甲砜霉素可溶性粉對人工感染雞大腸桿菌病的藥效學研究

摘要：用試管肉湯兩倍稀釋法測得甲砜霉素及氧氟沙星對雞大腸桿菌（Ｅscherichia ｃｏｌｉ）的最小抑菌濃度分別為２．０和０．１ μｇ／ｍＬ。按２５、５０和７５ ｍｇ／Ｌ的甲砜霉素及１０ ｍｇ／ｋｇ的氧氟沙星分別給試驗性雞大腸桿菌病患雞內服，甲砜霉素采用全天自由飲水，氧氟沙星每天分２次內服，共用藥４ ｄ。結果藥物對雞大腸桿菌病的治愈率分別為８３．３％、９６．７％、１００％和９３．３％，而感染對照組雞的死亡率為７０．０％。甲砜霉素和氧氟沙星組的增重效果極顯著高于感染對照組（Ｐ＜０．０１）。結果表明，甲砜霉素中、高劑量組對雞大腸桿菌病有較好療效。用５倍中劑量甲砜霉素作安全試驗與健康對照組雞相比未見不良反應，表明用甲砜霉素可溶性粉給雞混飲治療雞大腸桿菌病安全有效。

關鍵詞：雞；大腸桿菌（Ｅscherichia ｃｏｌｉ）；甲砜霉素可溶性粉；療效

中圖分類號：Ｒ９７８．１＋３；Ｓ８５８．３１ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）01－0120-03

Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ Ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒ Ｅscherichia ｃｏｌｉ

Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｈｉｃｋｅｎ

ＭＥＮＧ Ｚｈｉ－ｍｉｎ，ＮＩＵ Ｘｉａｏ－ｆｅｉ，ＬＩ Ｌｉａｎ－ｑｕｅ，ＭＩ Ｔｏｎｇ－ｇｕｏ，ＨＵＡＮＧ Ｚｈａｎ－ｘｉｎ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈａｎｄａｎ ０５６００１，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｂｙ ｔｕｂｅ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ， ｉｔ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ） ｏｆ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｏｒ ｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｏｎ Ｅscherichia ｃｏｌｉ ｗａｓ ２．０ μｇ／ｍＬ ｏｒ ０．１ μｇ／ｍＬ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ Ｅ． ｃｏｌｉ ｅｆｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｃｋｅｎ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｏｒａｌｌｙ ｗｉｔｈ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ａｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ２５， ５０， ７５ ｍｇ／Ｌ， ａｎｄ ｏｆｌｏｘａｃｉｎ ａｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ １０ｍｇ／ｋｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｔｒｅａｔ ｇｒｏｕｐｓ ｄｒａｎｋ ｗａｔｅｒ ｆｒｅｅｌｙ ａｎｄ ｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｄｒａｎｋ ｗａｔｅｒ ｔｗｉｃｅ ａ ｄａｙ， ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ４ ｄａｙｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｕｒｅ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ８３．３％，９６．７％，１００％ ｂｙ ２５，５０ ｏｒ ７５ ｍｇ／Ｌ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ９３．３％ ｂｙ ｏｆｌｏｘａｃｉｎ， ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ７０．０％． Ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｒｉｓｅ ｉｎ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ａｎｄ ｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｔｒｅａｔ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｉｄｄｌｅ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｈｅａｌｔｈｙ ｇｒｏｕｐ ｃｈｉｃｋｅｎ， ｉｔ ｗａｓ ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ ａｎｙ ｂａｄｎｅｓｓ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｉｎ ｆｉｖｅ ｔｉｍｅｓ ｍｉｄｄｌｅ ｄｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｇｒｏｕｐ ｃｈｉｃｋｅｎ， ｓｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅ． ｃｏｌｉ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｃｋｅｎ ｗｉｔｈ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｗａｓ ｓａｆｅｔｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｈｉｃｋｅｎ； Ｅscherichia ｃｏｌｉ； ｓｏｌｕｂｌｅ ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｐｏｗｄｅｒ； ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｅｆｆｉｃａｃｙ

雞大腸桿菌病是目前雞養殖中常發生的一種細菌性傳染病。發病率為１１％～６９％，死亡率為３．８％～７２．９％，是雞死淘率居高不下的主要原因之一［１］。由于大腸桿菌（Ｅscherichia ｃｏｌｉ）菌株多，易產生耐藥性，臨床常用藥物療效差。甲砜霉素為氯霉素的衍生物，抗菌譜與氯霉素基本相同，體內抗菌作用比氯霉素強，對革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、沙門氏桿菌、巴氏桿菌、壞死桿菌等均有較強的抗菌作用。目前甲砜霉素的制劑包括甲砜霉素片劑和甲砜霉素散劑兩種［２，３］，甲砜霉素片劑適用于個體給藥，不適用于大群給藥；甲砜霉素散劑是拌飼料使用的，顆粒飼料無法拌勻。而雞在發病時，臨床常表現為采食量下降，飲水正常；拌料飼喂時，會降低藥物的攝入量，影響其治療效果，在臨床使用上受到了一定的限制。因此，臨床急需研制甲砜霉素飲水劑即甲砜霉素可溶性粉。本試驗為甲砜霉素可溶性粉劑的開發生產提供了一定依據。

