旋覆花的研究進(jìn)展

何國云 李鋼 耿紅梅

旋覆花主要來源有二，一為旋覆花(Japanese inula)，葉基部漸窄，無小耳，《證類本草》的隨州旋覆花與《本草綱目》的旋覆花圖即為此種；二為歐亞旋覆花(inula britannica)，葉基寬二抱莖，有小耳，花序較大，《救荒本草》與《植物名實(shí)圖考》旋覆花為此種，此二者為傳統(tǒng)藥用正品旋覆花。旋覆花主要分布于我國、韓國和日本，我國主產(chǎn)于河南、河北、江蘇、浙江、新疆、東北等地[1]。

中國藥典中旋覆花的檢驗(yàn)方法只有性狀鑒別和簡單的薄層鑒別，沒有含量測定，不能檢出其有效成分的含量，所以經(jīng)常出現(xiàn)真假難辨、以假充真的現(xiàn)象。為了更好地開發(fā)利用旋覆花藥用價(jià)值，保證藥品質(zhì)量，本文就近十年來旋覆花的鑒別、化學(xué)成分、含量測定、作用機(jī)制以及藥效學(xué)的研究進(jìn)展?fàn)顩r做一系統(tǒng)綜述。

1 鑒別

旋覆花為常用傳統(tǒng)中藥，目前國內(nèi)市場上主流商品為旋覆花，因其同科屬的植物有10多種，歷史上各地用藥習(xí)慣有不同，故市售品混淆現(xiàn)象極為嚴(yán)重。近年來還有引起皮膚過敏反應(yīng)[2-3]的報(bào)道，應(yīng)引起足夠的重視。

張西國等[4]、蔡崇高等[5]從性狀鑒別真?zhèn)涡不ㄋ幉模欨P禔等[6]研究了歐亞旋覆花的顯微鑒別要點(diǎn)，張曉紅等[7]總結(jié)了正品旋復(fù)花中摻偽品的鑒別。侯艷鵬[8]等從全國24個(gè)省、市、自治區(qū)收集到27份旋覆花商品藥材，其中18份為日本旋覆花，5份為線葉旋覆花，2份為日本旋覆花和線葉旋覆花的混合品，余2份分別為湖北旋覆花和水朝陽旋覆花，做了HPLC指紋圖譜分析鑒別。

2 化學(xué)成分的提取與分析

2.1 黃酮 耿紅梅[9]采用多種分離技術(shù)對歐亞旋覆花乙醇提取物的正丁醇部位分離純化，根據(jù)其理化常數(shù)測定和光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果從歐亞旋覆花中分得8個(gè)化合物，經(jīng)鑒定為蘆丁、小檗堿、萬壽菊苷、異槲皮苷、槲皮苷、綠原酸、槲皮素和山柰酚，首次從歐亞旋覆花植物中得到蘆丁、小檗堿。耿紅梅等[10]用95%乙醇提取歐亞旋覆花，并用各種柱色譜分離純化，通過測定理化常數(shù)和光譜分析鑒定其結(jié)構(gòu)，結(jié)果分離得到10個(gè)黃酮類化合物，經(jīng)鑒定為菠葉素、6-甲氧基-木犀草素、木犀草素、槲皮素、異鼠李素、山柰酚、蘆丁、萬壽菊苷、異槲皮苷和槲皮苷，首次從歐亞旋覆花植物中得到異鼠李素、槲皮苷。鄧雙炳等[11]采用多種分離技術(shù)對旋覆花乙醇提取物的氯仿和乙酸乙酯萃取部分分離純化，根據(jù)其理化常數(shù)測定和光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果從旋覆花中分得11個(gè)化合物，經(jīng)鑒定為金圣草素，萬壽菊素，槲皮素，木犀草素，山奈酚，旋覆花內(nèi)酯C，旋覆花內(nèi)酯，胡蘿卜苷，β-谷甾醇，大花旋覆花內(nèi)，首次從歐亞旋覆花植物中得到金圣草素。

2.2 揮發(fā)油 查建蓬等[12]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對山西運(yùn)城地區(qū)產(chǎn)歐亞旋覆花揮發(fā)油進(jìn)行化學(xué)成分分析，鑒定了歐亞旋覆花揮發(fā)油中的62個(gè)成分，約占揮發(fā)油總成分的68.4%，主要成分為2，3，4，5-四氫-1-苯并庚英3醇(相對含量4.3%)。

2.3 多糖 付焱等[13]從歐亞旋覆花地上部分提取出水溶性多糖，用苯酚-硫酸法對其進(jìn)行了測定和初步藥理試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)表明，歐亞旋覆花多糖有一定的免疫增強(qiáng)作用。

