SYSMEX XE-5000與XS-800i血液分析系統對紅細胞碎片干擾血小板檢測的評價分析

[摘要] 目的 評價我科Sysmex XE-5000與XS-800i血細胞分析儀對紅細胞碎片干擾血小板（PLT）檢測結果的性能。方法 分別用XE-5000電阻抗法（PLT-I）、XE-5000熒光法（PLT-O）、XS-800i電阻抗法檢測經紅細胞碎片干擾后的標本，運用SPSS12.0進行數據回歸分析和配對t檢驗。結果 正常對照組的樣本用三種方法檢測，結果重復性好，差異不具有統計學意義（P＞0.05）。在高濃度組中三種方法的檢測結果都與對照組有明顯的差異（P＜0.01）；而在低濃度組PLT-O法顯示了其良好的抗紅細胞碎片干擾性，即干擾前后結果不具有統計學差異（P＞0.05）。結論 對于受紅細胞碎片干擾的血小板檢測，XS-800i電阻抗法抗干擾能力與XE-5000 PLT-I法一般，但XE-5000開通熒光通道后，其PLT-O檢測結果優于前兩者。

[關鍵詞] XE-5000；XS-800i；血小板計數；紅細胞碎片干擾試驗

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）32-79-03

Evaluation of Platelet Count in RBC Fragment Interference Experiment on SYSMEX XE-5000 and XS-800i Hemacytology Analyzer

LIU Wen ZHENG Xin LIU Xiaomin

Department of Clinical Laboratory，Cancer Center of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510060，China

[Abstract] Objective To evaluate the ability of PLT counting anti-interference in RBC fragment interference experiment on SYSMEX XE-5000 and XS-800i hemacytology analyzer in laboratory. Methods Counting PLT in RBC fragment interference experiment with XE-5000 electric impedance（PLT-I），XE-5000 optical（PLT-O）and XS-800i electric impedance methods. Compare and analyze the data according to SPSS12.0. Results There were significant correlations（P＞0.05）and good repeatability in the results among three methods in normal PLT. In High concentrations group，the result of the methods and control group were statistically significant（P＜0.01）.But in low concentrations group，PLT-O shows its excellent ability of anti-interference in RBC fragment experiment. Conclusion For counting PLT with RBC fragment interference，XS-800i electric impedance has common ability to anti-interference the same as XE-5000 PLT-I. The result also showed that the XE-5000 PLT-O method is better than XE-5000 PLT-I and XS-800i electric impedance for anti-interference in RBC fragment interference.

[Key words] XE-5000；XS-800i；PLT counting；RBC fragment interference experiment

血小板的主要功能之一是促進止血和加速凝血，同時血小板還有維護毛細血管壁完整性的功能[1]。血小板在止血和凝血過程中，具有形成血栓、堵塞創口、釋放與凝血有關的各種因子等功能[2]。而惡性實體腫瘤中血小板增多可能導致凝血異常，如血栓形成和出血傾向，血小板對腫瘤的疾病進展和轉移方面起著重要作用，因而血小板檢測結果往往對臨床醫生起到重要的提示作用。而腫瘤患者經藥物治療后，血細胞形態常會出現改變，少量紅細胞會出現破碎現象，導致對血小板檢測的干擾。目前，血細胞分析儀對血小板檢測的方法主要有兩種，即電阻抗法（PLT‐I）和熒光法（PLT‐O）[3]。采用傳統電阻抗法對血小板計數具有快速、精密度高、重復性好等優點；但易受紅細胞碎片、細菌等“非血小板顆?！钡母蓴_，容易造成血小板數目的假性增高。因而在血常規檢測中判定紅細胞碎片干擾血小板的有無并作出排除，是決定血小板檢測準確性的重要因素。日本希森美康公司XE5000血球分析儀具備PLT-I、PLT-O兩種方法，而美國貝克曼LH750則采用傳統電阻抗方法，但其對標本重復測定三次，精密度較高。本實驗在于比較兩臺血球分析儀對血小板檢測的抗干擾能力。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 日本SYSMEX公司提供的XE-5000（序列號為A1636）與XS-800i（序列號為63437）全自動血細胞分析儀，兩機共用相同校準液與質控品（使用前已進行原廠校準及質控，校準品批號為03200525，質控品批號為QC-10300810、QC-10300811、QC-10300812，結果均在控）。兩臺儀器經過專用校正物進行校正，日常保養正常，每個工作日均用原廠高、中、低三個水平的質控物做2次質控（上、下午各1次），兩機每個月做一次比對試驗，結果均較好[4]。儀器的工作狀態正常。

