HSP27和BIRC6的表達與大腸癌預后的關系

【摘要】 目的 探討HSP27和BIRC6在大腸癌中的表達及其與預后的關系。方法 收集182例臨床預后資料完整的大腸癌標本，用免疫組化染色HSP27和BIRC6抗體，觀察HSP27和BIRC6表達情況。采用χ2和Spearman等級相關檢驗，研究大腸癌HSP27和BIRC6的表達率與臨床病理特征的關系。生存曲線采用Kaplan-Meier生存分析方法。通過多因素Cox比例風險模型分析各變量對生存期的影響。結果 研究發現，大腸癌組織中HSP27表達率為79.7%(145/182)；而BIRC6表達率較低，為47.3%(86/182)。單因素分析顯示HSP27的表達率與腫瘤的TNM分期相關(P<0.05)，提示HSP27低表達的大腸癌患者生存期長于高表達患者。BIRC6的表達率與腫瘤的TNM分期、分化程度相關(P<0.05)，提示BIRC6高表達的大腸癌患者生存期長于低表達患者。多因素分析顯示HSP27為大腸癌預后的獨立預測因素，而BIRC6作為判斷大腸癌預后的預測價值有限。結論 本研究提示，HSP27對大腸癌的預后具有潛在的預測價值，而BIRC6表達水平作為判斷大腸癌預后的預測價值有限。

【關鍵詞】 結直腸腫瘤； 免疫組織化學； 熱休克蛋白27； 桿狀病毒凋亡抑制重復含體6

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大腸癌在西方發達國家惡性腫瘤中發病率居第3位，而在我國其發病率有不斷上升的趨勢^{［1，2］}。本研究擬研究大腸癌組織中熱休克蛋白27(HSP27)和桿狀病毒凋亡抑制重復含體6(BIRC6)的表達，以探討將HSP27和BIRC6用于大腸癌的臨床預后判斷的應用前景。

1 資料及方法

1.1 一般資料 經本地區倫理委員會同意，收集惠州市中心醫院2004年1月~2005年12月有預后結果的182例診斷為大腸癌的患者常規石蠟包埋的病理組織標本。組織切片經1名病理學專家核實并記錄相關數據。預后隨訪采用電話或書信方式隨訪途徑，所有病例均有5年以上隨訪資料。

1.2 試劑及免疫組化染色方法 染色采用免疫組化SP法，一抗為兔抗人HSP27和BIRC6多克隆抗體，均購自abcam公司；HRP標記羊抗兔多聚體(產品編號:PV6001)、DAB顯色液試劑盒、一抗稀釋液、枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)均購自北京中衫金橋公司。

1.3 結果判斷 判斷標準：根據陽性細胞在全部癌細胞中所占比例以及陽性細胞染色強度判定實驗結果。A：按顯色細胞數記分，陽性細胞數<1/3為l分，陽性細胞數1/3~2/3為2分，陽性細胞數>2/3為3分。B：按細胞顯色深淺記分，無陽性反應細胞為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。積分數=A×B。A×B=0判斷為(-)，A×B=1~2判斷為(+)，A×B=3~4判斷為(++)，A×B=6~9判斷為(+++)。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0統計學軟件包完成統計學分析。BIRC6表達水平與臨床病理特征之間的關系采用χ2檢驗；各參數之間的相關性采用Spearman等級相關檢驗。多因素COX比例風險模型分析各因素對生存期的影響。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 臨床病理學特征 182例大腸癌患者中男105例，女77例，男∶女=1.36∶1；年齡20～87歲，中位年齡61歲。TNM分期中0、I期占15.9%(29/182)，組織分化程度以低分化癌為主，占81.0%。見表1。

2.2 HSP27和BIRC6在大腸癌組織中的表達情況 運用免疫組織化學方法檢測HSP27和BIRC6在大腸癌中表達。在182例大腸癌標本中，37例(20.3%) HSP27表達陰性，145例(79.7%)陽性(包括弱陽性、陽性、強陽性)。96例(52.7%) BIRC6表達陰性，86例(47.3%)陽性(包括弱陽性、陽性、強陽性)。將表達陰性或弱陽性者歸類為低表達，表達陽性或強陽性者歸類為高表達。

經統計分析，HSP27表達水平與性別(P=0.677)、年齡(P=0.194)、分化程度(P=0.220)、腫瘤大小(P=0.170)無相關性，而與TNM分期(P=0.003)相關；BIRC6表達水平與性別(P=0.298)、年齡(P=0.181)、發病部位(P=0.227)及腫瘤大小(P=0.114)無相關性，而與分化程度(P=0.042)、TNM分期(P=0.043)相關，見表2。通過Spearman相關分析提示，HSP27表達率與TNM分期有Spearman相關，而BIRC6表達率與TNM分期、分化程度有Spearman相關，見表3。

