蘇子提取物治療兔非酒精性脂肪肝病的試驗研究

摘要：觀察蘇子提取物（Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Ｓｅｅｄ，ＥＰＳ）抗高脂血癥引起的非酒精性脂肪肝病（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｆａｔｔｙ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）的作用。采用高脂飲食復制家兔ＮＡＦＬＤ模型，分別測定正常對照組（ＮＣ）、高脂模型組（ＨＬＭ）、蘇子提取物組（ＥＰＳ ０．１ ｇ／ｍＬ）血清中ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ、ＡＬＴ、ＡＳＴ。肝組織用中性福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，Ｈ．Ｅ．染色，光學顯微鏡下觀察，評估脂肪變性程度。結果顯示，跟高脂模型組相比，ＥＰＳ能顯著降低血清中ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＡＬＴ、ＡＳＴ含量，提高ＨＤＬ－Ｃ的含量（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）；減輕肝組織脂肪變性程度（Ｐ＜０．０１）。說明ＥＰＳ具有抗高脂血癥引起的家兔非酒精性脂肪肝病的作用。其機制可能與調節血脂代謝紊亂以及抑制肝臟脂質沉積有關。

關鍵詞：蘇子提取物（Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Ｓｅｅｄ，ＥＰＳ）；血脂；氨基轉移酶；兔；非酒精性脂肪肝病（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｆａｔｔｙ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）

中圖分類號：Ｓ８５８．２９１；Ｒ５７５ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）01－0117-03

Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Ｓｅｅｄ ｏｎ Ｒａｂｂｉｔ Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｆａｔｔｙ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ

ＪＩＮ Ｓｈｕ－ｇａｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｍｉａｏ－ｈｏｎｇ

（Ｈｅｂｅｉ Ｎｏｒｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ ０７５０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ａｉｍｅｄ ａｔ ｒｅｓｅａｃｈ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ eｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Ｓｅｅｄ（ＥＰＳ） ｏｎ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｌｉｐｉｄ ｄｉｅｔ． Ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｎｄ ｅｑｕａｌｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ （ＮＣ） ｇｒｏｕｐ， ｈｉｇｈ ｌｉｐｉｄ ｍｏｄｅｌ （ＨＬＭ） ｇｒｏｕｐ， ＥＰＳ ｇｒｏｕｐ（ＥＰＳ ０．１ ｇ/ｍＬ）． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＴＣ， ＴＧ， ＬＤＬ－Ｃ， ＨＤＬ－Ｃ， ＡＬＴ， ＡＳＴ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｆｉｘｅｄ ｂｙ ｆｏｒｍａｌｉｎ， ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｒａｆｆｉｎ， ｓｅｃｔｉｏｎｅｄ， ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ Ｈ．Ｅ．， ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＥＰＳ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＴＣ， ＴＧ， ＬＤＬ－Ｃ， ＡＬＴ， ＳＡＴ， ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＨＤＬ－Ｃ ｉｎ ｓｅｒｕｍ （Ｐ＜０．０１， ｏｒ Ｐ＜０．０５）， ａｎｄ ａｌｌｅｖｉａｔｅ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ（Ｐ＜０．０１）． Ｉｔ ｉｎｄｉｃｔｅｄ ｔｈａｔ ＥＰＳ ｃｏｕｌｄ ｒｅｓｉｓｔ ｔｈｅ ＮＡＦＬＤ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ． Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ｆａｔ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： eｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Sｅｅｄ （ＥＰＳ）； bｌｏｏｄ ｆａｔ； aｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ； rabbit； nｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ

非酒精性脂肪肝病（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）是一種無過量飲酒史并以肝細胞脂肪貯積和脂肪變性為特征［１，２］的臨床病理綜合征。但ＮＡＦＬＤ發病具體機制尚不清楚， 目前普遍認為與胰島素抵抗（Ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＲ）密切相關［３］。另外試驗充分證明，高脂血癥（Ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ，ＨＬＰ）引起的脂質代謝紊亂是非酒精性脂肪肝病產生的主要因素［４］。

近年來，人們因大量攝入高脂食品，ＮＡＦＬＤ的發病率逐年升高，且漸趨低齡化。脂肪肝患者約１／４會發生肝纖維化，且大概１．５％～８．０％的患者在發病后期可發展為肝硬化［５］，更嚴重者則發展為肝癌［６］。因此，研究ＮＡＦＬＤ的發病機理及有效的防治藥物具有十分重要的意義。本研究以高脂飼料飼養并建立ＮＡＦＬＤ家兔模型，觀察蘇子提取物（Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｌｌａ Ｓｅｅｄ，ＥＰＳ）對家兔ＮＡＦＬＤ的治療作用。

１ 材料與方法

１．１ 材料

１．１．１ 藥物 蘇子提取物（ＥＰＳ），由河北北方學院動物科學學院組織胚胎實驗室制備，ＥＰＳ濃度為０．１ ｇ／ｍＬ。

１．１．２ 試驗動物 清潔級家兔１８只，雌雄各半，體重（２．０±０．２）ｋｇ，購自河北北方學院實驗中心。

１．１．３ 主要試劑 膽固醇購自上海伯奧生物有限公司；豬油、雞蛋市售；總膽固醇（ＴＣ）檢測試劑盒、甘油三酯（ＴＧ）檢測試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（ＨＤＬ－Ｃ）檢測試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（ＬＤＬ－Ｃ）檢測試劑盒、丙氨酸氨基轉移酶（ＡＬＴ）測定試劑盒、門冬氨酸氨基轉移酶（ＡＳＴ）測定試劑盒購自北京中生北控科技股份有限公司。

