康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉靶向微球的藥代動力學及體內分布研究

王耀華，李力佳，刁源媛

（1.河北大學附屬醫院，河北 保定 071000；2.保定市第一中心醫院，河北 保定 071000；3.保定市第三醫院藥劑科，河北保定 071000）

康普瑞丁磷酸二鈉（Combretastatin A4p，CA-4P）為新型抗腫瘤前體藥物，體內代謝成康普瑞丁活性形式與血管內皮細胞的微管系統結合、阻止新生血管的生成而發揮抗腫瘤的作用，是治療非小細胞肺癌的藥物之一[1]，CA-4P在體內經非特定磷酸酯酶作用可迅速去磷酸化而生成具有生物活性的CA4[2]。由于康普瑞丁給予大鼠靜脈注射給藥后，消除半衰期僅幾分鐘，在體內消除很快，穩定性差[3]，將其制成微球后，可緩慢、持續釋放，能延長藥物有效水平的周期、增加持續作用的時間、減少給藥的頻率；還可選擇性的到達病變部位，從而降低藥物的毒性、提高藥物的療效和增加被包封藥物的穩定性。為驗證自制的康普瑞丁磷酸二鈉肺靶向微球的肺靶向特性，文中采用HPLC研究了小鼠尾靜脈注射CA-4P后，CA4在小鼠體內的藥動學特征，可為臨床用藥提供參考依據。

1 材料

LC-10Avp高效液相色譜系統（日本島津）；GL-88B漩渦振蕩器（麒麟醫用儀器廠）。康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉靶向微球（自制，批號：110826）、CA-4P凍干注射劑（含量99.8%）、CA4對照品（含量99.4%）、內標（E）-3-（4'-甲氧苯基）-2-（3"、4"、5"-三甲氧苯基）-2-丙烯酸（含量99.6%）(西南合成制藥股份有限公司)；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸二氫鉀為分析純。昆明種小鼠，體質量約18～22 g，沈陽藥科大學實驗動物中心提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[4]

色譜柱為Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm、5 μm），流動相為甲醇-乙腈-0.05 moL/L磷酸二氫鉀緩沖液（55:1:40），檢測波長為305 nm，流速為0.05 mL/min，柱溫為40℃，進樣量為20 μL。

2.2 溶液的制備

取30.30 mg CA4對照品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成303.0 ug/mL的CA4對照品貯備液；另取37.53 mg內標對照品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成375.30 ug/mL的內標對照品貯備液。兩種溶液均置4℃冰箱中存放，臨用時稀釋至所需濃度。

2.3 樣品的處理

精密量取100 uL血清樣品置尖底離心管中，精密加入100 uL 1.5 ug/mL的內標溶液、100 uL甲醇，漩渦振蕩3 min，靜置，1.2×104r/min離心10 min，取上清液進樣。

2.4 標準曲線的制備

精密量取100 μL空白血清，共7份，分別置尖底離心管中，加入100 μL不同濃度的CA4對照品溶液、100 μL內標溶液，配制成含CA4的系列標準血清樣品。按2.1、2.2、2.3項的方法處理后，取20 μL上清液進樣測定，記錄CA4及內標的峰面積。以CA4與內標峰面積的比對濃度進行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.684x-0.018 (r=0.9999)。結果CA4 0.051～20.200 μg/mL與峰面積比的線性關系良好。

2.5 藥物動力學及體內分布試驗

取66只小鼠，隨機分為兩組（對照組和制劑組），每組再分成11個時間點，每個時間點3只，分別于給藥后5 、15 min、0.5、1、2、4、8、12、24、48及72 h摘除眼球取血，隨即斷頸處死的采樣點。注射劑按20 mg/kg劑量和納米制劑36 mg/kg劑量分散于生理鹽水中制備成，進行單劑靜脈注射后，定時摘眼球取血0.5 mL，置肝素化塑料離心管，離心得血漿。隨即處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎等組織，各組織樣本經生理鹽水洗凈后用濾紙吸干、精密稱定，按組織重量加入10倍量的生理鹽水進行勻漿，取0.5 mL，分別加入0.5 μg/mL內標液100 μL，混勻后，加入乙醚5 mL，渦旋混勻后（渦旋混合3 min），離心10 min。吸取有機相小心移至10 mL刻度離心管內，在N2流下，40℃水浴吹干，殘渣中準確加入甲醇100 μL復溶，取20 μL進樣做色譜分析。檢測后，將藥-時數據統計距法處理，求算有關藥物動力學的參數。藥-時曲線以靜脈注射的二室模型擬合較佳，權重系數為1?？灯杖鸲×姿岫c殼聚糖-海藻酸鈉微球在各組織中有分布明顯不同，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球肺肝中的AUC顯著增加，分別提高了提高49.34和20.65倍。

3 討論

殼聚糖-海藻酸鈉是藥劑研究領域中的新型藥物載體，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球具有非常優越的載藥性能，較康普瑞丁磷酸二鈉注射劑在小鼠體內分布明顯不同，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球在肺部和肝部的AUC顯著增加，表明制備的微球靶向于肺部和肝部，極大地提高了藥物在肺部和肝部的分布，并形成貯庫，通過其基質的緩慢溶蝕達到了藥物緩釋，康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球對肺部和肝部疾病的臨床治療有著重要意義。

[1]張 璇,張健存.抗腫瘤新藥-Combretastatin A4磷酸酯[J].中國藥房,2007,18(10):779-781.

[2]Lippert JW.Vascular disrupting agent[J].Bioorg Med Chem,2007,15(2):605-615.

[3]陸 榕,樊慧蓉,劉昌孝.風車子素A4磷酸鹽的大鼠藥動學研究[J].中草藥,2006,37(9):147-149.

[4]何應金,張 潔,劉 靜,等.Combretastatin A4磷酸酯二鈉在大鼠體內的藥物動力學[J].華西藥學雜志,2008,23(6):663-665.