DC/CIK在非小細胞肺癌中的應用進展

叢珊亭 時圣彬綜述 馬廷行審校

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,其中非小細胞肺癌占80% 以上， 確診時多數患者已屬于中晚期,化療、放療等是治療中晚期非小細胞肺癌的有效方法，但生存期的改善仍不理想，主要原因為局部控制困難和遠處轉移[1]。惡性腫瘤的發生與發展與機體的免疫功能失調密切相關,免疫系統無法識別和清除惡變和突變的細胞，致使腫瘤細胞逃逸機體免疫系統的監視和清除；同樣，由于傳統的放化療對惡性腫瘤是指數性殺傷，及時清除惡性腫瘤綜合治療后的微小殘留病變,最終需要動員機體的免疫功能方可達到。生物免疫治療對提升機體免疫監視功能，殺傷體內殘余腫瘤細胞起到重要作用。

1 DC

1.1 DC的生物學作用

樹突狀細胞(dendritic cells,DC ) 是目前功能最強的抗原呈遞細胞( antigen presenting cell,APC )，在機體的免疫應答中起著重要的調控作用，是機體免疫應答的主要啟動者，為其用于惡性腫瘤的治療開辟了新的道路[2]。DC在外周組織攝取抗原后逐漸成熟，同時伴隨遷移，通過淋巴管和(或)血循環進入次級淋巴器官。遷移至外周淋巴器官T細胞區的成熟DC高表達MHCⅠ類/Ⅱ類分子和共刺激分子(B7、CD40)等，能有效地將加工、處理后的抗原以抗原肽-MHC-Ⅱ類分子復合物的形式提呈給初始T細胞，并使之激活[3]。DC所具有的特性，使它們能夠有效地激活T細胞和調解腫瘤特異性免疫反應[4]。肺癌細胞裂解物致敏的樹突狀細胞能夠誘導腫瘤細胞特異性免疫反應在肺癌患者中表現出良好的臨床效果[5]。腫瘤抗原致敏的DC與T細胞共培養，可增加T細胞的抗腫瘤活性[6]。

1.2 DC的臨床應用

文洽先等分離患者外周血單核細胞,用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子( rhGM2CSF)和白介素24 ( rh IL24)體外誘導DC治療晚期肺癌。7例有可評價病灶的患者中,1例部分緩解( PR) 、1例輕微緩解(MR) 、3例穩定( SD) 、2例進展(PD)[7]。施玲燕等采用靜脈輸注CIK細胞對43例腫瘤患者進行治療，結果顯示CIK細胞治療腫瘤的總有效率為32.6%;治療過程中的主要不良反應是發熱,占治療總人數的20.9%,體溫37.5～38.5 ℃,發熱在2 h內自動緩解[8]。

2 CIK

2.1 生物學作用

細胞因子誘導的殺傷細胞( cytokine induced killer cell,CIK)是1種高效、新型疫活性細胞,是惡性腫瘤過繼免疫治療的重要手段之一。CIK細胞是1種非MHC限制性的高效溶腫瘤細胞毒性T細胞,占外周血淋巴細胞的1%～5%。CIK細胞是人外周血單個核細胞在體外經多種細胞因子刺激后獲得的一群異質性細胞,其主要效應細胞表面既有T細胞表面標志(CD3),也有NK細胞表面標志(CD56),因而兼有T淋巴細胞抗瘤活性和NK細胞非MHC 限制性殺瘤的特點[9]。Hongeng等用CIK細胞對多種腫瘤細胞株進行體外殺傷實驗,研究結果表明CIK細胞對這些腫瘤細胞株的溶瘤活性在45.5%～64.5%之間,顯著高于PBL的溶瘤活性( 8% ～12%)[10]。Cancer Biother Radiopharm 報道了CIK細胞聯合多西紫杉醇在體內外都可明顯增強多西紫杉醇對多藥耐藥肺腺癌細胞的抗腫瘤活性。這表明CIK細胞將適合消滅對化療藥物耐藥的腫瘤細胞。如果CIK細胞與化療聯合可應用于臨床治療，可能會抵制惡性細胞的協同作用，并可能有利于克服癌癥患者的多藥耐藥[11]。Thorne等的最新研究顯示，CIK細胞與有溶瘤作用的病毒相結合能產生強大的協同抗腫瘤作用，可一定程度上解決靶向生物治療中存在的遞呈及定向等難題[12]。CD4(+)、CD25(+)調節性T細胞(Tregs)已被證明能夠抑制細胞毒性T細胞介導的免疫反應。這些結果表明，調節性T細胞能抑制CIK細胞的抗腫瘤活性[13]。一項研究表明，細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)對人類肺癌細胞在體內外的抗腫瘤活性進行了評價。雖然外周血CD3(+)、CD56(+)CIK細胞在新鮮人外周血單核細胞少見，但在加入IL-2后會很快擴增。在1個30∶1的效應靶細胞比例中，CIK摧毀了98%的NCI-H460人肺癌細胞。這項研究表明，外周血CD3(+)、CD56(+)CIK細胞可作為過繼免疫治療用于肺癌患者[14]。