１．１．４ 主要儀器 全自動生化檢測儀（Ｏｙｌｍｐｕｓ Ａｕ５６０，日本產），低溫中速離心機（ＣＦ１２ＲＸ／９ＲＸ，日本產），顯微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ ＣＨ２０ＢＩＭＦ２００－２，日本奧林巴斯公司），切片機（Ｌｅｉｃａ ＲＭ２１２５，德國徠卡公司），組織石蠟包埋機（Ｌｅｉｃａ ＥＧ１１６０，德國徠卡公司）等。

１．１．５ 飼料 基礎飼料配方為玉米３５％、小麥２５％、麥麩３５％、魚粉２％、骨粉２％、鹽１％；高脂飼料配方為膽固醇１％、鮮蛋黃１５％、豬油１０％、基礎飼料７４％。

１．２ 方法

１．２．１ 試驗動物分組與給藥 試驗用兔空腹稱重，隨機分為正常對照組（ＮＣ）、高脂模型組（ＨＬＭ）、蘇子提取物組（ＥＰＳ），每組６只，均單籠飼養。飼養環境溫度保持在２６ ℃，室內濕度控制在７０％，保持室內通風。ＮＣ組飼喂基礎飼料，ＨＬＭ組飼喂高脂飼料，ＥＰＳ組飼喂高脂飼料并用蘇子提取物灌胃，同時ＨＬＭ組與ＮＣ組均采用等量去離子水灌胃。灌胃量為每只１０ ｍＬ／ｄ，共８周。

１．２．２ 測定指標 試驗第八周末，試驗兔均禁食１２ ｈ，自由飲水，清晨空腹于耳中動脈采血３．０ ｍＬ，分離血清，利用全自動生化檢測儀測定血清ＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ－Ｃ、ＬＤＬ－Ｃ、ＡＬＴ、ＡＳＴ。

１．２．３ 病理觀察 枕骨大孔處死家兔，于肝臟右葉距葉邊緣５ ｍｍ處取小塊肝組織，固定于１０％的中性福爾馬林液中，５６ ｈ后取出，石蠟包埋，連續切片，切片厚度為４～５ μｍ，蘇木精－伊紅（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ａｎｄ Ｅｏｓｉｎ，Ｈ．Ｅ．）染色，顯微鏡下觀察蘇子提取物對肝組織脂肪變性的作用情況。

１．２．４ 統計學分析 獲取的數據資料均以x±s表示，采用統計軟件ＳＰＳＳ １０．０進行統計學分析，等級資料采用秩和檢驗。

２ 結果與分析

２．１ ＥＰＳ對血清中血脂水平的影響

表１表明，ＨＬＭ組在試驗末期（第八周末）其血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ的濃度極顯著高于ＮＣ組（Ｐ＜０．０１）。ＥＰＳ組的ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ濃度極顯著低于ＨＬＭ組（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬ－Ｃ濃度極顯著高于ＨＬＭ組（Ｐ＜０．０１）。試驗結果表明，ＥＰＳ具有一定調節血脂的作用。

２．２ ＥＰＳ對血清中氨基轉移酶水平的影響

由表２可見，ＨＬＭ組血清ＡＳＴ、ＡＬＴ含量極顯著高于ＮＣ組（Ｐ＜０．０１），說明高脂飲食導致試驗家兔肝臟組織和功能顯著損傷。ＥＰＳ組血清ＡＳＴ、ＡＬＴ含量顯著低于高脂模型組（Ｐ＜０．０５），說明ＥＰＳ能夠降低血清中ＡＳＴ、ＡＬＴ含量，減少肝組織損傷，對肝臟起到了保護作用。

２．３ ＥＰＳ對肝臟脂肪變性的影響

肝組織Ｈ．Ｅ．染色，鏡檢發現ＮＣ組家兔肝小葉結構正常，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，無肝細胞腫脹及脂肪性病變。ＨＬＭ組家兔肝小葉結構零亂，肝細胞氣球樣病變。ＥＰＳ組家兔部分肝細胞腫脹，胞漿內脂肪沉積，肝小葉結構正常。

另外根據肝細胞脂肪變性判斷標準對各組試驗兔肝組織進行評分比較［７］，每張切片隨機選取３個視野對脂肪變性程度計分，取其平均值。結果發現，與ＮＣ組相比，ＨＬＭ組家兔肝臟組織均呈現重度脂肪變性，且變性程度計分差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；與ＨＬＭ組相比，ＥＰＳ組肝臟組織脂肪變性程度極顯著降低（Ｐ＜０．０１）（表２）。

３ 小結與討論

據研究表明，蘇子含油脂非常豐富，平均含油率約４５％左右，并且其油脂成分眾多，以α－亞麻酸含量最高，可達８４．５％［８］。α－亞麻酸具有改變大鼠肝臟組織中脂肪酸的作用，可以用于降低血脂［９］；并且α－亞麻酸也是很好的抗氧化物質，能保護血管內膜的完整性［１０］。本研究表明，ＥＰＳ用藥組能顯著降低血清中ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ的含量，提高血清中ＨＤＬ－Ｃ的水平，表現出良好的調節血脂的作用；同時，ＥＰＳ用藥組能顯著降低血清中ＡＬＴ、ＡＳＴ的含量，表現出良好的保護肝臟、減輕肝臟損傷的作用；另外，ＥＰＳ通過降低脂質在肝組織中的沉積，減輕肝臟脂肪變性程度而達到抑制非酒精性脂肪肝病的形成。對于ＥＰＳ減輕肝細胞損傷及調節脂質代謝紊亂、降低脂質沉積的作用機制還有待于進一步深入研究。

參考文獻：

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