作空白試劑，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度，繪制工作曲線，以相同條件測(cè)定樣品液吸光度，計(jì)算樣品中的含量。

２結(jié)果與分析

２．１測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

在２００～４００ ｎｍ范圍內(nèi)分別掃描纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液，由圖１可知纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液在２５６ ｎｍ處有最大吸收，故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為２５６ ｎｍ。

２．２工作曲線

按試驗(yàn)方法繪制纈草素的工作曲線，結(jié)果表明吸光度Ａ與纈草素濃度Ｃ在５～２５ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為Ａ＝０．０３８ ３ Ｃ＋０．００４ ２，ｒ＝０．９９９ ８。

２．３精密度

取樣品溶液按試驗(yàn)方法重復(fù)測(cè)定６次，結(jié)果吸光度的ＲＳＤ為０．０８％，表明儀器精密度良好。

２．４穩(wěn)定性

取樣品溶液按試驗(yàn)方法在５ ｈ內(nèi)每隔１ ｈ測(cè)定１次，結(jié)果吸光度的ＲＳＤ為１．９３％，表明樣品溶液在５ ｈ內(nèi)穩(wěn)定性良好。

２．５重復(fù)性

取同一樣品溶液按試驗(yàn)方法平行測(cè)定６次，結(jié)果其總纈草素含量的ＲＳＤ為１．９６％，表明方法重現(xiàn)性良好。

２．６回收率

為驗(yàn)證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，在樣品溶液中加入纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收試驗(yàn)并計(jì)算回收率，由表１可知加樣回收率為９８．９４％～１０１．０７％，試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度高，符合分析要求。

２．７樣品測(cè)定結(jié)果

取貴州不同產(chǎn)地纈草藥材按試驗(yàn)方法測(cè)定樣品中總纈草素含量，結(jié)果見表２。

３討論

纈草素是構(gòu)成纈草療效的有效成分，也是各種纈草共有的特征化合物［８］，纈草素、乙酰纈草素和異纈草素均在２５６ ｎｍ處有最大吸收。以纈草素為對(duì)照品，應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定纈草中總纈草素的含量，方法學(xué)的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率結(jié)果都較滿意，具有簡(jiǎn)便易行、結(jié)果穩(wěn)定可靠、分析費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，可作為測(cè)定纈草中總纈草素含量的一種方法。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 殷勇冠，朱全紅，王彩云．纈草的研究進(jìn)展［Ｊ］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，２００６，２５（３）：２３０－２３１．

［２］ 陳磊，康魯平，秦路平，等．總纈草素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和鎮(zhèn)靜催眠活性研究［Ｊ］．中成藥，２００３，２５（８）：６６３－６６５．

［３］ 王延麗，石晉麗，郭建友，等．纈草素抗焦慮活性研究［Ｊ］． 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，２０１１，１７（６）：１２６－１２８．

［４］ ＴＡＭＵＲＡ Ｓ，ＳＨＩＭＩＺＵ Ｎ，ＦＵＪＩＷＡＲＡ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ ｏｆ ｖａｌｔｒａｔｅ， ａｎｔｉ－ＨＩＶ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｅｘｐｏｒｔ ｏｆ Ｒｅｖ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，２０１０，２０（７）：２１５９－２１６２．

［５］ 葉建明，胡品津，易粹瓊，等．纈草波春誘導(dǎo)ＭＫＮ－４５胃癌細(xì)胞凋亡［Ｊ］．世界華人消化雜志，２００７，１５（１）：２２－２８．

［６］ ＯＣＣＨＩＵＴＯ Ｆ， ＰＩＮＯ Ａ， ＰＡＬＵＭＢＯ Ｄ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｌａｘｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｎｏｎ－ｐｒｅｇｎａｎｔ ｕｔｅｒｉｎｅ ｍｕｓｃｌｅ ［Ｊ］． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００９，６１（２）：２５１－２５６．

［７］ ＥＳＴＲＡＤＡ－ＳＯＴＯ Ｓ， ＲＩＶＥＲＡ－ＬＥＹＶＡ Ｊ， ＲＡＭ?魱ＲＥＺ－ＥＳＰＩＮＯＳＡ Ｊ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｅｄｕｌｉｓ ｓｓｐ． ｐｒｏｃｅｒａ（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ） ａｎｄ ｉｔｓ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｓ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ［Ｊ］． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，６２（９）：１１６７－１１７４．

［８］ 黃仁泉，張立，楊建麗．不同種纈草中纈草三酯和纈草烯酸類成分的ＨＰＬＣ分析和比較［Ｊ］．中草藥，２００２，３３（１１）：１０００－１００１．

［９］ 陳建偉，武孔云，梁光義，等．兩點(diǎn)法測(cè)定寬葉纈草中總纈草素的含量［Ｊ］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，２００９，２０（３）：６０７－６０８．

（責(zé)任編輯周有祥）

收稿日期：２０１２－０７－０２

基金項(xiàng)目：貴州省科技基金項(xiàng)目［黔科合Ｊ字（２０１１）２２８８號(hào)］，貴州省中藥現(xiàn)代專項(xiàng)項(xiàng)目［黔科合ＺＹ字（２０１２）３０１０號(hào)］

作者簡(jiǎn)介：羅喜榮（１９７３－），女，貴州松桃人，副教授，碩士，主要從事天然藥物化學(xué)研究，（電話）０８５１－６９０８５６８（電子信箱）ｌｕｏｘｉｒｏｎｇｙｊ＠１２６．ｃｏｍ；

通訊作者，楊軍（１９７２－），男，副研究員，主要從事天然藥物化學(xué)研究，（電話）１３９８４０１０１９２（電子信箱）ｙｊｓｆｅ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。