p53、MDM2和PCNA在皮膚鱗狀細胞癌中的表達及意義

李小靜，李柳君，張秀娟，李志鋒

（1.河北工程大學附屬醫院皮膚科，河北邯鄲056002；2.河北省永年縣第一醫院婦產科，河北邯鄲057150）

p53、MDM2和PCNA在皮膚鱗狀細胞癌中的表達及意義

李小靜1，李柳君2，張秀娟1，李志鋒1

（1.河北工程大學附屬醫院皮膚科，河北邯鄲056002；2.河北省永年縣第一醫院婦產科，河北邯鄲057150）

目的探討p53、鼠雙微體2（murine double mimute 2，MDM2）和增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在皮膚鱗狀細胞癌皮損中的表達及意義。方法選擇皮膚鱗狀細胞癌30例，正常皮膚組織15例，分別采用免疫組織化學法檢測皮損中p53、MDM2和PCNA蛋白的表達。結果皮膚鱗狀細胞癌組織中p53、MDM2、PCNA蛋白的陽性表達均明顯高于正常皮膚組織，差異有統計學意義（χ2=7.697、19.397、5.625，P＜0.05）。結論p53、MDM2的高表達提示其在皮膚鱗狀細胞癌的發生發展中起重要作用。

皮膚腫瘤；基因，p53；原癌基因蛋白質c-mdm2；增殖細胞核抗原

作為腫瘤抑癌基因，p53在細胞內的中心作用是介導DNA損傷后的細胞應激反應，避免受損后的DNA堆積，維持基因的穩定性。鼠雙微體2（murine double mimute 2，MDM2）作為p53基因轉錄激活的產物可以抑制p53的活性。皮膚鱗狀細胞癌（簡稱皮膚鱗癌）作為常見的皮膚惡性腫瘤，其細胞惡性增殖可能涉及由MDM2維持的p53自身平衡機制的失衡。為了進一步探討皮膚鱗癌中p53、MDM2的表達情況及其與腫瘤細胞增殖的關系，我們選擇皮膚鱗癌及正常皮膚組織，分別采用免疫組織化學技術觀察皮損中p53、MDM2和增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2009年1月—2011年5月河北工程大學附屬醫院經常規組織病理確診的皮膚鱗癌患者30例，男性16例，女性14例，年齡34～87歲，平均62.8歲，病程1個月～30年，平均3.48年。其中頭面部12例，背部1例，手部6例，四肢9例，外陰部位2例；暴露部位（頭面部及手）18例（60%），非暴露部位12例（40%）。正常皮膚組織15例，男性10例（正常人包皮手術切除標本），女性5例（鱗癌周邊正常組織），年齡20～75歲，平均58.5歲。

1.2 主要試劑：鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人MDM2單克隆抗體及鼠抗人PCNA單克隆抗體購自北京中山生物技術有限公司。即用型快速免疫組織化學MaxVisionTM檢測試劑盒及二氨基聯苯胺顯色劑均購于福州邁新生物技術有限公司。

1.3 p53、MDM2和PCNA檢測：采用免疫組織化學MaxVisionTM法檢測p53、MDM2和PCNA的表達。石蠟切片常規脫蠟至水化，微波檸檬酸抗原修復，滴加一抗，4℃冰箱孵育過夜，滴加二抗，濕盒內37℃孵育15min，二氨基聯苯胺顯色，蘇木素復染，脫水透明后封片，光鏡下觀察結果。PBS液代替一抗作陰性對照，以已知陽性片作陽性對照。

1.4 結果判定：連續觀察5～10個含表皮的高倍鏡視野，觀察每個視野p53、MDM2陽性細胞數，細胞染色陽性率以半定量4個等級表示。陰性（-），p53、MDM2陽性細胞數＜10%；弱陽性（+），p53、MDM2陽性細胞數10%～29%；陽性（++），p53、MDM2陽性細胞數30%～59%；強陽性（+++），p53、MDM2陽性細胞數＞59%。PCNA判定標準為，連續觀察5～10個含表皮的高倍鏡視野，觀察每個視野PCNA陽性細胞數，細胞染色陽性率以半定量4個等級表示。陰性（-），未見陽性細胞；弱陽性（+），平均每高倍鏡視野陽性細胞數＜20%；陽性（++），平均每高倍鏡視野陽性細胞數20%～50%；強陽性（+++），平均每高倍鏡視野陽性細胞數＞50%。

