甘草總黃酮對(duì)皮膚衰老的影響

康金森，程路峰，楊 建，陶義存，胡 堅(jiān)

(新疆醫(yī)科大學(xué)，烏魯木齊830011)

皮膚的衰老是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程。對(duì)此學(xué)者們有各種解釋，如自由基學(xué)說、遺傳學(xué)說、交聯(lián)學(xué)說、免疫學(xué)說等，其中自由基學(xué)說比較被認(rèn)同。自由基攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、核酸、多聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或斷裂，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，可在皮膚上形成色斑、皺紋及其他皮膚病變，造成皮膚的衰老［1，2］。因此，減少自由基的產(chǎn)生和清除多余的自由基有可能成為延緩皮膚衰老的方法。甘草黃酮類具有明顯的抗氧化、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗病原微生物、抗腫瘤等作用［3］。甘草總黃酮(FG)對(duì)四種主要活性氧——超氧陰離子自由基、羥自由基、單線態(tài)氧、過氧化氫有清除作用，推測其在延緩皮膚衰老方面可能有潛在的應(yīng)用價(jià)值。2011年5月～2012年5月，我們采用D-半乳糖腹腔注射的方法建立亞急性衰老小鼠模型，然后觀察FG對(duì)延緩其皮膚衰老的作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑、儀器及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 FG(含量88.2%)，D-半乳糖。脂褐質(zhì)、羥脯胺酸、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測試盒。751光柵分光光度計(jì)，RF-540熒光分光光度計(jì)，TGL-168高速臺(tái)式離心機(jī)，DK-S24型電熱恒溫水浴箱。健康昆明種小鼠，雌性，體質(zhì)量(20±2.0)g，購于新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型建立［4］昆明種雌性小鼠60只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E組，各12只。A組腹腔注射生理鹽水(10 mL/kg)、1次/d，B組腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg、1次/d，同時(shí)A、B組分別給予等容積蒸餾水灌胃(1次/d);C、D、E組分別給予FG 0.5、0.75、1.5 g/kg灌胃(1次/d)，同時(shí)腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg、1次/d;各組小鼠每5 d稱重1次，根據(jù)體其體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量。42 d后斷頸放血處死各組小鼠，分別取肝臟組織及皮膚組織。

1.2.2 小鼠肝組織中 SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的測定 ①小鼠肝臟組織SOD活性測定:取肝組織100 mg，用冰生理鹽水制成1%的組織勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液，用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。②小鼠肝臟組織MDA含量測定:稱取肝臟組織100 mg，用冰生理鹽水制成10%的組織勻漿，離心(方法同上)，取上清液，用硫代巴比妥酸比色法測定MDA含量。③小鼠肝臟組織GSH-Px活性測定:稱取肝臟組織10 mg，用冰生理鹽水制成10%的組織勻漿，離心(方法同上)，取上清液，用DTNB法測定GSH-Px活性。以上操作均按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3 小鼠皮膚組織中SOD活性及MDA、羥脯氨酸、脂褐質(zhì)含量測定 取皮膚組織300 mg，用冰生理鹽水制成10%的組織勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液備檢。取制備好的10%皮膚組織勻漿上清用冰生理鹽水稀釋至1%，用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性;取制備好的10%皮膚組織勻漿上清，用硫代巴比妥酸比色法測定MDA含量;取制備好的10%皮膚組織勻漿上清用冰生理鹽水稀釋至2%，用氯胺酮法測定羥脯氨酸;取制備好的10%皮膚組織勻漿上清，用熒光法測定脂褐質(zhì)。以上操作均按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4 小鼠肝臟和皮膚組織的蛋白測定 小鼠肝臟和皮膚組織的蛋白測定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較用F檢驗(yàn)及q檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較 檢測結(jié)果見表1。表1顯示，與A組相比，B組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活性明顯降低，MDA含量增加;與B組相比，C、D、E組小鼠肝臟組織中SOD活性升高，D、E組MDA含量降低、GSH-Px活性升高，與A組相近。

表1 各組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較(±s)

表1 各組小鼠肝臟組織中SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較(±s)