2.2 臨床應用

CHANG PING WU 等的一項研究評估了CIK細胞聯合化療與單獨化療的臨床療效。他們將59例晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者隨機分為A、B組，A組單用化療，多西紫杉醇75 mg/m2d1，順鉑25 mg/m2d1～4，每3周為1個周期；B組多西紫杉醇75 mg/m2d1，順鉑25 mg/m2d1～4，化療結束后第5天進行CIK細胞輸注，共回輸5次。A、B組的整體反應率(ORR)分別為43.3%和44.8%。疾病控制率(DCR)B組高于A組(89.7% vs 65.5%，P值=0.030)。疾病進展時間分別為4.67個月(95%CI為3.98～6.02個月)和6.65個月(95%CI為4.70～7.30個月)。中位生存時間分別為15.0個月(95%CI為11.04～18.96個月)和11.0個月(95%CI為7.88～14.1個月)，與A組相比，B組的患者有較長的無進展存活率(P=0.042)和總生存率(P=0.029)。在B組患者中無嚴重的不良反應的增加[15]。另一項研究將120例非小細胞肺癌分為3組：支氣管動脈灌注；傳統靜脈化療；支氣管動脈灌注加CIK細胞輸注。經過2個周期的治療后評價臨床療效和不良反應。聯合組有效率比傳統靜脈化療組高，并有顯著差異(Chi-square=4.721，P=0.03)。聯合組的不良反應顯著低于傳統靜脈化療組。腫瘤進展率支氣管動脈灌注組高于聯合組(Chi-square=4.287，P=0.038)[16]。

3 DC/CIK

3.1 DC/CIK聯合培養

DC通過受體的方式攝取外來抗原，并能與這些抗原表面的MHCⅠ類和Ⅱ類分子結合，刺激初始型CD8+T細胞和CD4+T細胞活化。DC除了誘導抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞外，還可通過直接或間接方式影響B細胞的增殖，活化體液免疫應答[17]。樹突狀細胞是主要的抗原提呈細胞。他們能捕獲和處理腫瘤抗原，表達淋巴細胞共刺激分子，分泌細胞因子等來啟動免疫反應。研究發現DC刺激CIK細胞后，細胞毒活性顯著增強[18]。DC-CIK聯合培養與CIK相比抑瘤率顯著增高(62.9% vs 41.5%，P<0.05)[19]。DC和CIK細胞能夠促進化療藥物的抗腫瘤作用。聯合培養的DC與CIK細胞能夠產生新的細胞群，其細胞毒性和細胞增殖活性比CIK細胞高[20]。CIK細胞和A549細胞裂解物抗原致敏的DC細胞共培養后與單獨的CIK和未致敏的DC-CIK細胞相比表現出更強的殺傷活力(P<0.05)[21]。因此，將具有高效殺傷活性的CIK細胞和具有強大腫瘤抗原提呈能力的DC聯合應用治療惡性腫瘤，無疑會起到協同作用。

3.2 臨床應用

一項將84例Ⅰ～Ⅲa期的術后非小細胞肺癌患者隨機分為2組，一組單獨使用化療，另一組給予化療加DC/CIK治療。最終評價2組的DFS和OS。2年的總生存DC/CIK組顯著高于單用化療組(94.7±3.6% vs 78.8±7.0%，P<0.05)，2年的DFS沒有顯著性差異[22]。朱檸等對12 例確診肺癌經標準治療方案治療的患者,取外周血分離單個核細胞(PBMC),體外誘導出DC和CIK細胞共培養。所有患者均接受一定劑量的DC/CIK細胞過繼免疫治療，12 例患者中完全緩解1 例,部分緩解 4 例,病情穩定 1 例,近期有效率為 41.6%,疾病控制率為50%,病情進展共 6 例,其中死亡2 例[23]。周永春等采集70例非小細胞肺癌患者外周血單個核細胞，加入細胞因子定向誘導成CIK及DC細胞，培養的第5天用自體腫瘤抗原(Ag)負載DC細胞，第8天將DC與CIK細胞共培養，14天后將聯合培養的細胞(Ag-DC-CIK)分次回輸給患者。Ag-DC-CIK治療組中Ⅲ、Ⅳ期患者的有效率分別為52.38%和42.85%,與對照組的相應期別(Ⅲ期44.44%，Ⅳ期35.29%)相比有顯著性差異(P<0.05)[24]。

總之，DC/CIK生物免疫治療作為1種新的治療手段，相對于手術、放射治療、化學治療而言，具有非細胞毒性和靶向性。由于缺少大樣本的臨床試驗，許多問題亟需解決，比如生物免疫治療的毒副作用、應用時機、給藥途徑和方法等問題有待于進一步探討。相信隨著臨床試驗的不斷深入，這些問題將會被解決。毫無疑問，生物免疫治療與手術、化療、放療以及靶向藥物有機結合，合理安排將會為腫瘤患者帶來新的希望。

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