1.5 統計學方法：應用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析。計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；兩變量之間的比較采用Spearman等級相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 p53蛋白的表達：p53蛋白陽性表達為胞核內出現棕褐色顆粒著色。結果顯示，30例皮膚鱗癌中，4例弱陽性表達，7例陽性表達，6例強陽性表達，其陽性表達率為56.67%（17/30）；15例正常皮膚組織中僅2例在基底細胞層散在陽性表達，其陽性表達率為13.33%（2/15）。皮膚鱗癌中p53蛋白表達明顯高于正常皮膚組織，差異有統計學意義（χ2=7.697，P＜0.05）。

2.2 MDM2蛋白的表達：MDM2陽性表達為細胞核或胞漿著色。30例皮膚鱗癌中，5例弱陽性表達，8例陽性表達，13例強陽性表達，其陽性表達率為86.67%（26/30）。15例正常皮膚組織中3例在表皮細胞和附屬器細胞可見弱陽性表達，其陽性表達率為20.00%（3/15）。皮膚鱗癌中MDM2蛋白表達明顯高于正常皮膚組織，差異有統計學意義（χ2= 19.397，P＜0.05）。

2.3 PCNA蛋白的表達：PCNA陽性表達為細胞核內出現棕黃色顆粒。30例皮膚鱗癌組織中，4例弱陽性表達，10例陽性表達，13例強陽性表達，其陽性表達率為90.00%（27/30）。15例正常皮膚組織中9例在表皮細胞及附屬器細胞中可見弱陽性表達，多數集中表達于基底層細胞，其陽性表達率為60.00%（9/15）。皮膚鱗癌中PCNA蛋白表達明顯高于正常皮膚組織，差異有統計學意義（χ2=5.625，P＜0.05）。

2.4 p53、MDM2與PCNA的相關性：在皮膚鱗癌組織中，p53與PCNA蛋白表達呈正相關（r=0.512，P＜0.01），MDM2與PCNA蛋白表達呈正相關（r= 0.461，P＜0.01）。

3 討 論

皮膚鱗癌由表皮正常角質形成細胞惡性轉變而成，好發于皮膚暴露部位，發病率呈逐年增高的趨勢［1］。p53基因是一個抑癌基因，參與細胞周期、細胞生長、細胞凋亡、DNA損傷和修復的調控，在基因調控網絡中具有中樞地位。p53蛋白表達與p53基因錯義存在相關性。因此，一般可以認為組織化學檢測的p53蛋白代表突變后的產物［2］。皮膚鱗癌中p53蛋白表達陽性率報道結果不一。Batinac等［3］報道皮膚鱗癌中p53蛋白表達陽性率高達80%。有報道［4］顯示p53基因在皮膚鱗癌中突變率為50%，代表腫瘤發生的早期事件，與晚期轉移及預后無關。p53表達可反應腫瘤的惡性程度，預測皮膚鱗癌侵襲發展［3］。本研究結果顯示，皮膚鱗癌中p53蛋白陽性表達率為56.67%（17/30），提示皮膚鱗癌中存在p53突變。

MDM2作為p53基因轉錄激活的產物，通過加速p53蛋白的降解而下調p53蛋白及自身的水平，是維持機體生理功能的一種重要的負反饋調節機制。MDM2基因擴增或蛋白表達過量時，會打破這種平衡機制而促進細胞增殖。韓幫鋒等［5］研究表明MDM2在口腔白斑和鱗癌中高表達，并隨組織惡性程度增高呈上升趨勢。李超霞等［6］研究表明在食道鱗癌中MDM2蛋白過表達，MDM2表達可能發生在食管癌變的晚期。我們采用免疫組織化學方法研究了皮膚鱗癌中MDM2的表達情況，結果發現MDM2在癌巢可見胞漿或胞核內棕黃色著色，其表達高于正常皮膚組織，推測MDM2過度表達可能參與了皮膚鱗癌的惡性增殖過程。