注:與 B組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與A組相比，#P＜0.01

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2.2 各組小鼠皮膚組織SOD活性及MDA、羥脯氨酸、脂褐質(zhì)含量比較 檢測結(jié)果見表2。表2顯示，與A組相比，B組小鼠皮膚組織中SOD活性下降、羥脯氨酸含量降低，而MDA和脂褐質(zhì)的含量明顯增加。與B組相比，C、D、E組小鼠皮膚組織中SOD活性增強(qiáng)、羥脯氨酸含量升高，MDA和脂褐質(zhì)含量明顯降低。

表2 各組小鼠皮膚組織SOD活性及MDA、羥脯氨酸、脂褐質(zhì)含量比較(±s)

表2 各組小鼠皮膚組織SOD活性及MDA、羥脯氨酸、脂褐質(zhì)含量比較(±s)

注:與 B組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與A組相比，#P＜0.05，##P＜0.01

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3 討論

在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)注射D-半乳糖，可產(chǎn)生擬衰老反應(yīng)及氧自由基代謝的損傷，與人體衰老的改變基本一致［5］。自由基的累積損傷是皮膚衰老的重要原因，是導(dǎo)致標(biāo)志皮膚衰老的脂褐質(zhì)、黑色素和蠟樣質(zhì)沉積的重要因素;自由基堆積還可使具有合成膠原能力的成纖維細(xì)胞受損，膠原蛋白合成減少，細(xì)胞內(nèi)羥化酶失去羥化功能，羥脯氨酸的生成減少，導(dǎo)致皮膚松弛、皺紋增多。SOD是體內(nèi)重要的自由基清除劑，是惟一能特異性清除衰老啟動(dòng)因子O2－的抗氧化酶，提高SOD活性可抑制脂褐質(zhì)的沉積。GSH-Px也是體內(nèi)重要的抗氧化酶，能特異地催化還原型谷胱甘肽對(duì)過氧化氫的還原反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性。MDA的水平往往可反應(yīng)活性氧的損傷效應(yīng)［6，7］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)G可明顯提高衰老小鼠肝組織中SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量;可顯著提高衰老小鼠皮膚組織中SOD活性及羥脯氨酸含量，降低皮膚MDA和脂褐質(zhì)的含量。表明FG具有一定的延緩皮膚衰老的功效。其作用機(jī)制可能是通過提高SOD、GSH-Px活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力即增強(qiáng)清除自由基的能力，進(jìn)而抑制自由基反應(yīng)，從而抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA以及脂褐質(zhì)的生成和積聚，減輕了對(duì)成纖維細(xì)胞和膠原蛋白的損害。

據(jù)報(bào)道［8］，F(xiàn)G在體外具有直接清除活性氧自由基的作用，并能抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。FG在動(dòng)物體內(nèi)的抗氧化途徑可能有兩種:一種是FG直接清除過多的自由基;另一種是FG通過提高動(dòng)物抗氧化酶活力的間接作用來清除自由基。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明后一種可能途徑是存在的，至于其延緩皮膚衰老的作用是否和直接清除體內(nèi)自由基有關(guān)尚待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。

［1］趙俊超.皮膚衰老機(jī)制及抗衰老研究進(jìn)展［J］.中國老年學(xué)雜志，2008，28(12):1146-1148.

［2］來吉祥，何聰芬，董銀卯.皮膚衰老機(jī)理及延緩衰老化妝品的研究進(jìn)展［J］.中國美容醫(yī)學(xué)，2009，18(8):1208-1212.

［3］季宇彬，姜薇，范玉玲，等.甘草黃酮的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2004，35(9):5-6.

［4］吳正平.紅景天多糖對(duì)亞急性衰老模型小鼠皮膚衰老的延緩作用［J］.中國老年學(xué)雜志，2011，31(5):821-822.

［5］王少康，孫桂菊，張建新，等.亞急性衰老動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)［J］.東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2002，21(3):217-220.

［6］張洪泉，余文新.中華抗衰老醫(yī)藥學(xué)［M］.北京:科學(xué)出版社，2000:82-113.

［7］李素云，王立芹，鄭稼琳，等.自由基與衰老的研究進(jìn)展［J］.中國老年學(xué)雜志，2007，27(20):2046-2047.

［8］吳碧華，龍存國，王曉明，等.甘草總黃酮清除自由基作用的體外實(shí)驗(yàn)探討［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，16(1):3-5.