肝細胞癌生物標志物研究進展

汪福昌，郭武華

(南昌大學第二附屬醫院，南昌330006)

原發性肝細胞癌(HCC)發病率較高，早期確診比較困難，致使其預后較差。近年來，隨著醫學影像學的發展，許多小肝癌可以被早期發現，這使患者的預后及生存質量有了明顯改善，但HCC患者的5年生存率仍然在5%左右。生物標志物作為腫瘤診斷的重要依據備受關注。為了提高HCC的早期檢出率，有關HCC生物標志物的研究也一直在進行中。現將相關指標的研究進展情況綜述如下。

1 血清標志物

1.1 AFP類 正常情況下，AFP由卵黃囊及胚胎肝產生，胎兒出生1 a后維持低水平，肝病時升高，明顯增高見于HCC、生殖胚胎性腫瘤及妊娠期。雖然其特異性較高，但在發現早期HCC方面缺乏敏感性［1］。AFP異質的化學基礎與天冬胺酰酸相關糖鏈巖藻糖基化的程度有關。其中天冬胺酰酸相關糖鏈約占AFP組成成分的5%。AFP片段的命名由Twketa提出，是基于AFP凝集素的反應情況及相應條件提出的，HCC以AFP-L3增加為特征，而良性肝疾病以AFP-p4/5增加為特征［2］。對于HCC來說，AFP-L3是非常特異的。研究［3］發現，血清AFP-L3對HCC的特異性為95%、敏感性為51%，在大約35%的直徑＜2 cm的HCC患者的血清中AFP-L3被發現升高，結合影像學檢查對肝癌的發現可提前9～12個月;血清AFP-L3與高敏感性的異常凝血酶原(DCP)聯合檢測可有效提高HCC的早期診斷及小HCC(直徑＜2 cm)的發現率［4］。對于AFP-L3陽性的HCC患者，腫瘤更傾向于生長快速、遠處轉移更早、肝功能更差［3］。血清AFP-L3陽性但DCP陰性的HCC患者比單獨DCP陽性患者表現出更晚期的臨床特征［5］。但是，AFP-L3作為HCC的標志物還有局限性:首先，AFP-L3的分析是復雜的，不便于臨床檢測;其次，對于血清AFP陰性的HCC患者，無法檢測到AFP-L3。

1.2 DCP DCP是除AFP外最常用的HCC標志物，它由惡性細胞產生;后天形成的維生素K依賴羧化酶缺陷會導致DCP的產生［6］。DCP的檢測對進展期HCC的發現具有比較高的特異性，但對直徑＜3 cm的HCC缺乏足夠的敏感性［7］。不過，通過改進檢測方法，DCP檢出率越來越高，其在診斷HCC方面與AFP同樣有效。

1.3 白細胞介素(IL)類 ①IL-6:越來越多的證據顯示，IL-6是HCC的一個危險因素，血清高IL-6水平可增加B型肝炎患者癌變的可能。因此，IL-6可被認為是HCC的一個生物標志物。STAT3是介導IL-6到細胞核的主要途徑，并調控增殖及凋亡相關基因的表達。利用IL-6抗體或IL-6/STAT3途徑抑制劑可降低IL-6的效應。因此，阻斷IL-6的病理過程可成為HCC的一個治療選擇［8］。②IL-8:IL-8是一種影響人類中性粒細胞功能(主要包括趨化性、酶的釋放及表面黏附分子的表達)的多功能趨化因子，它對腫瘤、血管內皮細胞的增殖及血管形成、腫瘤的轉移有直接影響［9］。HCC患者術前血清IL-8的水平比健康人明顯升高，其高血清水平與大HCC (直徑＞5 cm)、HCC靜脈侵襲、HCC病理分期及較差的預后相關［10］。

1.4 磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC3) GPC3是一種錨定在細胞膜上的硫酸肝素蛋白多糖，是HCC的一個好的候選標志物，其可溶性的氨基末端成分(sGPC3)是在GPC3的精氨酸(358)和絲氨酸(359)之間裂開形成的［10］。HCC患者的血清GPC3水平比肝硬化及健康人明顯高，同時檢測血清GPC3和AFP可提高HCC診斷的敏感性［11］。然而，GPC3在部分惡性黑色素瘤患者的血清中也會升高，故其對HCC的診斷尚存在一定的局限性。

1.5 血管內皮生長因子(VEGF) VEGF是一種調節腫瘤新血管形成的分泌型單聚體細胞因子。血管再生在腫瘤包括HCC的生長及進程中起著至關重要的作用，其以高水平的血管化為特征。在HCC腫瘤組織及具有微血管侵襲的HCC中，VEGF比在正常肝組織及微血管未侵襲的HCC中表達水平明顯高［12］。較高水平的血清VEGF與HCC進展、門靜脈癌栓形成、對治療反應較差、更短的總生存率有關［13］。

1.6 Ⅱ型高爾基體跨膜蛋白(GP73) GP73主要由膽管上皮細胞產生，正常肝臟細胞表達甚微或不表達。毛一雷等［14］發現，HCC患者血清GP73水平明顯升高，其診斷HCC的敏感性達76.9%，特異性達92.8%，與血清AFP相比，其敏感性更高。

