黃花白及種子非共生萌發(fā)及幼苗發(fā)育研究

摘要：試驗(yàn)采用Ｌ９（３４）正交試驗(yàn)研究成熟黃花白及（Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ Ｓｃｈｌｔｒ）種子非共生萌發(fā)及幼苗發(fā)育條件。結(jié)果表明，馬鈴薯、蔗糖、ＮＡＡ、 ６－ＢＡ ４個(gè)因素對(duì)種子萌發(fā)率的影響不顯著，說(shuō)明成熟種子對(duì)培養(yǎng)基的要求較低，容易萌發(fā)；但蔗糖和馬鈴薯對(duì)幼苗發(fā)育的影響顯著，幼苗發(fā)育的較適條件是蔗糖添加量１０ ｇ／Ｌ，馬鈴薯添加量１００ ｇ／Ｌ，ＮＡＡ的添加量０，６－ＢＡ的添加量０．５ ｇ／Ｌ。

關(guān)鍵詞：黃花白及（Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ Ｓｃｈｌｔｒ） ；非共生萌發(fā)；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：Ｒ２８２．７ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）01－0111-03

Ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ Ｓｅｅｄｓ

ＬＩ Ｊｉｎｇ１，２，ＷＵ Ｍｉｎｇ－ｋａｉ２，ＬＩＵ Ｚｕｏ－ｙｉ２，ＳＨＥＮ Ｚｈｉ－ｊｕｎ2，３

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ， Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４００７１6， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｍｏｄｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００６， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００6，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔ ｍｏｒｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｒｏｕｔｅ， oｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４） ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｔａｔｏ， ｓｕｃｒｏｓｅ， ＮＡＡ ａｎｄ ６－ＢＡ ｈａd ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｓｅｅｄｓ ｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｌｏｗ， ａｎｄ ｉｔ ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ ｅａｓｉｌｙ． Ｈｏｗｅｖｅｒ ｔｈｅ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｐｏｔａｔｏ ｈａd ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ waｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｃｒｏｓｅ １０ ｇ/Ｌ＋ ｐｏｔａｔｏｅｓ １００ ｇ/Ｌ＋６－ＢＡ ０．５ ｇ/Ｌ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ； ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ

黃花白及（Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｏｃｈｒａｃｅａ Ｓｃｈｌｔｒ）屬蘭科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）白及屬（Ｂｌｅｔｉｌｌａ）植物，分布于我國(guó)的云南、貴州及四川等地［１，２］。我國(guó)白及屬的幾個(gè)種均可作為中藥材白及使用，以假鱗莖入藥，具有收斂止血、清熱利濕、消腫生肌之功效，臨床上廣泛用于治療咳血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、肺結(jié)核咳血、潰瘍病出血等；近些年白及的臨床應(yīng)用范圍又不斷拓寬，對(duì)治療食管炎、咳嗽、體表腫瘤及血管瘤、氣胸、白帶多、鼻竇炎等均有新的突破［３］。而且黃花白及其花鮮黃，花期５~６月，具有較高的觀賞價(jià)值，深受人們喜愛(ài)，白及在化妝品等工業(yè)上用途也極其廣泛，具有很高的開(kāi)發(fā)價(jià)值。白及近年身價(jià)倍增，成為藥市中的明星，由２００８年６月中旬的７０～８０元／kg升到２０１０年的１５０～１６０元／kg，市場(chǎng)需求導(dǎo)致其野生自然資源被過(guò)度采挖，已成為瀕危類群。白及種子不易發(fā)芽，主要以分株方式進(jìn)行繁殖，繁殖率低、繁殖速度慢［１，３，４］。采用組織培養(yǎng)技術(shù)可快速繁殖大量種苗，以滿足人工栽培的需要。目前，黃花白及的離體培養(yǎng)報(bào)道不多，大多都是單因子試驗(yàn)［５－１０］，利用馬鈴薯、蔗糖、ＮＡＡ、６－ＢＡ 4個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)來(lái)探求其對(duì)種子的萌發(fā)和幼苗發(fā)育的影響，篩選黃花白及種子非共生萌發(fā)與幼苗發(fā)育較優(yōu)的技術(shù)路線，為黃花白及工廠化組培快繁育苗技術(shù)提供依據(jù)，對(duì)規(guī)模化人工栽培、滿足市場(chǎng)種苗需求以及保護(hù)黃花白及野生資源都具有重要的意義。

１ 材料與方法

１．１ 材料

試驗(yàn)采用開(kāi)花授粉后１５周左右未開(kāi)裂的蒴果作為黃花白及種子來(lái)源，采自貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院的蘭科植物資源活體保存大棚內(nèi)。

１．２ 方法

１．２．１ 培養(yǎng)基的配制 以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加活性炭２ ｇ／Ｌ，瓊脂８．０ ｇ／Ｌ，pＨ ５．８，蔗糖添加量（３０、２０、１０ ｇ／Ｌ），馬鈴薯添加量（０、１００、２００ ｇ／Ｌ），調(diào)節(jié)劑ＮＡＡ添加量（０、０．５、１．０ ｍｇ／Ｌ），６－ＢＡ添加量（０、０．１、０．５ ｍｇ／Ｌ），每個(gè)處理９瓶。正交試驗(yàn)表見(jiàn)表１。