１ 材料與方法

１．１ 材料

１．１．１ 主要儀器 ＳＺ－９３型自動雙重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；ＣＨ型隔水式培養箱，天津泰斯特儀器有限公司；ＴＧ３２８Ａ光電分析天平，上海精密科學儀器有限公司；超凈工作臺，上海成順儀器儀表有限公司；ＹＸ２８０Ｂ型手提式不銹鋼蒸汽滅菌器，上海三申醫療器械有限公司。

１．１．２ 藥物 甲砜霉素可溶性粉為甲砜霉素與葡萄糖及助溶劑配制成的可溶性粉。含甲砜霉素（Ｃ１２Ｈ１５ＣＬ２ＮＯ５Ｓ）應為標示量的９０．０％～１１０．０％，由石家莊江山動物藥業有限公司配制，１００ ｇ／袋，批號２００９０８０９；氧氟沙星原粉，浙江國邦獸藥廠生產，批號２００９０６０１。

１．１．３ 試驗動物 海蘭灰雛雞由河北工程大學試驗牧場種禽公司提供。

１．１．４ 菌種 雞源大腸桿菌Ｏ７８（Ｃ８４００８），購于中國獸藥監察所。

１．１．５ 培養基 營養肉湯培養基，中國藥品生物制品檢定所生產； 普通瓊脂培養基，北京奧博星生物技術責任有限公司生產。

１．１．６ 飼料 由河北工程大學試驗牧場飼料公司提供雛雞全價配合飼料，不含抗菌藥物。

１．２ 方法

１．２．１ 菌種復壯，增菌計數 雞大腸桿菌（Ｏ７８血清型）為中國獸藥監察所的標準菌株。使用前，保存的強毒菌種先接種普通平板，培養２４ ｈ，挑選典型菌落于肉湯中，３７ ℃培養１８ ｈ取出。肉湯培養物接種雞經復壯后，從死雞肝臟分離大腸桿菌并接種平板培養，最后挑選典型菌落，接種于營養肉湯培養基中，３７ ℃增菌培養２４ ｈ，作為攻毒菌液。取該菌液１．０ ｍＬ，用無菌生理鹽水１０倍稀釋至第七管，取０．１ ｍＬ滴２個瓊脂平皿，將菌液搖勻，３７ ℃培養２４ ｈ，計數菌落，每毫升含活菌約３．１×１０８ ＣFＵ。

１．２．２ 毒力測定，確定接種量 從２６日齡雛雞中隨機抽取１８只分為６組，每組３只，分別由氣囊注入大腸桿菌肉湯培養攻毒菌液０．２、０．３、０．４、０．５、０．６和０．７ ｍＬ。攻毒后２４ ｈ，０．２、０．３和０．４ ｍＬ菌液組未見死亡，０．５ ｍＬ菌液組死亡１只，０．６和０．７ ｍＬ菌液組死亡３只，經毒力測定，將攻毒量確定為每只雞氣囊注射０．６ ｍＬ菌液。

１．２．３ 動物飼養及給藥方式 海蘭灰雛雞未經雞大腸桿菌疫苗免疫，公母兼有。試驗前按常規飼養，喂全價飼料，自由采食及飲水，并進行臨床觀察。攻毒后４ ｈ甲砜霉素組自由飲水給藥，一次給藥的量約２ ｈ內飲完，然后添加新鮮藥水。氧氟沙星組每天按１０ ｍｇ／ｋｇ體重給藥，分上午、下午２次內服。均連續用藥４ ｄ。

１．２．４ 動物分組及給藥情況 從２９日齡雞群取２１０只健康雞，隨機分為７組，每組３０只，具體分組及處理情況見表１。

１．２．５ 攻毒、致病性試驗 表1中第１～５組全部氣囊注入大腸桿菌菌液０．６ ｍＬ，記錄接種前后雞的精神狀態、食欲、糞便等，取死雞肝、脾及心臟進行細菌分離培養。

１．２．６ 治療試驗 攻毒后４ ｈ經口服或飲水給藥，連用４ ｄ。連續觀察１６ ｄ，記錄其臨床癥狀，對死亡雞進行剖檢并分離病原菌，判斷死因。試驗前和試驗第１６天時分別稱量雞只體重并詳細記錄。

１．２．７ 體外最小抑菌濃度測定 采用試管肉湯兩倍稀釋法。

１．２．８ 療效評價指標 死亡：凡在試驗期間出現雞大腸桿菌病的典型癥狀并死亡，尸檢發現典型病變，從肝、脾及心臟中分離培養出雞大腸桿菌者，判為感染死亡；根據死亡雞數計算各組死亡率。治愈：凡在試驗期間，服藥后精神、食欲恢復正常，不再出現排稀糞等臨床癥狀者均屬治愈；根據治愈雞占試驗雞的比例計算治愈率。有效：用藥后完全治愈的以及有臨床癥狀但未死者均為有效；試驗結束時每組存活的雞數占試驗雞數的比例為有效率。增重：根據試驗開始時及試驗結束時每只雞的體重計算每只雞的增重，然后據此計算每組試驗雞的平均增重和標準差。相對增重率按各用藥治療組與健康組的增重之比計算，其中健康對照組設為１００％。

