小反芻獸疫的流行、診斷與防控

翁善鋼

（上海外高橋出入境檢驗檢疫局，上海 200137）

小反芻獸疫（peste des petites ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒（peste des petites ruminants virus，PPRV）引起的小反芻動物的一種急性接觸性傳染性疾病。OIE（世界動物衛生組織）將該病列為必須上報疾病。該病的臨床表現與牛瘟病毒類似，故也稱為偽牛瘟（pseudorinderpest），其特征是發病急劇、高熱稽留、眼鼻分泌物增加、口腔糜爛、腹瀉和肺炎。本病毒主要感染綿羊和山羊等小反芻動物。

1 病原學

小反芻獸疫病毒為副粘病毒科（Paramyxoviridae），麻疹病毒屬（Morbillivirus）的成員。同其他麻疹病毒類似，PPRV很脆弱，離開宿主后很難生存。同副粘病毒科的其他病毒類似，PPRV是有囊膜的一種病毒。PPRV病毒粒子呈多形性，多為圓形或橢圓形。PPRV基因組是不分節段的單股負鏈RNA，長度約16 KB，RNA鏈從3′至5′依次是N-P-M-F-H-L 6個基因，相應的這6個基因編碼6種結構蛋白依次為核衣殼蛋白（N）、磷蛋白（P）、膜蛋白（M）融合蛋白（F）、血凝素蛋白（H）和大蛋白（L），另外，P基因還編碼兩種非結構蛋白C和V［1］。N蛋白的含量在所有P P RV蛋白中含量最高，也最具有免疫原性，卻不會引起對病毒的免疫保護作用。不過，N蛋白已被廣泛應用于診斷試劑的研制?；蛐蛄蟹治鲆脖砻鞑煌局甑腘蛋白基因序列會有稍許差異，這也是P P RV可以分為4個群的重要原因之一。病毒粒子在pH值為4～10的環境中穩定，對酒精、乙醚和一些去垢劑敏感，大多數化學消毒劑如酚類、2%的NaOH等24 h可將其滅活。非離子去污劑可使病毒纖突脫落，降低感染力。

2 流行與傳播

小反芻獸疫最早的報道出現在科特迪瓦（1942年）。隨后，非洲的其他國家也陸續出現了類似該病的報道。出現疫情的地區涵蓋了從大西洋沿岸到紅海的廣大區域，北至埃及、東南抵肯尼亞，西到加蓬。目前，北非和南部非洲尚有一些國家未發現過P P R。如今，PPR不僅傳到了整個中東地區，離歐洲最近的土耳其也已經有PRR流行。PPR在印度等南亞次大陸國家也已經廣泛存在?？傮w而言，當前P P R主要分布在撒哈拉和赤道之間的非洲地區，中東（阿拉伯半島、以色列、敘利亞、約旦）和南亞次大陸（印度、尼泊爾、孟加拉國、巴基斯坦和阿富汗）［2］。P P R在這些國家造成了嚴重的經濟損失，已成為這些國家小反芻獸類家畜生產的重要疾病。根除小反芻獸疫也是不少國家消除貧困計劃中的一項重要內容。PPR對養殖業引起的主要損失包括較高的發病率和死亡率，飼料轉化效率下降，產奶量下降，奶及其制品質量下降，產下弱仔等。對世界各地分離得到的PPRV毒株進行遺傳進化分析可知，不同的毒株可以歸為4個群，其中I、II、III群主要分布在非洲，IV群只分布在南亞次大陸地區。實際上，南亞地區除了存在IV群外，還存在主要流行于中東和東非的III群。2007年，我國西藏自治區日土縣熱幫鄉龍門卡村發生山羊小反芻獸疫疫情，死亡262只。在隨后的2008年6月以及2010年5月西藏那曲和日土先后再次發生了幾起小反芻獸疫疫情。除了上述的國家和地區外，近幾年緬甸、老撾、俄羅斯、蒙古、哈薩克斯坦等國也都有過小反芻獸疫疫情傳出。很明顯的是，我國周邊的鄰國幾乎都存在PPR，這使得我國防控PPR的形式格外嚴峻。

PPR主要在綿羊和山羊中流行，對于幼齡動物，致死率可達50%～80%。羚羊和其他野生小反芻動物也會受到嚴重影響［3］。肉牛、水牛、駱駝以及豬也能夠感染PPRV，但一般不會發病。此外，PPRV感染也是綿羊呼吸道綜合癥的一個重要誘發因素。同其他麻疹病毒屬病毒類似的是，PPRV具有免疫抑制作用，有時PPRV可以突破大型反芻動物先天性免疫的作用，導致類似牛瘟臨床癥狀的產生和發展。這可能有助于解釋為何有時水牛和駱駝感染PPRV后也會出現一些癥狀。事實上，這也是一個潛在的威脅因素。因為自從宣布消滅牛瘟后，已經不再采用牛瘟疫苗進行免疫，牛等大反芻動物體內已經不存在交叉免疫保護作用。