1.1.2 試劑 XE-5000與XS-800i均使用原廠試劑及質控品。

1.1.3 EDTA-K2 2mL真空采血管，由陽普公司生產。

1.1.4 標本來源 隨機抽取2011年5月本院的住院和門診患者或健康體檢者。標本120例（要求標本達2mL），年齡范圍3～80歲。標本置室溫下2h內完成檢測。

1.2 方法

1.2.1 標本制備 查標本相關歷史記錄，將ABO血型系統與RH血型相同的三支標本混為一支混合全血，共獲得40份混合全血，每份混合全血體積達6mL。

1.2.2 紅細胞碎片干擾試驗[5] 將1份混合血樣分裝4管（每管800μL），將第1管高速3600r/min離心5min后取壓積紅細胞層200μL，加入蒸餾水搖勻后高速3600r/min 離心5min，留取RBC碎片層，用生理鹽水反復洗3次后稀釋至200μL，取上述RBC碎片懸液80μL加入第2管血樣中（高碎片濃度干擾組），再將剩下的RBC碎片懸液120μL加生理鹽水稀釋至2mL，取上述RBC碎片懸液80μL加入第3管血樣中（低碎片濃度干擾組）。第4管血樣作為陰性對照組加80μL生理鹽水。用XS-800i上機，XE‐5000的PLT‐I和PLT‐O的手動進樣法對上述第2、3、4管進行檢測，以第2、3管PLT測定值與第4管測定值進行配對t檢驗（n＝20）。

2 結果

2.1 XS-800i組、XE-5000 PLT-I組與XE-5000 PLT-O組的對照組兩兩比較

XS-800i組、XE-5000 PLT-I組與XE-5000 PLT-O組的對照組兩兩作回歸分析及配對t檢驗，結果它們兩兩之間均無統計學差異（P＞0.05），相關性良好（圖1、2、3及表1），反映這兩臺儀器、三種方法的重復性良好，利于試驗。

由表1可知，三組對照組之間的P＞0.05，即三組對照組之間沒有統計學差異，顯示了這兩臺儀器三種方法在沒有干擾的情況下重復性良好。

2.2 紅細胞碎片對血小板干擾試驗

由上得共40組高濃度與低濃度紅細胞碎片對血小板干擾試驗，共作40組高濃度與低濃度紅細胞碎片干擾試驗，結果以XE-5000（PLT‐I）、XE-5000（PLT‐O）及XS-800i分別與自身對照組兩兩作配對t檢驗。其結果由表2可見，高濃度組XE-5000 PLT-I：t=13.8144，P＜0.01；XE-5000 PLT-O：t=43.277608，P＜0.01；XS-800i：t=16.21307，P＜0.01。提示在高濃度紅細胞碎片的干擾下，兩種儀器、三種方法的測定結果與對照組之間差異有統計學意義，即高濃度的紅細胞碎片對這兩種儀器、三種方法都有影響。低濃度組XE-5000 PLT-I：t=10.9025，P＜0.01；XE-5000 PLT-O：t=0.6407233，P＞0.05；XS-800i：t=16.21307，P＜0.01。顯示在低濃度紅細胞碎片的干擾下，XS-800i、XE-5000 PLT-I與對照組之間的差異也有統計學意義，而PLT-O表現出抗紅細胞碎片干擾的能力較強。

