禽流感滅活疫苗免疫鵪鶉效力試驗

楊峻　王紅琳等

摘要：禽流感滅活疫苗對鵪鶉首次免疫試驗結果表明，２０日齡、２８日齡和３５日齡的鵪鶉首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鵪鶉能測定到ＡＩ－ＨＩ抗體，３周時抗體水平達到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗體為５ｌｏｇ２以上，但維持時間很短，４周時開始下降，５周時降至３ｌｏｇ２以下；二次免疫２周后抗體達到７．６ｌｏｇ２，3周時抗體開始下降，６周時降至３ｌｏｇ２以下；不同免疫途徑免疫效果比較，皮下注射抗體水平明顯高于肌肉注射抗體水平；試驗同時設雞免疫試驗為對照，相同劑量二次免疫后雞的抗體水平明顯高于鵪鶉，且維持時間可達６周以上；疫苗的安全性試驗表明，免疫鵪鶉未見任何不良臨床反應，精神、食欲和體重均正常。

關鍵詞：禽流感；滅活疫苗；免疫；鵪鶉；效果評價

中圖分類號：Ｓ８３９；Ｓ８５５．３ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）24－5734-02

高致病性禽流感對鵪鶉產業發展威脅很大［１，２］，目前商品化的禽流感疫苗效力檢驗是以雞作為試驗動物［３］，國內外有關疫苗對鵪鶉的免疫效果評價試驗報告較少。通過對不同日齡鵪鶉不同免疫次數的免疫試驗，評價禽流感疫苗對鵪鶉的免疫效果。

１ 材料與方法

１．１ 試驗材料

鵪鶉由湖北神丹健康食品有限公司提供的２００只２０日齡的非免疫鵪鶉，分為３個不同日齡免疫組和非免疫對照組，每組5０只。自然條件下籠養。試驗用雞為１８日齡海蘭褐非免疫雛雞５０只，本實驗室孵化，自然條件下籠養。禽流感滅活疫苗：重組禽流感病毒Ｈ５亞型二價滅活疫苗（青島易邦生物工程有限公司生產，生產批號：２０１１１４２）。

１．２ 試驗方法

１．２．１ 不同日齡首次免疫 分別在鵪鶉２０日齡、２８日齡和３５日齡時頸背皮下注射０．２ｍＬ，免疫后２、３、４、５周隨機取樣，免疫組和對照組各５只鵪鶉采血，分離血清，檢測ＡＩ－ＨＩ抗體。同時設１８日齡雛雞免疫組和非免疫組，觀察疫苗免疫效果。

１．２．２ 二次免疫試驗 ２０日齡鵪鶉在第一次免疫后３周（４１日齡，產蛋前）進行二次免疫（０．３ｍＬ）。二次免疫后每周隨機取樣，免疫組和對照組各５只鵪鶉采血，分離血清，檢測ＡＩ－ＨＩ抗體。同時設雛雞二次免疫組，觀察疫苗免疫效果。

１．２．３ 不同免疫途徑的免疫試驗 將首次免疫試驗（ＡＩ－ＨＩ抗體下降為０）的６０只鵪鶉（７０日齡）分為３組，皮下注射和胸肌注射免疫組各２０只，另２０只為對照組。免疫后每周采血，檢測ＡＩ－ＨＩ抗體。

１．２．４ 疫苗對鵪鶉的安全性試驗 每周測定免疫組和對照組鵪鶉的體重，觀察精神狀態，解剖免疫局部組織的病變，評價疫苗的安全性。

１．２．５ 抗體檢測 參照文獻［２］中常規的血凝抑制試驗（ＨＩ）檢測，ＡＩ－ＨＩ抗原購于哈爾濱獸醫研究所；１％雞和鵪鶉紅細胞為本實驗室制備。為了解兩種紅細胞在作ＡＩ－ＨＩ檢測時是否存在差異，本試驗進行雞和鵪鶉紅細胞檢測抗原和抗體效果比較。

２ 結果與分析

２．１ 不同日齡首次免疫效果

由表１可知，２０、２８、３５日齡的鵪鶉首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鵪鶉能測到ＡＩ－ＨＩ抗體，３周抗體水平達到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗體為５log２以上，但維持時間很短，４周后開始下降，５周降至３log２以下。雞疫苗免疫組抗體能維持到５周以上。