2.4 三萜和甾體化合物 吳一兵等[14]從歐亞旋覆花中分離出三萜和甾體化合物，丁海新等[15]以小麥赤霉病菌和小麥白粉病菌為活性跟蹤菌種，從旋覆花花中分離得到3種殺菌活性化合物，鑒定為倍半萜類化合物和三萜類化合物。

2.5 旋覆花內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的改造 劉守信等[16-17]對旋覆花的主要抗腫瘤成分旋覆花內(nèi)酯進(jìn)行了結(jié)構(gòu)改造，以此為原料，合成了近50多種新化合物，發(fā)現(xiàn)了多種活性好的化合物。

3 化學(xué)成分的含量測定

3.1 旋覆花內(nèi)酯 許俊博等[18]用反相高效液相色譜法，用SpherisorbODS柱，流動相為甲醇-水(40:55)，檢測波長210 nm，測定了旋復(fù)花中旋復(fù)花內(nèi)酯的含量，結(jié)果表明旋復(fù)花內(nèi)酯線性范圍為7.984～159.7 μg/ml，r=0.9998，平均回收率97.4%，RSD 1.4%。

3.2 總黃酮 耿紅梅等[19]用可見紫外分光光度法對歐亞旋覆花中總黃酮的含量進(jìn)行了測定，結(jié)果旋覆花中總黃酮含量為5%～8%。

3.3 綠原酸 耿紅梅[20]高效液相色譜法，采用色譜柱為 Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(10:90)，流速為1.0 ml/min，檢測波長為326 nm，測定了歐亞旋覆花中綠原酸的含量，結(jié)果綠原酸在0.20～8.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9996)，回歸方程Y=5342.2X+1960.5。平均回收率42%，RSD為1.9%。

3.4 咖啡酸 楊斌等[21]用高效液相色譜法測定了旋復(fù)花中咖啡酸含量，結(jié)果咖啡酸的進(jìn)樣量線性范圍為0.017 38～0.434 μg(r=0.9995)， 平 均 回 收 率 為 99.40%，RSD=2.03%(n=6)。吳懷恩等[22]用正交試驗(yàn)確定旋覆花配方顆粒中綠原酸、咖啡酸的最佳提取工藝，并采用HPLC法[1-2，4]同時(shí)測定制劑中綠原酸、咖啡酸含量，為旋覆花配方顆粒的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

3.5 槲皮素 楊玲娟等[23]高效液相色譜法，采用ZORBAX eclipse XDB C8色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-磷酸(0.2%)，體積比為65:35，檢測波長為370 nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，槲皮素在5.0～100.0 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%(n=6)，平均加標(biāo)回收率為97.1%槲皮素在5.0～100.0 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)， RSD=為1.2%(n=6)，平均加標(biāo)回收率為97.1%。

3.6 鞣質(zhì) 萬祺等[24]采用干酪素法合滴定法對旋覆花水提物中鞣質(zhì)進(jìn)行含量測定，結(jié)果干酪素法鞣質(zhì)含量為5.96%，RSD=1.68%(n=3)；絡(luò)合滴定法測得含量為8.32%，RSD=2.09%(n=3)。

4 藥理作用機(jī)制及藥效學(xué)研究

4.1 抗氧化作用 耿紅梅等[25]采用大腦中動脈栓塞法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，觀察歐亞旋覆花總黃酮(TFIB)對腦缺血-再灌注后大鼠神經(jīng)癥狀改善情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TFIB對大鼠缺血-再灌注損傷大腦具有顯著的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與TFIB抗氧化作用有關(guān)。

胡建平等[26]對歐亞旋覆花總黃酮提取物對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，TFIB對腦缺血再灌注損傷有顯著的保護(hù)作用，其作用機(jī)制與抑制并減少體內(nèi)脂質(zhì)過氫化物的產(chǎn)生、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化活性有關(guān)。張紅兵等[27]研究觀察歐亞旋覆花總黃酮對內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的血管組織氧化應(yīng)激和新生內(nèi)膜形成的干預(yù)效應(yīng)，在細(xì)胞和分子水平上闡述了旋覆花總黃酮能夠抑制血管新生內(nèi)膜形成和由此導(dǎo)致的血管狹窄，抑制VSMC氧化應(yīng)激。TFIB是一種有效的血管保護(hù)制劑，通過抗氧化而減輕血管內(nèi)皮損傷和內(nèi)膜增生程度。