1.7 腫瘤特異性生長因子(TSGF) 惡性腫瘤在其生長過程中釋放TSGF到周圍血中，導致腫瘤周圍毛細血管的增生。血清TGSF作為早期HCC的標志，敏感性達82%［15］。

1.8 蛋白質表達譜 用表面增強的激光解析電離飛行時間質譜(SELDI-TOFMS)技術檢測血清蛋白質譜，對HCC的診斷有一定參考價值，靈敏性和特異性較高，準確率優于血清AFP［16］。

2 基因標志物

2.1 人宮頸癌基因(HCCR) HCCR具有p53基因的抑制調節功能。HCCR蛋白在腫瘤性的肝硬化組織中高表達，但在正常肝組織中卻未發現［17］。作為HCC的標志物，HCCR比AFP具有更高的敏感性，特異性高達95.7%，在小HCC患者中HCCR血清陽性檢出率達69.2%。

2.2 AFP mRNA 研究［18］顯示，通過RT-PCR技術在血清中檢測到AFP mRNA預示HCC預后不良，與血清AFP mRNA陰性的HCC患者相比，血清AFP mRNA陽性的HCC患者術后復發間期短得多。

2.3 人類端粒逆轉錄酶(hTERT)mRNA HCC患者血清中hTERT mRNA的表達明顯高于健康人及非惡性肝臟疾病患者，血清hTERT mRNA診斷HCC的敏感性及特異性分別為88.2%、70.0%，優于傳統的腫瘤標志物如AFP mRNA、AFP和DCP，并且血清hTERT mRNA的表達與血清AFP含量、腫瘤大小及其分化程度相關，其可作為HCC預后不良的判斷指標［19］。

2.4 小泛素相關修飾物(SUMO-1)mRNA

SUMO-1是蛋白質翻譯后的一種修飾物，在RNA轉錄、DNA修復、核物質轉運及染色體分離等方面發揮重要作用。現已發現，SUMO-1的修飾調節了許多與腫瘤發生、發展及轉移有關的蛋白質的功能，如p53、增殖細胞核抗原、雌激素受體、端粒酶等［20］。有研究［21］顯示，HCC組織中SUMO-1 mRNA呈高表達，而在癌旁肝臟組織及肝臟良性腫瘤組織中表達較低。故SUMO-1mRNA可作為診斷HCC的一個重要標志物。

2.5 Parkin基因 Parkin基因又名PARK2，定位于染色體6q25.2～27，包含12個外顯子，全長約1.5 Mb，編碼465個氨基酸、分子量約5.2 kD的蛋白質，即Parkin蛋白。一般情況下，Parkin基因存在于大多數正常組織中。目前發現該基因在乳腺癌、卵巢癌、腎細胞癌、肺癌、黑色素瘤及很多血液系統癌癥中存在雜合性缺失。因此，Parkin基因可能是一種候選的抑癌基因。但目前Parkin基因缺失的機制以及它與癌癥的細胞周期調控關系尚不十分清楚。

2.6 微小RNA(miRNA) miRNA是一種內源性的微小非編碼RNA。正常情況下，細胞核內先轉錄出一種RNA前體，這種前體RNA隨后被剪切成21～25個核酸長度的“發卡”結構的成熟miRNA。這些miRNA通過非嚴格的配對，結合在目標mRNA的3'端非編碼區，引導翻譯或降解mRNA，起到了類似轉錄因子的作用。雖然大量的miRNA的作用還沒有研究得很清楚，但是它參與腫瘤發生發展這一作用已逐漸明確。同mRNA一樣，HCC相關的miRNA也可以作為HCC診斷和預后判斷的腫瘤標志物。Blondeau［22］利用芯片技術研究發現，HCC和非HCC組織的miRNA表達有差異。對于臨床診斷來說，建立HCC和miRNA的關聯作用只是第一步，接著需要在大量人群中證實這些顯著變化的意義。目前有5種miRNA在這方面的意義已經得到肯定，比如利用miR-222和miR-223的異常可以區分HCC和癌旁組織。也有研究者通過聯合檢測6種miRNA，將肝腺瘤、肝內小結等良性肝臟腫瘤與HCC區分開來，前者表現為miR-21、miR-10b、miR-222、miR-224水平升高，而 HCC的miR-200c、miR-203表達降低［23］。

2.7 其他 2010年中國軍事科學院聯合國內多家醫療機構和研究院所，通過對部分HCC患者的440 794 SNPs分析，發現一個長度為24萬個堿基的HCC易感基因新區域染色體 1p36.22，包含UBE4B、KIF1B和PGD三個基因［24］。這三個基因能否成為HCC的標志物尚待進一步研究。

綜上所述，AFP作為肝癌的一個生物標志物，現已廣泛用于HCC的臨床診斷及治療療效的判斷，但仍然存在不足和缺陷。理想的腫瘤血清標志物應是特異性強、靈敏度高、表達量或血清中水平與腫瘤組織發展或大小呈正相關。隨著研究的進展，已發現一些更敏感、更特異的診斷HCC的標志物，如基因標志物。但如何綜合應用這些標志物以提高HCC的診治效果是一個值得解決的問題。

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