乳康健治療奶牛隱性乳房炎試驗研究

曲家華，周慶民，馮萬宇

（黑龍江省獸醫科學研究所，齊齊哈爾 161006）

乳房炎是危害世界奶牛業的主要因素之一。據報道，全世界約有2.2億頭奶牛，其中有1/3的奶牛患有乳房炎［1］，臨床型乳房炎發病率僅2%～3%，而絕大部分是更為普遍的隱性乳房炎［2］。隱性乳房炎因無明顯的臨床癥狀，常不易被發現和重視。隱性乳房炎使泌乳奶牛每年的產奶量下降10%以上［3］，而且降低了牛奶品質，縮短了奶牛使用壽命，增加了后備奶牛的成本、額外勞力費用、藥物開支和獸醫服務費用，還延長產后發情和妊娠時間，給養殖戶帶來了重大的經濟損失。因此，該病是當前畜牧獸醫科技工作者一直關注的重點和研究的熱點，尤其是隱性乳房炎病因復雜、隱蔽性強、不易被發現，更是棘手的難題。近年來，由于我國中草藥資源豐富，且不易產生耐藥性，毒副作用極小，還具有促進機體生長、增強免疫功能及提高機體抗病能力等特點，已成為研究熱點。因此，筆者用純中藥制劑乳康健進行了治療奶牛隱性乳房炎的效力試驗。

1 材料

1.1 動物

某奶牛場經檢測患有隱性奶牛乳房炎的奶牛。

1.2 飼料

TMR全混日糧。

1.3 藥物

乳康健：將蒲公英、金銀花、連翹、秦皮等藥物精選，去雜質，干燥。采用粉碎機將原料藥物加工成均勻的粉末，過篩，細度34～60目。確保加工制成的散劑干燥、疏松、色澤一致。按250 g/袋用塑料袋包裝，用量為每頭牛每天 1～2 袋，連用 7～10 d。

1.4 試劑與儀器

CMT 診斷液（SDS 7.5～12.5 g，NaOH 3.75 g，溴甲酚紫0.025 g，制成250 mL的溶液）；培養基：普通瓊脂培養基，血瓊脂培養基，伊紅美藍培養基，營養肉湯培養基，血清肉湯。95%酒精，革蘭氏染液，生理鹽水。

儀器：pH計，比重計，血細胞計數板，組織離心機，顯微鏡等。

2 方法

2.1 乳樣的采集

無菌采集陽性奶牛的乳樣，采樣前先用溫水清洗，然后用75%酒精棉球消毒乳區，棄去前三把乳汁，然后人工擠出乳樣約10 mL置于滅菌青霉素小瓶中，4℃保存，2 h內接種培養。

2.2 乳汁pH值測定

pH計測定。

2.3 乳汁比重測定

將乳樣倒入100 mL量筒中，置于平臺上。將比重計輕輕放入量筒中，注意避免乳樣溢出且比重計勿觸及量筒壁。待其浮起而穩定不動，且液面無氣泡時，然后視線保持和液面水平進行觀察，讀取與液面接觸處的彎月面下緣最低點處的刻度值。

2.4 乳汁中氯化物含量測定

稱取AgNO34.3 g，加適量無氯離子的蒸餾水，攪拌使其溶解，以250 m L容量瓶定容，充分搖勻，置于暗處備用。取被檢乳樣2.00 mL，放入錐形瓶中，加入K2CrO4指示劑1 mL，在劇烈搖動下用AgNO3標準溶液滴定至出現磚紅色，并經搖動后磚紅色仍不消失時為終點。記錄所消耗標準溶液的體積，計算試樣中氯的質量分數。

2.5 細菌鑒定

2.5.1 細菌的分離培養 將乳樣接種到普通瓊脂和鮮血瓊脂培養基上培養24 h后取出觀察，根據菌落的形態、大小、顏色等將菌落大致分類，然后根據細菌的形態、革蘭氏染色特點仔細分類，排除環境中常在的無致病性細菌。將挑選出來的細菌做進一步純培養，培養方法同上，鏈球菌用鮮血瓊脂進行培養。純培養后鏡檢無雜菌者保存于試管斜面培養基內。

2.5.2 葡萄球菌的分離培養 經無菌操作，分別進行直接分離培養（普通瓊脂平板、普通瓊脂血平板)和選擇性分離培養（高鹽甘露醇瓊脂）。置37℃恒溫箱培養24 h，觀察菌落形態和溶血現象。對可疑單個菌落涂片、染色、鏡檢，進一步觀察其在鑒別培養基上的生長情況，并純化培養可疑菌落，保存備用。

