C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌中的表達及相關性

張繼運 沙新海 于明濤

乳腺癌是1種嚴重威脅婦女健康的惡性腫瘤，其發生、發展和轉移是1個極其復雜的生物學過程，是多因素、多基因、多步驟突變的結果[1]。本研究采用免疫組化方法檢測乳腺癌組織中C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF的表達，探討其與乳腺癌臨床病理特征的關系，進而探討它們之間的相互關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2010年1月～2011年12月診治的72例乳腺癌標本。患者均為女性，年齡23～76歲、中位年齡47歲。術前患者均未做放、化療。72例中浸潤性導管癌34例，浸潤性小葉癌4例，單純癌17例，髓樣癌8例，硬癌6例，黏液腺癌3例。乳腺癌Ⅰ期20例，Ⅱ期33例，Ⅲ期19例。腫瘤大小≤2 cm 26例，>2 cm 46例。有腋窩淋巴結轉移42例，無腋窩淋巴結轉移30例。

1.2 方法

所有標本經4%中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm連續切片，免疫組化染色均選用福州邁新公司SP試劑盒，免疫組化染色用PBS代替一抗作陰性對照，光學顯微鏡下觀察著色反應。

1.3 結果判定

C-erbB-2蛋白以細胞膜或細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性判定標準；VEGF、p53蛋白均以細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性判定標準。光學顯微鏡下觀察：以細胞膜及細胞核出現棕黃色或棕色顆粒的細胞作為陽性細胞，根據整張切片中陽性細胞占全部細胞的比例定為：100個高倍視野陽性著色細胞數<10%為"-"；陽性細胞數10%～30%為"+"；陽性細胞數31% ～50%為"++";陽性細胞數>50%為"+++"。Ki-67定位于腫瘤細胞核，呈棕黃色。根據陽性腫瘤細胞數的比例分：不著色為(-)，<10%為(+)，10%～50%為(++)，>50%為(+++)；Ki-67>10%為陽性表達。

1.4 統計學方法

將實驗結果整理后建立數據庫，應用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計數資料比較采用χ2檢驗。以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 在乳腺癌組織中的表達

C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌組織中陽性表達率分別為47.2%、48.6%、56.9%、65.3%。C-erbB-2表達與淋巴結轉移、ER、PR有關；p53表達與腫塊大小無關，與淋巴結轉移、ER、PR有關；Ki-67、VEGF表達與腫塊大小、淋巴結轉移顯著相關，但與ER、PR無關，見表1。

2.2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER及PR之間的相關性

Spearman相關性分析發現,,ER和PR呈正相關；C-erbB-2與ER、PR呈負相關 ；p53與ER和PR呈負相關，p53、Ki-67、VEGF之間均呈正相關，見表2。

表1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 表達與臨床病理特征的關系(例)

表2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER、PR之間的相關系數

注：▲▲為P<0.01 ，▲為P<0.05

3 討論

乳腺癌是危害婦女健康的常見惡性腫瘤之一。在乳腺癌的發生、發展過程中諸多因素可以影響腫瘤細胞的生物學行為。傳統判斷乳腺癌預后的指標有年齡、月經狀況、腫瘤大小、淋巴結轉移情況、組織分類分級、雌激素受體表達情況等。將傳統預測指標與分子生物指標相結合能更好地預測乳腺癌患者的生存率[2]。

本研究中ER和PR呈正相關，與文獻報道一致。同時我們還發現，C-erbB-2過度表達與ER、PR陽性表達呈負相關，提示ER、PR和C-erbB-2信號轉導通路上存在某些關聯[3]。ER在雌激素作用下可抑制C-erbB-2表達,當ER表達下降時，C-erbB-2表達增強，C-erbB-2過度表達可阻止內分泌治療的反應。

本研究乳腺癌組織中C-erbB-2的陽性表達率為47.2%，且C-erbB-2的表達與淋巴結轉移、雌孕激素受體均有相關性，說明有淋巴結轉移或雌、孕激素受體陰性患者C-erbB-2的陽性表達率更高。C-erbB-2被認為是與乳腺癌發生發展密切相關的原癌基因[4]，參與調控細胞生長增殖、分化，其產物過度表達提示惡性程度高、復發率高，具有更強的侵襲轉移能力，預后差。

本研究顯示，p53的陽性表達率為48.6%，p53與ER、PR負相關。p53基因突變與乳腺癌的發生密切相關。野生型p53是隱性抑癌基因，在細胞的生長過程中扮演著“分子警察”的角色，對細胞基因的完整性起著監督作用[5,6]。p53基因在有淋巴結轉移的乳腺癌組織中表達更高，是判斷乳腺癌預后的良好指標。Mao等[7]亦證實p53和ER呈負相關。p53能正向激活EGFR的表達而促進細胞增殖；可增加ER和EGFR/HER-2旁路途徑，抵抗4-羥基三苯氧胺(OHT)細胞毒性作用[8]，影響內分泌治療，但目前仍認為其不是1個獨立判斷預后的指標。

本研究顯示，Ki-67的陽性表達率為56.9%，Ki-67表達情況與原發灶的大小及淋巴結轉移密切相關，Ki-67與VEGF 呈正相關。Ki-67抗原是細胞增殖相關蛋白，僅在增殖細胞核中表達，被認為是較理想的檢測細胞增殖活性的指標，用以指導乳腺癌的治療。Ki-67是1種與細胞增殖有關的核抗原，也是目前較常用的核增殖標記物[9,10]，Ki-67陽性表達者預后不良。

本研究顯示，VEGF在乳腺癌組織中的陽性表達率為65.3%，在有淋巴結轉移及腫瘤體積較大的癌組織中陽性表達率更高，VEGF是最強的促血管內皮細胞分裂劑，血管生成對腫瘤的發生、侵襲和轉移至關重要，是腫瘤增殖與發生轉移的主要影響因素。VEGF高表達增加了瘤細胞轉移的危險性[11]，故認為VEGF可以作為判斷乳腺癌預后的指標之一。

總之，檢測CerbB-2、p53、Ki-67、VEGF的突變對乳腺癌惡性程度、腫瘤的增殖能力以及預后的判斷均具有重要意義[12]，聯合雌孕激素受體檢測有利于更好地評估乳腺癌的生物學行為及增殖活性，提高對乳腺癌患者預后判斷的準確性，并對臨床治療有重要的指導意義。

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