２．２ 二次免疫試驗效果

由表２可知，２０日齡鵪鶉在第一次免疫后３周進行二次免疫，免疫量０．３ｍＬ／只，免疫后２周抗體達到７．６log２，3周后抗體下降，６周降至３log２以下。二次免疫雛雞組抗體水平能持續到６周以上。

２．３ 不同途徑免疫試驗效果

由表３可知，７０日齡的成年鵪鶉分別經頸背皮下和肌肉注射進行二次免疫，結果為皮下免疫組１周抗體明顯上升，２周達到高峰，抗體為８．２ｌｏｇ２，４周后開始下降；肌肉注射組２周才測定到抗體，３周抗體達高峰，且抗體水平明顯低于皮下免疫組。

２．４ 疫苗對鵪鶉安全性試驗

試驗結果表明，禽流感油乳劑滅活疫苗免疫鵪鶉后未見不良臨床反應，精神、食欲和體重正常；每周抽檢１～２只鵪鶉進行局部注射觀察，２周時可見少量的未吸收的疫苗黃色顆粒，３周時疫苗完全吸收。

２．５ １％雞和鵪鶉紅細胞檢測抗原和抗體效果比較

通過對同批次抗體和血清樣品的檢測比較，兩種禽類紅細胞檢測結果無明顯差異，證明用１％雞紅細胞作ＡＩ－ＨＩ檢測是完全可行的。

３ 小結與討論

１）通過對不同日齡鵪鶉不同免疫次數的免疫試驗結果表明，商品化滅活疫苗免疫鵪鶉的ＡＩ－ＨＩ抗體水平與鴨、鵝相比存在較大的差異［３-5］，主要表現在抗體水平低，持續時間短，不論是首次還是二次免疫，持續時間均不超過６周，而成年產蛋鵪鶉的淘汰周期為８～１２個月，這與生產需要相差較大。

２）為了評價疫苗的免疫效果，本研究設有同批疫苗免疫雞對照組和鵪鶉紅細胞對照組，結果表明二次免疫雞的ＡＩ－ＨＩ抗體能持續６周以上，證明疫苗是有效的。為了驗證不同禽類的紅細胞檢測鵪鶉抗體的敏感性，還作了１％雞和鵪鶉紅細胞檢測抗原和抗體效果比較試驗，通過對同批次抗原和血清樣品的檢測比較，２種禽類紅細胞檢測結果完全一致，證明用雞的紅細胞作ＡＩ－ＨＩ檢測是完全可行的。

３）本次試驗的疫苗安全性試驗表明，免疫鵪鶉未見不良臨床反應，精神、食欲和體重正常。疫苗免疫效果表明，不同日齡首次免疫后２周可檢測到抗體，３周抗體水平達到高峰，為５log２以上，但維持時間很短，４周后開始下降，５周降至３log２以下；二次免疫后２周抗體達到７．６log２，3周后抗體開始下降，６周降至３log２以下；不同免疫途徑免疫效果比較，頸背皮下注射抗體水平明顯高于肌肉注射抗體水平。至于抗體維持時間短的問題，可能與鵪鶉免疫系統有關。

參考文獻：

［１］ＳＡＩＦＹＭ．禽病學［Ｍ］．第十一版．蘇敬良，高 福，索 勛，譯．北京：中國農業出版社，２００５．１４７－１６６．

［２］白文彬，于康震．動物傳染病診斷學［Ｍ］．北京：中國農業出版社，２００２．

［３］中華人民共和國農業部．獸用生物制品質量標準匯編［Ｍ］．北京：中國農業出版社，２０１０．

［４］陳永忠，李啟紅，李俊平，等．鴨免疫重組禽流感病毒Ｈ５亞型二價滅活疫苗（Ｈ５Ｎ１，Ｒｅ－５＋Ｒｅ－４）后抗體消長規律的研究［Ｊ］．養禽與禽病防治，２０１０（３）：８－９．

［５］楊 峻，邵華斌，艾地云，等．鵝禽流感免疫程序研究［Ｊ］．湖北農業科學，２００８，４７（４）：４４９－４５１．