１．２．９ 數據的分析和處理 死亡率、有效率及治愈率用卡方檢驗，增重采用ｔ檢驗。

２ 結果與分析

２．１ 體外最小抑菌濃度（ＭＩＣ）

采用試管肉湯兩倍稀釋法測得氧氟沙星對雞大腸桿菌的ＭＩＣ是０．１ μｇ／ｍＬ，甲砜霉素對雞大腸桿菌的ＭＩＣ是２．０ μｇ／ｍＬ。

２．２ 致病性試驗結果

接種后１～７ ｄ感染對照組３０只雛雞中有２１只死亡。其主要臨床癥狀表現為精神沉郁，食欲、飲欲下降或廢絕，羽毛蓬亂，兩翼下垂，頭頸縮入，閉眼昏睡，不愿走動，離群呆立，排稀糞，嚴重者臥地不起。剖檢特征是：肝臟充血、腫大易碎，肝漿膜增厚，有大量滲出物；脾腫大；心包腔內有大量纖維素性滲出物。從肝、脾及心臟均可分離到大量大腸桿菌。

２．３ 治療試驗結果

與感染對照組相比，各治療組雞臨床癥狀均迅速減輕。服藥后１６ ｄ內，各組雞只的死亡率、治愈率、有效率及增重率見表２。由表２可見，低、中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組的死亡率均極顯著低于感染對照組（Ｐ＜０．０１），治愈率極顯著高于感染對照組的自愈率（Ｐ＜０．０１），有效率亦極顯著高于感染對照組（Ｐ＜０．０１）。中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組之間的死亡率、治愈率和有效率均無統計學差異（Ｐ＞０．０５），但其治愈率和有效率均顯著高于低劑量甲砜霉素組（Ｐ＜０．０５），死亡率均顯著低于低劑量甲砜霉素組（Ｐ＜０．０５）。低、中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組的增重效果均極顯著高于感染對照組（Ｐ＜０．０１），但顯著低于健康對照組（Ｐ＜０．０５）；低、中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組之間的增重效果無統計學差異（Ｐ＞０．０５）。

３ 小結與討論

劉雅紅等［４］報道用氧氟沙星治療雞大腸桿菌病時，按５ ｍｇ／ｋｇ體重內服（每隔１２ ｈ服１次，連用３ ｄ），療效很好。按此推算，１．５ ｋｇ體重的雞每天用藥量為１５ ｍｇ，該雞采食量約為每天１００ ｇ，飲水量約為每天２５０ ｇ，相當于采用６０ ｍｇ／Ｌ的藥物濃度自由飲水。

統計學分析表明，低、中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組的死亡率均極顯著低于感染對照組（Ｐ＜０．０１），治愈率極顯著高于感染對照組的自愈率（Ｐ＜０．０１），有效率亦極顯著高于感染對照組（Ｐ＜０．０１）。所以認為，甲砜霉素３個劑量及氧氟沙星均對雞大腸桿菌病有較好的療效。中、高劑量甲砜霉素組與氧氟沙星組之間的死亡率、治愈率和有效率均無統計學差異（Ｐ＞０．０５），但其治愈率和有效率均顯著高于低劑量甲砜霉素組（Ｐ＜０．０５），死亡率顯著低于低劑量甲砜霉素組（Ｐ＜０．０５），說明中、高劑量甲砜霉素的療效與氧氟沙星相當。低、中、高劑量甲砜霉素組及氧氟沙星組的增重效果均極顯著高于感染對照組（Ｐ＜０．０１），但顯著低于健康對照組（Ｐ＜０．０５）；低、中、高劑量甲砜霉素組與氧氟沙星組之間的增重效果無統計學差異（Ｐ＞０．０５）。用５倍中劑量甲砜霉素作安全對照與健康組相比未見不良反應，表明甲砜霉素可溶性粉給雞飲水用以治療雞大腸桿菌病是安全有效的。使用劑量以５０ ｍｇ／Ｌ為宜，用法為全天自由飲水。

參考文獻：

［１］ 甘孟侯．中國禽病學［Ｍ］． 北京：中國農業出版社，１９９９．１６８．

［２］ 齊景發，張仲秋，于康震，等．獸藥質量標準［Ｍ］．北京：化學工業出版社，２００３．３５－３８．

［３］ 齊景發，張仲秋，于康震，等． 中華人民共和國獸藥典（２００５版）［Ｍ］．北京：中國農業出版社，２００５．

［４］ 劉雅紅，馮淇輝，方炳虎，等．氧氟沙星對霉形體與大腸桿菌合并感染雞的藥效學研究［Ｊ］．畜牧獸醫學報，１９９８，２９（５）：３８５－３９１．