近期韓國科學(xué)家Kim S R[28]從旋覆花正丁醇提取物中分離出的黃酮類化合物通過DPPH試驗(yàn)證明有抗氧化活性，通過抑制鈣內(nèi)流、降低細(xì)胞內(nèi)過氧化物水平和增加谷胱甘肽水平而對抗谷氨酸對大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的損傷，產(chǎn)生明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。

4.2 抗腫瘤作用 魏海青等[29]用MTT比色法，檢測低、中、高個(gè)劑量范圍旋覆花素對小鼠肝癌H22細(xì)胞株、小鼠肉瘤S180細(xì)胞株、人肺腺癌A549細(xì)胞株、人卵巢癌SK-OV3細(xì)胞株及人宮頸癌Hela細(xì)胞株的細(xì)胞毒性作用。測定旋覆花素對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用，并計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。倒置顯微鏡下及激光共聚焦顯微鏡下觀察旋覆花素對上述5種腫瘤細(xì)胞形態(tài)的影響，結(jié)果表明旋覆花素具有抗腫瘤作用，并有細(xì)胞株選擇性。

4.3 抗增生作用 萬鯤等[30]研究了不同濃度的旋覆花提取物對成纖維細(xì)胞形態(tài)的影響，結(jié)果表明均能使其改變，抑制細(xì)胞增殖，濃度在500 μg/ml以下無明顯的細(xì)胞毒作用。

狄柯坪等[31]采用主動脈球囊損傷后血管再狹窄動物模型，觀察旋覆花提取物對內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜形成的影響，以及旋覆花素對內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜形成過程中血管壁粘附分子OPN、ICAM-1、ILK表達(dá)的影響[32]，結(jié)果在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組損傷處血管壁血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)大量增生。

4.4 抗炎作用 王英杰等[33]把30只SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組及旋覆花素給藥組，海馬內(nèi)注射Aβ25～35制備AD大鼠模型，給藥組每天給予旋覆花素26 mg/(kg·d)，模型組給予等量溶劑，分兩次灌胃，共21 d。用Morris水迷宮測定大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，免疫組化及Western印跡法測定大鼠海馬iNOS、NF、κB蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，旋覆花素的抗炎作用可能是改善AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用機(jī)制之一。

4.5 對肝炎的預(yù)防作用 李宗友[34]對日本旋復(fù)花中的醋酸蒲公英甾醇酯進(jìn)行分離、鑒定并做了小鼠急性肝損傷實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示對實(shí)驗(yàn)性肝炎有預(yù)防作用。

4.6 抗真菌作用 焦斌等[35]采用生長速率法、孢子萌發(fā)法，分別測定了旋覆花花序氯仿萃取物對13種植物病原真菌的離體抑菌活性，并測定了其對黃瓜灰霉病的防治效果。結(jié)果表明，在劑量為1.0 g/L時(shí)，氯仿萃取物對小麥全獨(dú)病菌、西瓜炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、蘋果炭疽病菌、黃瓜灰霉病菌和番茄果腐病菌的菌絲生長有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率均在50%以上，其中對小麥全獨(dú)病菌的抑制作用最強(qiáng)，抑制率高達(dá)100%，對西瓜炭疽病菌和番茄果腐病菌孢子萌發(fā)抑制率達(dá)92.90%和82.92%。在10.0 g/L劑量下，氯仿萃取物對黃瓜灰霉病的治療效果和保護(hù)效果分別為54.27%和76.68%(48 h)，其中保護(hù)效果與對照藥劑0.4g/L施佳樂無顯著差異。

4.7 其他單俊杰等[36]研究發(fā)現(xiàn)旋覆花多糖具有抗便秘作用。趙修南[37]研究發(fā)現(xiàn)旋覆花多糖具有顯著降血糖活性，對血脂紊亂也有一定改善作用，可能作用于胰腺，對糖尿病引起的胰腺損傷有保護(hù)作用。王建華[38]對歐亞旋覆花特征性成分旋覆花素進(jìn)行了鎮(zhèn)咳、祛痰活性的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)旋覆花素小鼠口服給藥具有著顯著的鎮(zhèn)咳活性，旋覆花素具有鎮(zhèn)咳祛痰作用。

近十年來大量藥學(xué)工作者對旋復(fù)花的鑒別、化學(xué)成分、含量測定、作用機(jī)制以及藥效學(xué)做了很多研究，尤其是關(guān)于歐亞旋覆花I.britannica L.的研究取得了很大的進(jìn)展，為旋覆花的正確及合理利用提供了嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)依據(jù)，但是對日本旋覆花Inula japonica Thunb.的研究還有待繼續(xù)。

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