食(飲)具大腸菌群兩種檢測方法比較

[摘要]目的 對食（飲）具消毒衛(wèi)生標準GB14934-94細菌指標大腸菌群檢測方法——紙片法和發(fā)酵法的檢驗方法進行比較。方法 用大腸桿菌標準菌株（ATCC25922）對兩種檢驗方法進行實驗。結果 在菌量很小的情況下，大胃腸菌群發(fā)酵法陽性率與大腸菌群紙片法陽性率結果相差甚遠。結論 兩種方法檢測大腸菌群，當菌量＜1cfu/mL時結果有明顯差異。

[關鍵詞] 食（飲）具大腸菌群；發(fā)酵法；紙片法

[中圖分類號] R378.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）22-82-02

Comparison of Two Kinds Methods for Detection of Coliform On Tableware

GAO Haiying WANG Junhua

Disease Control and Prevention Center of Jiangyin City in Jiangsu Province， Jiangyin 214431，China

[Abstract] Objective To compare paper disk method and fermentation method for detection of coliform on tableware，on the basis of bacteria coliforms detection methods in tableware health standard GB14934-94 with disinfection. Methods Two kinds of testing method were tested by E.coli strains of the standard （ATCC25922）. Results There was a significant difference in positive rates between two methods in the situation of the content of bacteria is small. Conclusion There is significant difference between the test paper disk method and the fermentation method when the content of bacteria ＜1cfu/mL.

[Key words] Coliform on tableware；Fermentation method； Paper disk method

中華人民共和國國家標準食（飲）具消毒衛(wèi)生標準GB 14934-94中細菌指標大腸菌群的檢測方法有兩種：發(fā)酵法和紙片法。發(fā)酵法的檢驗方法按GB/T 4789.3-2008執(zhí)行，紙片法采用專用的大腸菌群快速檢驗紙片進行檢驗。國標注明：發(fā)酵法與紙片法任一方法的檢驗結果均可作為判定依據(jù)。然而檢驗工作者在檢驗過程中發(fā)現(xiàn)，紙片法的大腸菌群檢出陽性率大于發(fā)酵法。因此，本實驗室應用大腸桿菌標準菌株（ATCC25922）對兩種方法進行比較，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標準菌種及培養(yǎng)基

大腸桿菌ATCC25922由江蘇省疾病預防控制中心提供；營養(yǎng)瓊脂（批號20110309）、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基（批號20101204）均由北京陸橋技術有限責任公司提供；大腸菌群食（飲）具快速檢測紙片（批號20101019）由南京三愛實業(yè)有限公司提供。

1.2 實驗方法

標準菌株大腸桿菌經(jīng)營養(yǎng)肉湯活化采用第3～5代的菌株，菌株用生理鹽水稀釋至0.5麥氏單位（菌量約108/mL）。本次實驗共做20個批次，每批實驗需3個不同稀釋度（菌量約10/mL、1/mL、10-1/mL）的實驗菌液，每個稀釋度2mL實驗菌液分別加入2塊培養(yǎng)皿做菌落計數(shù)；1mL實驗菌液加入50mL生理鹽水制成樣液，按GB/T 4789.3-2008進行大腸桿菌發(fā)酵法測定；1mL實驗菌液加入大腸菌群食（飲）具快速檢測紙片中經(jīng)37℃18h后觀察結果。

2 結果

2.1 實驗觀察

發(fā)酵法根據(jù)乳糖膽鹽發(fā)酵陽性管查MPN表。紙片法觀察紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為陽性；紙片上偶見紅色斑點的把紙片放入10mL乳糖膽鹽單料培養(yǎng)液中，經(jīng)培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣為陽性。

2.2 大腸菌群不同檢測方法結果比較

結果記錄根據(jù)以上實驗觀察結果，每批實驗記錄兩個檢測限稀釋度的實驗數(shù)據(jù)。見表1。

2.3 結果比較

實驗結果表明，菌量相同菌落總數(shù)＞1cfu/mL，大腸菌群發(fā)酵法陽性率為100%，大腸菌群紙片法陽性率為100%，結果相同。菌量相同菌落總數(shù)＜1cfu/mL，大腸菌群發(fā)酵法陽性率為15%（3/20），大腸菌群紙片法陽性率為75%（17/20），結果相差甚遠。

3 討論

通過本次實驗發(fā)現(xiàn)，兩種檢驗方法對于大腸菌群菌量＞１cfu/mL時陽性檢出率相同。而在菌量很小的情況下，大腸菌群菌量＜1cfu/mL時陽性檢出率存在明顯差異。證實了在食（飲）具大腸菌群的兩種檢測方法上，大腸菌群紙片法陽性率高于大腸菌群發(fā)酵法陽性率。根據(jù)GB14934-94采樣方法，紙片法是用無菌生理鹽水濕潤紙片后，立即貼于食具內(nèi)側(cè)表面30s后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)；發(fā)酵法是將10張5cm2（2.5cm2×2.0）的滅菌濾紙片緊貼食具內(nèi)面1min后置入50mL滅菌生理鹽水中充分振蕩后制成原液。這兩種方法最大的區(qū)別就是紙片法為采樣后直接培養(yǎng)觀察結果，發(fā)酵法是采樣后充分振蕩把細菌洗脫在生理鹽水中制成原液再進行檢測；那么在菌量很小的情況下紙片法的直接觀察陽性率就會高，而發(fā)酵法檢驗過程中涉及細菌的洗脫及取檢驗樣液的不確定會影響結果的陽性率。也就是在日常工作中，餐具大腸菌群菌量小的情況下用不同的檢測方法所得出的結果是不同的。

在GB 14934-94標準中，紙片法的結果判斷是：“若紙片保持紫色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為陽性”。在實際工作中經(jīng)常會有的一種現(xiàn)象是紙片未變黃，在紫藍色背景呈現(xiàn)幾個紅斑或片狀紅暈，在這種情況下就不能根據(jù)標準簡單地判為陰性，而應該無菌操作把紙片投入10mL乳糖膽鹽單料培養(yǎng)液中按發(fā)酵法檢驗判定是陰性還是陽性。這點非常重要，因為我們在日常工作中經(jīng)常碰到這種情況，經(jīng)發(fā)酵法檢驗后陽性率很高。遇婷[1]的大腸菌群紙片法與發(fā)酵法檢測食具消毒效果比較中，11份結果判為陰性的可疑紙片，再按大腸菌群發(fā)酵法檢驗后有6份為陽性，陽性率為54.5%。

建議在現(xiàn)有標準未改版的情況下，檢驗工作者對于無法判定結果的紙片要用發(fā)酵法進行確認。同時建議在將來的新標準改版時對于基層實驗室出現(xiàn)的問題多加考慮和改進[2]。

[參考文獻]

[1] 遇婷.大腸菌群紙片法與發(fā)酵法檢測食具消毒效果比較[J]. 預防醫(yī)學情報雜志，2008，24（12）：1016-1017.

[2] 高曉霞，邢寶芝.大腸菌群快速檢測紙片法與培養(yǎng)發(fā)酵法對餐飲具消毒效果檢測結果的比較[J]. 中國民族民間醫(yī)藥雜志，2008，17（6）：62-63.

（收稿日期：2011-06-09）