2.3 生存分析 HSP27低表達組大腸癌患者生存期明顯長于高表達組患者。Log生存分析證實，大腸癌組織中HSP27低表達與高表達患者生存期差異有統計學意義 (P=0.000)。HSP27低表達與高表達患者中位生存時間分別為43.22個月(95%可信區間38.47~47.97)和26.97個月(95%可信區間21.69~32.23)。COX單因素分析顯示，TNM分期(P=0.000)和HSP27(P=0.000)；多因回歸分析顯示HSP27表達率、TNM 分期可作為判斷大腸癌預后一個的預測指標(P<0.05)。提示HSP27過表達可能與大腸癌患者預后密切相關。而BIRC6經COX單因素分析顯示，分化程度(P=0.030)、TNM分期(P=0.001)和BIRC6(P=0.049)，提示BIRC6高表達的大腸癌患者生存期長于低表達的患者。但多因素回歸分析顯示，BIRC6表達率與分化程度、TNM 分期均無統計學意義(P>0.05)，提示BIRC6作為判斷大腸癌預后的預測價值有限。

3 討論

大腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，隨著人民生活水平的提高，飲食中脂肪成分增多，纖維成分減少，大腸癌的發病率有逐年上升的趨勢。盡管大腸癌的治療手段有了很大的進步，但5年生存率依然很低。癌的侵襲轉移是患者預后差和死亡的主要原因。在大腸癌細胞的形成、生長、浸潤和轉移過程中，細胞因子的作用是多方面的。它們常與腫瘤細胞的分裂、增殖有關，還有的與腫瘤細胞的凋亡、細胞周期的調控有關。抑制腫瘤細胞的凋亡，將導致腫瘤惡性增殖，并可引起腫瘤對化療藥物的耐受性增加，對預后將產生不良影響。

熱休克蛋白作為“分子伴侶”在細胞凋亡過程中起調節和穩定細胞的作用，并通過調控細胞周期中所必需的蛋白構象參與細胞的增殖、死亡過程。HSP27為HSP家族中重要的一員，近年研究發現^［3］，HSP27在人正常組織和腫瘤組織中均有表達，并在大腸腫瘤中存在著持續高水平表達，被認為與大腸癌的發生、發展、腫瘤免疫以及對大腸癌化療耐藥的發生和腫瘤的預后都有密切的關系。

桿狀病毒凋亡抑制重復含體6(Baculoviral inhibitors of apoptosis repeat-containing 6， BIRC6)又稱為Bruce蛋白，是近年發現的一種新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins， IAPs）。BIRC6蛋白的過度表達，可以抑制多種因素，如TNFR、Fas受體介導的、柔紅霉素誘導的以及去除生長因子后引起的細胞凋亡^［4］。BIRC6在正常細胞中，除了在分裂的細胞之外，它在成熟的終末分化組織中基本無表達，而在胚胎發育過程中和人的大部分腫瘤組織中表達，很可能是一個新的腫瘤標記物^［4］。

本研究結果顯示，大腸癌組織中HSP27表達率為79.7%(145/182)；單因素分析顯示HSP27的表達率與腫瘤的TNM分期相關(P<0.05)，提示HSP27低表達的大腸癌患者生存期長于高表達的患者。多因素分析顯示HSP27為大腸癌預后的獨立預測因素。而BIRC6在大腸癌組織中表達率較低，BIRC6陽性表達率為47.3%(86/182)。進一步統計分析，BIRC6表達率與臨床病理參數之間的關系，提示BIRC6表達率與大腸癌TNM分級密切相關，BIRC6高表達提示腫瘤惡性程度低。單因素分析顯示BIRC6的表達率與腫瘤的TNM分期、分化程度相關(P<0.05)，顯示BIRC6高表達的大腸癌患者生存期長于低表達的患者。但多因素分析提示BIRC6作為判斷大腸癌預后的預測價值有限。誠然，隨訪應答率問題及混雜偏倚等因素可能會對本研究結果產生一定程度的影響。

綜上所述，本研究表明，HSP27表達率與大腸癌患者預后不良相關，可能是大腸癌患者的預后因素。而BIRC6表達率與大腸癌患者預后不良可能相關，但其表達率較低，因此BIRC6表達水平作為判斷大腸癌預后的預測價值有限。

參 考 文 獻

［1］ 余志金，許岸高，張曉慧，等.惠州市2004年惡性腫瘤死因分析.實用醫學雜志，2006，22(1)：101-102.

［2］ 許岸高，余志金，鐘旭輝，等.大腸癌高危人群篩查研究.中華醫學雜志，2010，90(2):116-118.

［3］ Zhijin Yu， Junli Zhi， Xiaofeng Peng， et al. Clinical signifcance of HSP27 expression in colorectal cancer. Molecular Medicine reports，2010，3(6):953-958.

［4］ Salilew-Wondim D， Holker M， Rings F， et al. Depletion of BIRC6 leads to retarded bovine early embryonic development and blastocyst formation in vitro.Reprod Fertil Dev，2010，22(3): 564-579.

（收稿日期：2011-08-01）

（本文編輯：車艷）