１．２．２ 種子的無(wú)菌播種 將蒴果在流水下沖洗干凈，吸水紙吸干水分，置超凈工作臺(tái)上用７５％酒精浸泡的棉球擦表皮兩次，然后用０．１％的升汞浸泡１０ ｍｉｎ，再用無(wú)菌水沖洗５次，吸水紙吸干表面的水分，在無(wú)菌條件下用解剖刀切開(kāi)蒴果，將種子撒到培養(yǎng)基內(nèi)。

１．２．３ 培養(yǎng)條件 溫度（２２±２）℃，光照時(shí)間１２ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ，濕度５０％。

２ 結(jié)果與分析

分別在１０、３０、６０ ｄ后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率和株高，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表２。

２．１ 不同組合培養(yǎng)條件對(duì)黃花白及種子發(fā)芽率的影響

發(fā)芽率極差分析結(jié)果表明，馬鈴薯含量因素的極差最大，表明馬鈴薯的含量對(duì)種子的發(fā)芽率影響最大，各因素對(duì)種子發(fā)芽率的影響程度是：馬鈴薯＞６－ＢＡ＞ＮＡＡ＞蔗糖（表３），但都沒(méi)有達(dá)到顯著水平（表４），說(shuō)明成熟種子的萌發(fā)受培養(yǎng)基的影響較小，隨著種子培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)都能萌發(fā)。但從節(jié)約成本、縮短育苗周期考慮，試驗(yàn)處理８在最短的時(shí)間內(nèi)發(fā)芽率最高，株高最高，即以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加活性炭２ ｇ／Ｌ，瓊脂８．０ ｇ／Ｌ，蔗糖１０ ｇ／Ｌ，馬鈴薯１００ ｇ／Ｌ，ＮＡＡ為0，６－ＢＡ 0.5 mｇ／Ｌ時(shí)為較適宜種子發(fā)芽的條件。

２．２ 不同試驗(yàn)組合對(duì)黃花白及株高的影響

黃花白及株高的極差分析見(jiàn)表5，結(jié)果表明蔗糖的含量對(duì)株高影響最大，其次是馬鈴薯的添加量，各因素對(duì)株高的影響程度是：蔗糖＞馬鈴薯＞ＮＡＡ＞６－ＢＡ。且蔗糖和馬鈴薯的含量對(duì)株高的影響達(dá)到了顯著水平（表６），由此分析較佳的培養(yǎng)條件為Ａ３Ｂ２Ｃ１Ｄ３，即蔗糖添加量為１０ ｇ／Ｌ，馬鈴薯添加量為１００ ｇ／Ｌ，ＮＡＡ添加量為０，６－ＢＡ添加量為０．５ ｇ／Ｌ（表1）。

３ 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，黃花白及成熟的種子發(fā)芽對(duì)培養(yǎng)條件要求不高，只要培養(yǎng)的時(shí)間足夠長(zhǎng)，都能得到較高的發(fā)芽率，這與張建霞等［9］研究的結(jié)果一致。因此，對(duì)于黃花白及成熟種子的組培快繁，不需要各個(gè)階段換用不同的培養(yǎng)基，只要該種培養(yǎng)基適合黃花白及苗的生長(zhǎng)即可，從而大大減少了成本，為工廠化生產(chǎn)提供了有利條件。

傳統(tǒng)培養(yǎng)基的配制都加入了大量的蔗糖作為碳源，但從本試驗(yàn)的結(jié)果可以看出，最適的蔗糖添加量為１０ ｇ／Ｌ，過(guò)量的蔗糖反而不利于種苗的生長(zhǎng)，可能是由于馬鈴薯內(nèi)含有淀粉，為植物提供了一部分碳源，從而降低了對(duì)蔗糖的需求。蔗糖量的減少大大降低了成本，有利于工廠化生產(chǎn)。

黃花白及種子萌發(fā)與繼代培育幼苗較適宜的條件都是以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加活性炭２ ｇ／Ｌ，瓊脂８．０ ｇ／Ｌ，蔗糖１０ ｇ／Ｌ，馬鈴薯１００ ｇ／Ｌ，６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ， ＮＡＡ為０。 ＮＡＡ對(duì)于白及種子萌發(fā)及幼苗的發(fā)育沒(méi)有促進(jìn)作用，反而在一定程度上抑制了種子的萌發(fā)，這同張燕等［１０］的研究結(jié)果類似；６－ＢＡ對(duì)白及種子萌發(fā)及幼苗的發(fā)育有明顯促進(jìn)作用。添加一定量的馬鈴薯汁液對(duì)白及種子的萌發(fā)和幼苗的發(fā)育都有明顯促進(jìn)作用，但馬鈴薯添加量不宜過(guò)低，也不宜過(guò)高。

參考文獻(xiàn)：

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