PPRV具有高度傳染性，一般通過直接接觸受感染動物的分泌物和排泄物而傳播。患病山羊的眼鼻或口腔分泌物中病毒含量較高，疾病后期糞便中含毒量也較高。由于病毒具有囊膜，因此病毒對能滅活的環境因素（如熱、陽光、化學品）很敏感。因此，需要同感染動物密切接觸后才能引起病毒的成功傳播。豬接觸感染有病毒的山羊后也會感染PPRV，但不會引起病毒傳播，因此在PPR的流行病學中并不重要。即使在實驗條件下，牛感染PPRV后也未必會有癥狀產生［4］。但在身體狀態較差的情況下，牛也有可能發生由PPRV引起的病變。1995—1996年出現的一次PPR疫情流行中，駱駝的組織樣品中檢測到了PPRV抗原和核酸，但并沒有分離到活的病毒。

3 診斷

對PPR實施有效地防控需要快速、特異和敏感的診斷方法。對于PPR的診斷通常先基于臨床檢查、病理剖檢以及組織學觀察，然后采用實驗室方法診斷確認?，F在已有多種血清學和分子生物學方法用于PPRV檢測。

3.1 傳統方法

常規技術，如瓊脂免疫擴散試驗（AGID）很少用于標準診斷。因為同其他方法相比，該法的敏感性較低［5］。不過，血凝試驗（HA）和血凝抑制試驗（HI）仍可用于日常監測。除了操作簡單、花費少等優點外，其敏感性也相對較高。

如果樣品數量較多，可以嘗試幾種不同的細胞系用于培養并分離病毒。通常采用Vero細胞培養分離病毒。有報道稱某些毒株的PPRV在B95a細胞上的生長要優于Vero細胞［6］。然而PPRV的病毒粒子比較脆弱，有時很難通過細胞培養分離到病毒。此外，分離病毒也是一項耗費人力、物力的工作。利用單抗建立的ELISA方法通常被用作血清學診斷或者抗原檢測。檢測PPRV抗體，競爭ELISA是最合適的方法，這種方法特異性和敏感性均較高，分別可達99.8%和90.5%［7］?？乖东@ELISA是一種快速、敏感、特異的P P RV抗原的檢測方法，敏感性要高于AGID［8］。此外，有報道如膠體金試紙條檢測、DOT-ELISA等方便快捷的檢測方法。

3.2 分子生物學方法

分子生物學技術如 RT-PCR［9］以及核酸雜交［10］等方法已被廣泛應用到抗原檢測。這些方法具有高度特異性和敏感性。

一步法熒光定量RT-PCR［11］和環介導等溫擴增技術（loop mediated isothermal amplification，LAMP）［12］等方法也已被用于檢測PPRV。這兩種方法比傳統的RT-PCR方法更為敏感和特異，但對于陽性的臨床樣品不能夠進行基因分型。RT-PCR-ELISA方法可以進一步增強RTPCR后產物可視化分析的敏感性，克服電泳檢測需要使用溴乙錠以及暴露在紫外線下等弱點［13］。這種方法檢測病毒的最低限可達0.01 TCID50/100 μL，敏感性分別是夾心ELISA和RT-PCR檢測的100和10 000倍［14］。

4 PPR的防控

4.1 傳統防控措施

傳統的PPR防控措施包括：限制疫區的綿羊和山羊的運輸。對來自疫區的動物要進行嚴格檢疫，限制從疫區進口動物及其產品。對有傳染病動物及時撲殺，尸體要焚燒、深埋。有疫情的畜舍應徹底清洗和消毒（可使用苯酚，氫氧化鈉，酒精，乙醚等）。對PPR疫情認真做好監控工作。因為該疫病發病急、損失嚴重，基層的養殖戶及管理人員需要對疫病及時作出反應以最大限度地減少損失。因此，對牲畜養殖戶和管理人員做好宣傳以及培訓工作非常必要。

4.2 疫苗

對小反芻動物進行疫苗免疫接種通常是預防P P R最有效的方法。多數情況下，很多散養農戶無力承擔并實施嚴格的衛生防控措施，使用疫苗可能是唯一的防控方法。除常規疫苗外，針對PPR的各種新型疫苗也已陸續地研制出來。

