急性白血病患兒外周血IL-17水平變化及意義

陳燕麗，曾意茹，陳福雄，吳麗萍，吳澤霖

(廣州醫學院第一附屬醫院，廣州510120)

近20多年來，兒童急性白血病的完全緩解率和5年無病生存率已經得到明顯提高，但因疾病本身和化療所造成的免疫微環境的紊亂使得患兒病程中易出現各種感染，嚴重影響患兒的存活率。最新發現的輔助性T細胞(Th細胞)亞群中的Th17細胞，可通過分泌特征性細胞因子白細胞介素-17(IL-17)在自身免疫性疾病、炎癥、移植排斥反應及惡性腫瘤中發揮重要作用。目前已證實，在肺癌、肝癌、胃癌、腸癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌等常見實體腫瘤患者外周血、癌組織中存在 Th17細胞及其分泌的IL-17，并且與腫瘤的發生發展相關，但其與白血病的關系研究較少。為此，本研究觀察了急性白血病患兒外周血IL-17的水平變化。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011年5月～2012年4月在廣州醫學院第一附屬醫院住院的急性白血病患兒43例，男28例，女15例;年齡5個月～12歲。所有病例符合急性白血病的診斷標準［1］，其中急性淋巴細胞白血病33例，急性髓系白血病10例。采用相應的規范化治方案進行治療。43例患兒中，化療后15例尚未達到完全緩解(未緩解組)、28例已經達到完全緩解(緩解組)，化療后正處于骨髓抑制期19例(骨髓抑制組)、已度過骨髓抑制期24例(非骨髓抑制組)。22例正常兒童作為對照組，男12例，女10例;年齡8個月～13歲;無腫瘤及自身免疫疾病史。1.2 IL-17檢測方法 所有研究對象于清晨空腹抽取外周靜脈血1～2 mL，肝素或EDTA抗凝。血液抽取后30 min內以1 000 r/min離心15 min，取其上層血漿，－80℃保存備檢，避免反復凍融。采用流式液相多重蛋白定量技術(CBA)。實驗所需IL-17捕獲微球B5，PE檢測試劑，IL-17標準品，儀器設置微球A1、A9、F1、F9，PE儀器設置微球F1及PE陽性質控檢測劑，相應的檢測稀釋劑及洗滌緩沖液，均購于BD公司;流式細胞儀型號為BDFACSCanto。在相應流式管中分別加入稀釋好的標準品和待測樣本、捕獲微球、PE檢測試劑，各50 μL/管，避光孵育，洗滌后每管加300 μL洗滌緩沖液重懸微球，上機檢測(每個檢測管上機前需震蕩)。所得結果用CBA專門分析軟件進行分析，可得到檢測樣本中IL-17的濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。多組計量資料比較用單因素方差分析，兩組計量資料比較用t檢驗，兩變量間的相關性分析用Peason相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

未緩解組、緩解組、骨髓抑制組和非骨髓抑制組IL-17分別為(7.45±2.77)、(9.73±1.95)、(8.06 ±3.13)、(9.62±2.16)pg/mL，與對照組的(12.53 ±4.63)pg/mL相比，P均＜0.05;緩解組與未緩解組相比，P＜0.05;骨髓抑制組與非骨髓抑制組相比，P＜0.05。

3 討論

Harrington等［2］在研究自身免疫性疾病中發現一種可分泌IL-17的不同于Th1和Th2細胞的新型細胞——Th17細胞，它的分化發育具有獨特的機制。在TGF-β和IL-6同時存在時，經由STAT-3通路活化 Th細胞型細胞的特異性轉錄因子RORγt，誘導初始細胞分化為Th17細胞，并分泌特征性細胞因子IL-17［3］。Th17細胞與介導免疫耐受的Treg細胞都來源于初始T細胞，兩者的功能和分化過程相互拮抗，兩者保持平衡有利于機體免疫穩定狀態的維持。低濃度的TGF-β和IL-6協同作用能誘導RORγt的產生，促進Th17細胞的分化，而高濃度的TGF-β能夠上調Foxp3的表達，促進Treg細胞的分化。細胞因子調節的RORγt/Foxp3平衡決定了初始T細胞受抗原刺激后向Th17細胞或Treg細胞方向分化［4］。STAT5促進Treg細胞的發育和功能維持，抑制Th17細胞的分化;而STAT3則抑制Treg細胞的發育，促進Th17細胞的分化［5］。研究［6］證實，Treg細胞可以抑制、識別自身腫瘤細胞的效應細胞，在介導機體腫瘤免疫耐受中起重要作用，Treg細胞的數量與腫瘤的預后呈負相關。Wang等［7］發現，急性白血病患者Treg細胞占外周血T細胞的比例較正常對照組明顯增加，而且與患者的病程、疾病的預后有明顯相關性。Wu等［8］研究發現，急性白血病患者外周血中Th17細胞數量高于健康志愿者，經治療后達到完全緩解的患者其Th17細胞數量顯著下降，在評估急性白血病化療療效、化療后機體的免疫狀態有重要的參考價值。

本研究發現，急性白血病患兒外周血中IL-17水平下降，且化療后未緩解者和化療后骨髓抑制者水平更低，都低于健康對照者，與文獻［9］報道相符。提示Th17細胞可能通過分泌IL-17參與了兒童急性白血病的發生及病情發展。未緩解患者體內腫瘤負荷高，Treg細胞、Th1細胞和Th2細胞等分泌抑制Th17細胞分化的細胞因子的作用更強，而白血病患者由于經過化療，機體免疫系統遭到破壞，因此初始T細胞數量減少，所分化的Th17細胞也少;當白血病經過化療達到緩解時，雖然Th17細胞的功能有所恢復，但上述抑制Th17的細胞功能也有所恢復，綜合作用的結果則抵消了 Th17數量和功能的提高［10］，故外周血中IL-17水平仍然低于健康對照者。另外，IL-17是Th17細胞分泌的功能性細胞因子，可以誘導許多促炎因子和趨化因子表達，與多種免疫應答性疾病相關，可清除體內存在的病原體如細菌、真菌等。蘇梅芳等［11］研究認為，IL-17可作為白血病患者的感染風險判別指標。然而，在急性白血病患兒外周血中，與Th1和Th2類細胞因子相比，IL-17的表達水平較低，若利用傳統的ELISA方法來檢測，需經過體外刺激外周血單個核細胞后收集上清液來提高檢出率。CBA是在流式細胞術基礎上發展起來的液相多重蛋白定量技術，具有敏感度高、快速、精確、所需標本量少且可同時檢測多個細胞因子及獲得多個參數等特點，并且直接取患者血漿作為檢測標本而不需要經過體外刺激單個核細胞后取培養上清液，所得結果更能反映體內真實水平。通過CBA檢測技術可快速、準確檢測白血病患兒血漿中低水平的IL-17，為進一步研究Th17細胞及其分泌的特征性細胞因子IL-17在腫瘤免疫機制中的作用提供依據。

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