2.5.3 葡萄球菌的鑒定 取已純培養的菌種，分別接種血瓊脂平板、普通瓊脂平板、甘露醇、蕈糖等生化培養基，37℃培養18～24 h，置室溫24 h，觀察生長表現、溶血情況和色素變化；同時接種普通肉湯，37℃培養18～24 h后進行血漿凝固酶試驗。

2.6 隱性乳房炎檢測

用溫水將乳房擦洗干凈，后用0.2%新潔爾滅擦洗乳房，再用75%的酒精溶液消毒乳頭，然后戴上滅菌手套進行人工擠乳，棄去前兩把乳，將4個乳區的乳樣擠到相應的乳汁檢驗盤中，傾斜檢驗盤60°，此時檢驗盤內剩余2 mL左右的乳汁，加入2 mL CMT診斷液，立即水平搖動檢驗盤，使乳汁與試劑充分混合，10 s后觀察，判定標準見表 1。

表1 CMT法判定標準

2.7 乳康健對患牛乳汁中體細胞數的影響和隱性奶牛乳房炎的治療作用

選取經CMT法測定為強陽性奶牛20頭，分為2組，第1組為乳康健治療I組（7頭），供給量500 g/頭，每天1次，連用7 d；第2組為乳康健治療II組（7頭），供給量250 g/頭，每天1次，連用7 d；第3組為空白對照組（6頭），正常飼喂，不給藥。各組于試前用CMT法測定患牛乳汁中體細胞數，并于給藥7 d后分別再用CMT法測定體細胞數，觀察其變化。

表2和表3試驗結果表明，不同劑量的藥物給奶牛應用7 d后，奶牛陽性乳區均出現不同程度的轉陰，乳區陽性率降低，但差異不顯著（P＞0.05）。表明乳康健對隱性乳房炎有良好的治療作用。

表2 乳康健對乳汁中體細胞數的影響

表3 乳康健對奶牛乳區陽性率的影響

3 結果與分析

3.1 pH值測定結果

測定結果見圖1。

圖1 pH值測定結果

3.2 乳汁比重測定結果

測定結果見圖2。

圖2 乳汁比重

3.3 乳汁中氯化物含量測定

結果見圖3。

3.4 細菌學檢查結果

3.4.1 病原菌的種類 在75個隱性乳房炎乳區中選取60個陽性反應（++）乳區，通過初步細菌分離試驗結合顯微鏡檢查發現，奶牛乳房炎主要致病菌有葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及一些雜菌。

3.4.2 革蘭氏染色葡萄球菌檢測結果 結果見表4。

3.4.3 革蘭氏染色鏈球菌檢測 結果見表5。

表4 60個陽性乳區葡萄球菌檢測結果

表5 60個陽性乳區鏈球菌檢測結果

3.5 乳康健治療結果

表6結果表明，用乳康健治療奶牛隱性乳房炎后其乳汁中鏈球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的陽性乳區數明顯下降，其中鏈球菌陽性乳區數下降最明顯，治療有效率最高，達87.5%，其次是大腸桿菌。

表6 乳康健治療前后奶牛乳汁中細菌消長情況

4 討論

1）普查結果顯示，本地區隱性乳房炎平均頭陽性率53.1%；據報道，患隱性乳房炎乳區泌乳量可降低10%～15%［4］，乳汁中體細胞數越高，泌乳量減少得越多。

2）乳康健對奶牛隱性乳房炎的治愈率90%以上，而且療程很短，用藥5～7次就能基本痊愈，療程6～8 d，平均6.5 d，優于臨床常用的青、鏈霉素。該藥不僅可提高泌乳量，而且還可降低乳汁中體細胞數，改善乳汁質量，證明其對奶牛隱性乳房炎有防治作用。

［1］李會，孫志文，湯樹生，等.復方阿莫西林乳房注入劑治療臨床型奶牛乳房炎的療效觀察［J］.中國獸醫雜志，2012（3）：71-74.

［2］高桂生，高光平，史秋梅，等.復方中藥制劑“增乳健牛散”對奶牛隱性乳房炎主要病原菌的藥敏試驗［J］.畜牧與飼料科學,2012（2）:8-9.

［3］Katja K，Fiona C，Flynn J，et a1.Intramammary-infusion of alive culture of lactococcus lactis for treatment of bovine mastitis：comparison with antibiotic treatment in field trials［J］.Dairy Research，2008，75：365-373.

［4］Muzaffar H，Christof V E.Cap gene as novel target for specific identification of staphylococcus aureus［J］.Clini Microbio，2008，46（2）：470-476.