4.2.1 常規疫苗 早期防控PPR使用的疫苗是一種針對牛瘟病毒（rinder pest virus，RPV）的組織弱毒疫苗（TCRV）。RPV與P P RV同屬副粘病毒科，因此具有一定的同源性。牛瘟疫苗免疫之后，能夠產生針對RPV的中和抗體，但并不能夠產生針對PPRV的中和抗體。不過，當動物遇到P P RV感染后，針對P P RV的中和抗體的量會增加，能夠給予動物足夠的保護［15］。后來，根除牛瘟的運動停止了TCRV的使用，因為血清學檢測并不能夠區分自然感染和疫苗免疫的動物。

1989年，有學者將尼日利亞的P P RV 75/1毒株在Vero細胞上進行培養，經過多次傳代之后對病毒進行致弱，成功地研制一種具有同源性的P P RV弱毒苗［16］。此后，世界其他國家的研究人員也研制出了類似的弱毒疫苗。這種疫苗可以較為安全地用于P P R防控。

4.2.2 耐熱疫苗 PPRV不耐熱，TCRV通過采用冷凍干燥技術改善了疫苗的熱穩定性。Worrwall等使用一種含有海藻糖的冷凍保護劑進行凍干處理，研制出了一種耐熱疫苗［17］。這種疫苗在45°C環境中可以較穩定地存放14 d以上。Sen等報道的兩種熱穩定的疫苗可以在37°C 和 40 °C 環境中分別存放 7.62 d和 3.68 d［18］。有報道稱重水可以提高P P RV疫苗的熱穩定性。與常規病毒相比，病毒用含重水的稀釋液氘化后可以維持更高的滴度［18］。

4.2.3 重組疫苗 在成功消滅牛瘟之后，根除P P RV的工作日益成為一個新的關注點。目前，弱毒疫苗在各國的使用效果良好。然而，同TCRV相似的是，血清學檢測不能區分自然感染病毒和使用現有弱毒P P RV疫苗后產生的抗體。因此研制出重組疫苗用于PPR的消除計劃非常重要。已有不少麻疹病毒屬病毒的F和H蛋白采用活病毒載體系統表達出來，表達蛋白可有效地用作疫苗進行免疫。已有報道采用弱毒的羊痘病毒毒株KS-1表達PPRV的F蛋白的方法［19］。此外也有報道利用KS-1載體表達系統構建P P RV的H蛋白的研究。利用這些重組蛋白制備成疫苗后可以誘導免疫較長時間［20］。但是，使用這些以痘病毒為載體的疫苗需要考慮的是，這些疫苗本身就具有對痘病毒的免疫原性，這有可能干擾疫苗使用的效果。

當然，如果要降低防疫成本，還可以考慮研制二價或者三價疫苗，對PPR以及其他山羊及綿羊疾病進行防控。

4.2.4 植物疫苗 轉基因植物疫苗作為一種口服疫苗，具有十分廣闊的應用前景。與傳統疫苗相比，轉基因植物疫苗具有突出的優點：①生產成本低，可直接飼喂動物，不需要分離提純。②易于保存。轉基因植物疫苗常溫下就可以保存，無須冷藏保存，生產過程也無須嚴格無菌條件。③具有更好的免疫原性。植物細胞的全能性及其完整的真核細胞表達系統使抗原蛋白保持了自然狀態下的免疫原性。④比傳統的免疫途徑更安全。轉基因植物疫苗不需要注射器和針頭之類的設備，避免由于消毒不嚴格而通過注射器和針頭傳播疾病的可能性。⑤比傳統的免疫途徑更有效。植物細胞壁的存在可以抵抗胃酸、胰蛋白酶以及其他消化酶對抗原蛋白的直接消化，使其在小腸中逐漸釋放，利于激起較強的黏膜免疫反應，達到免疫的目的。⑥應用范圍廣，易于推廣。可以通過添加到飼料中飼喂家畜和野生動物，以達到免疫的目的［21］。有報道將PPRV的H基因在植物木豆（pigeon pea）中表達制備成疫苗［22］。不過，這種疫苗的免疫原性和保護力還有待臨床檢驗。隨著研究的深入將會有更多用于PPR防控的植物疫苗問世。

5 小結

PPR是一種重大烈性傳染性疾病，正嚴重威脅著非洲、中東、近東、西亞、中亞以及南亞地區近10億反芻動物。PPR疫情流行的大部分地區是全球較為貧困的地區，控制PPR對消除貧困也具有重要的意義。因此，做好PPR的研究和防控工作將仍然是各國動物疫病防控部門的重要任務。

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