本研究中p53蛋白和MDM2蛋白水平均升高，可能是由于皮膚鱗癌遭受刺激后，細胞發生惡性增生誘導p53蛋白發生突變，MDM2異常表達，p53、MDM2反饋環破壞。隨著對其研究的進一步深入，將為更好理解皮膚鱗癌的發生和發展過程及其臨床治療提供可能的新靶點。

PCNA又稱為周期蛋白，是伴隨細胞增殖而表達的一種核內蛋白，在細胞核內陽性表達的高低與細胞的增殖活性密切相關，它的這一生理功能可以評估細胞的增殖狀態，被廣泛用于惡性腫瘤及一些增生性疾病的研究。本研究結果顯示PCNA蛋白在皮膚鱗癌組織中的表達顯著增加，表明PCNA可反映皮膚鱗癌的惡性增殖過程。本研究結果顯示p53、MDM2蛋白在皮膚鱗癌中表達均增加，且均與PCNA存在相關性，表明兩者均參與了皮膚鱗癌的惡性增殖過程。

［1］ALAM M，RATNER D.Cutaneous squamous cell carcinoma［J］.N Engl J Med，2001，344（13）：975-983.

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［4］BOUKAMP P.Non-melanoma skin cancer：what drives tumor development and progression？［J］.Carcinogenesis，2005，26（10）：1657-1667.

［5］韓幫鋒，吳平凡，潘劍，等.鼠雙微粒體2蛋白、P53在口腔白斑和鱗癌中的表達及其相關性的研究［J］.華西口腔醫學雜志，2011，29（1）：79-82.

［6］李超霞，方力，楊小紅，等.MDM2、P53和P27蛋白在食管鱗癌及其癌旁組織中的表達及其意義［J］.癌變·畸變·突變，2009，21（5）：362-366.

（本文編輯：劉斯靜）

EXPRESSIONS OF p53，MDM2 AND PCNA IN CUTANEOUS SQUAMOUS CELL CARCINOMA

LI Xiaojing1，LI Liujun2，ZHANG Xiujuan1，LI Zhifeng1
（1.Department of Dermatology，the Affiliated Hospital of Hebei University of Engineering，Handan 056002，China；2.Department of Obstetrics and Gynecology，the First Hospital of Yongnian County，Hebei Province，Yongnian 057150，China）

ObjectiveTo investigate the expression of p53，murine double mimute 2（MDM2）and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）in cutaneous squmous cell carcinoma and their significance.MethodsSkin specimens were obtained from the lesions of 30 patients with cutaneous squamous cell carcinoma and normal skin of 15 healthy controls.Immunocytochemistry was used to detect the protein expression of p53，MDM2 and PCNA.ResultsThe cutaneous squamous cell carcinoma tissue specimens were significantly differed from the control tissue specimens in the expression rate of p53（χ2= 7.697，P＜0.05），MDM2（χ2=19.397，P＜0.05）and PCNA（χ2=5.625，P＜0.05）.ConclusionThe expression of p53，MDM2 and PCNA is significantly higher in cutaneous squamous cell carcinoma than in normal skin tissue.The high expression of p53 and MDM2 may play a significant role in the processes of carcinogenesis of cutaneous squamous cell carcinoma.

skin neoplasms；genes，p53；proto-oncogene proteins c-mdm2；proliferating cell nuclear antigen

R739.5

A

1007-3205（2012）12-1412-03

2012-08-29；

2012-11-19

李小靜（1980-），女，河北邯鄲人，河北工程大學附屬醫院主治醫師，醫學博士，從事皮膚病理研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.12.017