度冷丁溶液對成年大鼠臀肌攣縮癥的影響

吳 興，韓永臺，趙建勇，陳廣先，于從海，杜志國，王華柱，史繼軍

河北省滄州中西醫結合醫院骨五科（滄州 061000）

臀肌攣縮癥（gluteal muscle contracture，GMC）又稱臀肌纖維化，是由多種原因引起的臀肌及筋膜纖維攣縮變性，導致髖關節功能受限，表現出特有的步態、體征、髖關節功能障礙，特別是髖內收困難和髖外展畸形的臨床綜合征[1]。確切的發病機制尚未完全闡明。苯甲醇做青霉素溶媒是最危險的因素[2]，近年來隨著對苯甲醇副作用的認識，臨床上已棄用苯甲醇作為青霉素的溶媒，減少了臀肌攣縮癥患者的數量。但近些年來一些有長期度冷丁注射史的臀肌攣縮癥患者逐漸增多。為研究長期肌肉注射度冷丁對臀肌纖維化的影響作用，進行了此項動物實驗。

1 材料與方法

1.1 材料 健康成年Wistar大鼠90只，8周齡，體重（200±20）g，由河北醫科大學動物實驗中心提供。度冷丁購自沈陽第一制藥廠，規格為2 mL：100 mg。苯甲醇注射液購自河南華利藥業有限責任公司，規格為2 mL：40 mg。生理鹽水購自石家莊制藥廠，規格為250 mL/袋。青霉素購自石家莊制藥廠，規格為160萬U/瓶，批號：X1110402。

1.2 分組及模型制備

大鼠用標準飼料喂養1 周，按照機械抽樣法隨即分為3組：A組為陽性對照組30只，注射苯甲醇青霉素溶液8周；B組為陰性對照組30只，注射生理鹽水青霉素溶液8周；C組為實驗組30只，注射度冷丁溶液8 周。3 組均再飼養2 周后處死。均選用左臀部注射相應藥物，每日注射2 次，每次0.1 mL，中間間隔6 h以上。

1.3 觀察指標 每日觀察大鼠步態變化，下肢畸形，髖關節被動活動時彈響情況。動物處死后取注射側臀肌觀察肌肉顏色，攣縮帶、出血點等，觸摸肌肉彈性變化。

顯微鏡下仔細將臀部肌肉完整取出，剔除表面的軟組織，立即置入福爾馬林固定液中固定，梯度乙醇脫水：80%、90%、100%、100%乙醇各1 h，二甲苯透明2 h，浸蠟2 h，石蠟包埋。將包埋好的組織塊在切片機上連續切片，厚度為4 μm，從每塊標本中央區的連續切片中選取1張裱于蛋白甘油處理的載玻片上，然后在60 ℃溫箱內干燥24 h。將切片置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脫蠟各15 min，浸入蘇木素3 min，自來水沖洗。用1%鹽酸分色，浸入伊紅2 min，自來水沖洗。梯度乙醇脫水：70%乙醇3 min、80%乙醇5 min、90%乙醇5 min、100%乙醇Ⅰ15 min、100%乙醇Ⅱ15 min，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各15 min。中性樹膠封片后MASSON 染色。顯微鏡下觀察肌肉纖維排列情況，膠原纖維數量，結締組織數量，細胞核大小，中性粒細胞及淋巴細胞數量等。

1.4 統計學分析 多組間計量資料用行×列χ2比較，如組間有差異（P ＜0.05），進一步用bonferoni法進行多重比較，P＜0.05認為有統計學差異。

2 結果

2.1 步態觀察 A 組注射8 周后，21 只跛行十分嚴重；B 組在第7 周時1 只有步態異常表現，行走稍跛行，停止注射2 周后恢復。其余注射期間未發現步態異常。C 組在注射8 周后11 只步態異常，停止注射后未見明顯恢復。3組間比較P均小于0.05，三組間比較均有統計學差異。

2.2 臀肌病理學變化

2.2.1 肉眼觀察 A組8周后21只大鼠臀肌色澤蒼白，可見攣縮帶，累及臀大肌全層，肌肉無彈性，呈腱樣組織，髖關節活動受限（圖1的1、2）。B組8周后可見肌肉顏色紅潤，未見攣縮帶，肌肉彈性好。1只發現纖維攣縮束帶。C組8周后11只大鼠臀肌色澤蒼白，肌肉顏色紅潤，部分可見攣縮帶，未累及臀大肌全層，肌肉彈性差，停止注射后未見恢復（圖1 的3、4）。3 組間比較P 均小于0.05，3 組間比較均有統計學差異。