3 討論

現今的血液分析中，血小板檢測作為繼白細胞后最有力的診斷依據，其對血液疾病、腫瘤、感染、缺氧、創傷、骨折等，給臨床醫生都有明顯的提示作用[2]。但其由于體積過小及易受干擾（如小紅細胞、紅細胞碎片、血小板聚集等），計數往往不能精確反映實際數量。因而，精確的血小板計數方法一直為檢驗界所不斷追求的目標。目前計數血小板的方法主要有三類：①目視法：采用草酸銨溶液作溶血稀釋液，在相差顯微鏡下計數血小板。該方法容易受到充池、血小板在計數板上的分布、技師的主觀判斷等誤差因素影響[1，5]，重復性較差且費時，已不適用于臨床工作的需求，但因為是直接計數，仍作為世界衛生組織（WHO）推薦的參考方法。②流式細胞儀法：用熒光標記的血小板抗體標記血小板，通過流式細胞儀檢測熒光計數，但該方法麻煩且昂貴、儀器需求高、操作復雜、成本高，因此難以在臨床上推廣使用[6，7]。③傳統血細胞分析儀法：因其具有穩定性好、重復性好、精密度高、計數準確、測定速度快等優點，已廣泛應用于臨床。但傳統的電阻抗法不能將血小板與NPPs如小紅細胞、紅細胞碎片、白細胞碎片、細菌和真菌以及免疫復合物區分開來，造成計數不準。電阻抗計數技術已基本覆蓋了所有型號的不同儀器，即利用細胞通過小孔時產生電阻的變化，測定其體積及數量[8]。SYSMEX系列的血細胞分析儀（如XS-800i、XS-1000i等）測定血小板也具備此方法。但其最新的XE-5000及XE‐2100系列血細胞分析儀采用電阻抗和核酸熒光染色兩種方法同時檢測血小板，當中核酸熒光染色法通過對血小板中DNA與RNA的染色，繼而采用半導體激光進行檢測，此時若血樣中存在小紅細胞、紅細胞碎片等情況時，PLT‐O能對PLT作更精準的檢測。本次試驗則著重比較傳統電阻抗法與熒光染色方法對不同濃度紅細胞碎片干擾下血小板檢測的抗干擾能力[9]。根據本實驗表明：首先，正常樣本在PLT-I和PLT-O與800i的測量結果都非常接近，重復性良好，差異都不具有統計學意義（P＞0.05）。在高濃度組中無論是PLT-I和PLT-O及800i的結果都不可信，它們的結果都與對照組有著明顯的差異（P＜0.01）。而在低濃度組PLT-O顯示了良好的抗紅細胞碎片干擾性（P＞0.05）。

對于受紅細胞碎片干擾的血小板檢測，XS-800i電阻抗法抗干擾能力與XE-5000 PLT-I法一般，但XE-5000開通熒光通道后，其PLT-O檢測血小板的結果優于前兩者，一般臨床常見的溶血均不影響其血小板的測定，只有高濃度的溶血情況下（臨床罕見）其PLT-O法檢測血小板的結果才不可信[10]。不同檢驗科應考慮各自成本、經濟等因素，采取不同檢測儀器及方法。

[參考文獻]

[1] 肖木洲，楊平英，鄭惠紅，等. 血細胞分析儀測定血小板影響因素分析[J]. 現代醫藥衛生，2009，25（18）：2836.

[2] 林順寶，鄭德柱，劉文星，等. 血小板檢測及臨床意義探討[J]. 臨床檢驗雜志，2003，21（1）：17-18.

[3] 叢玉隆. 當代血液分析技術與臨床[M]. 北京：人民衛生出版社，1997：33-39.

[4] 葉應嫵，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗操作規程[M]. 第3版. 南京：東南大學出版社，2006：123-137.

[5] 郭玉娥，趙洪泉，趙志明． 血細胞分析儀計數血小板的影響因素[J]. 中國誤診學雜志，2006，5（1）：152-153.

[6] 朱忠勇. 準確計數血小板方法學研究進展[J]. 國外醫學臨床生物化學及檢驗學分冊，2002，23（3）：131-132.

[7] Valerie L. Valuation of the performance of the sysmex XT-2000i hematology analyzer with whole bloods stored at room temperature[J]. Vet Clin Pathol，2009，38：230-241.

[8] 王金芳，杜再娥. 儀器法與手工法對低血小板計數的對比分析[J]. 寧夏醫學雜志，2005，27（9）：629-630.

[9] Ruzicka K，Veitl M. The new hematology analyzer Sysmex XE-2100[J]. Archives of Pathology Laboratory Medicine，2001，125（3）：391.

[10] Briggs C，Harrison P，Grant D，et al. New quantitative parameters on a recently introduced automated blood cell counter-the XE-2100[J］. Clin Lab Haematol，2000，22（6）：345-350.

（收稿日期：2011-08-30）