圖1 各組大鼠臀肌改變肉眼特點

2.2.2 光鏡觀察 A組8周后21只可見肌纖維排列紊亂卷曲，肌細胞明顯萎縮，胞核增多并延肌纖維呈串珠樣排列，肌纖維間隙明顯增高，較多中性粒細胞及淋巴細胞浸潤，大量膠原纖維增生，纖維化區域可見大片致密膠原纖維結締組織，粗大膠原束內可見一些細長梭形的纖維細胞，與膠原纖維平行走向，同肌腱結構相似（圖2 的A1、A2）。B 組8 周后可見肌纖維排列整齊，核大小適中，染色質著色均勻；可見中性粒細胞及淋巴細胞浸潤。C組8周后11只肌纖維排列紊亂，胞漿著色較淡，核固縮，肌纖維間間隙明顯增寬，中性粒細胞及淋巴細胞浸潤，肌纖維間及肌束間可見膠原纖維。其它肌纖維正常（圖2的B1、B2）。

3 討論

圖2 各組大鼠臀肌改變的鏡下特點

大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液注射8周后大部分大鼠出現GMC的癥狀，停止注射2周后癥狀無改善。大體觀察可見肌肉顏色蒼白，彈性差，膠原纖維增生，纖維化區域可見致密膠原纖維結締組織。光鏡下可見粗大膠原束內可見一些細長梭形的纖維細胞，與膠原纖維平行走向，同肌腱結構相似。研究發現，大鼠臀肌注射苯甲醇青霉素溶液8 周可導致GMC，在停止注射后，GMC 不可恢復。大鼠臀肌注射生理鹽水青霉素溶液2 個月，并未在全部鼠制作出GMC模型。只有1只大鼠出現了行走跛行，大體觀察臀肌可見攣縮帶，肌肉彈性稍差，髖關節活動無明顯差異，光鏡下可見肌纖維排列較規則，胞漿著色尚均勻，肌纖維間隙增寬，肌纖維間及肌束間均可見綠染膠原纖維，可見頻繁肌肉注射生理鹽水青霉素溶液是GMC 的一個影響因素。但對影響因素的大小，本實驗因實驗時間較短，未得出結論。大鼠在注射度冷丁溶液8周后11只步態異常，停止注射后未見明顯恢復。大體觀察臀肌色澤蒼白，肌肉顏色紅潤，部分可見攣縮帶，未累及臀大肌全層，肌肉彈性差。光鏡下可見肌纖維排列紊亂，胞漿著色較淡，核固縮，肌纖維間間隙明顯增寬，中性粒細胞及淋巴細胞浸潤，肌纖維間及肌束間可見膠原纖維。其它肌纖維正常。研究發現，臀肌注射度冷丁溶液8 周可導致大鼠GMC，在停止注射后，GMC 不可恢復。通過幾種藥物對大鼠臀肌影響作用的比較，認為苯甲醇青霉素注射對大鼠GMC 的影響作用大于度冷丁和生理鹽水青霉素注射，度冷丁注射對大鼠GMC的影響作用大于生理鹽水青霉素注射。

在本實驗中，注射苯甲醇青霉素溶液造成的患GMC大鼠最多，生理鹽水青霉素溶液對大鼠GMC的影響最為輕微。苯甲醇作為溶媒可以在注射時起到止痛的作用，因此在上個世紀八十年代應用較多，隨后長期注射苯甲醇溶液可以導致兒童及成人GMC被發現，國內諸多學者對此做過相應的臨床及實驗室研究[3]。因此苯甲醇溶液現在已基本不再作為溶媒使用[4]。本實驗再次證明了苯甲醇作為溶媒肌注引起GMC的危險性，所以在臨床上應避免使用苯甲醇溶液作為溶媒使用。目前普遍使用的生理鹽水溶媒有無導致GMC的作用，在本實驗中未得出陽性結果，有待于進一步研究。近年來有長期度冷丁注射史的成人患者逐漸增多。長期臀肌注射度冷丁是不是GMC 的影響因素，國內外未查及此方面相關報道。通過本實驗發現，長期注射度冷丁溶液有可能是GMC的一個危險致病因素。因此在臨床工作中，遇到GMC的患者應詢問有無長期度冷丁注射史，并告知需長期臀肌注射杜冷丁溶液的患者，長期臀肌注射杜冷丁溶液有GMC的風險。

總之，長期肌肉注射度冷丁溶液有可能是GMC的一個危險致病因素，臨床上尚應避免使用苯甲醇溶液作為溶媒使用。

[1]盧浩浩,劉國輝,楊述華,等.臀肌攣縮癥病因及診斷的研究進展[J]. 中國矯形外科雜志,2007,15(3):207-209.

[2]唐學陽,劉利君,辛文瓊,等.取消苯甲醇肌注對預防臀肌攣縮癥的初步評價[J]. 現代預防雜志,2009,36(19) :3789-3791.

[3]李群偉,景學安,吳多文,等.青霉素溶液對大鼠臀肌纖維化影響的實驗觀察[J]. 泰山醫學院學報,2002,23(4):334-336.

[4]王劍,孔繁增,蘇峰,等.臀肌攣縮發病聚集區人群干預效果的前瞻性觀察[J]. 河北北方學院學報(醫學版),2007,24(2):5-8.