烏司他丁對胰腺炎手術患者脂氧素及核因子кB基因表達的影響

科技項目：廣東省湛江市科技攻關項目（NO：2008C02015）

作者單位：524037 廣東省湛江中心人民醫院

通訊作者：吳越宏

【摘要】 目的 探討烏司他丁對胰腺炎手術患者脂氧素及核因子кB基因表達的影響。方法 選擇胰腺炎大手術成人患者30例，隨機分為烏司他丁組（A組）和對照組（B組）。烏司他丁組于術前、術后第1、2、3 d分別給予烏司他丁30萬U+生理鹽水100 ml靜脈滴注，各組于手術結束時、術后第1、2、3 d抽取患者靜脈血2 ml分離單核粒細胞，利用凝膠電泳遷移率變化分析（EMSA）的方法測定核因子кB（NF-кB）、TNF-ɑ、IL-6、IL-8的活性，并利用聚合酶鏈反應方法（PCR）測定其基因表達。結果 烏司他丁組有防止術后產生全身炎癥反應綜合征的作用，該藥能有效促進脂氧素和抑制核因子кB基因表達，抑制TNF-ɑ、IL-6、IL-8等炎癥介質的釋放，從而產生對抗手術侵襲和防止術后并發癥的作用。結論 烏司他丁對胰腺炎手術患者脂氧素、核因子кB、TNF-ɑ、IL-6、IL-8都有抑制作用，從而防止術后產生全身炎癥反應綜合征的作用機制。

【關鍵詞】 烏司他丁； 胰腺炎； 脂氧素； 核因子кB； 基因表達

探討研究烏司他丁對胰腺炎手術患者脂氧素、核因子кB、TNF-ɑ、IL-6、IL-8的基因表達，從而探討烏司他丁防止術后產生全身炎癥反應綜合征的作用機制。預期該藥能有效促進脂氧素和抑制核因子кB基因表達。抑制TNF-ɑ、IL-6、IL-8等炎癥介質的釋放，從而進一步探討其產生對抗手術侵襲和防止術后并發癥的作用，為臨床應用烏司他丁對抗手術侵襲提供更充足的理論依據，現將結果報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇胰腺炎大手術成人患者30例，隨機分為烏司他丁組和對照組，每組各15例。烏司他丁組于術前、術后第1、2、3 d分別給予烏司他丁30萬U+生理鹽水100 ml靜脈滴注，對照組不使烏司他丁（天普洛安公司產品）。

1.2 方法 各組于手術結束時、術后第1、2、3 d抽取患者靜脈血2 ml分離單核粒細胞，利用凝膠電泳遷移率變化分析（EMSA）的方法測定核因子кB（NF-кB）、TNF-ɑ、IL-6、IL-8的活性，并利用聚合酶鏈反應方法（PCR）測定其基因表達。采用NEOGEN公司提供的脂氧素（L）試驗盒利用酶鏈免疫吸附（EIISA）測定脂氧素表達情況。

1.3 標本制備與貯存 單核細胞的提取：分離細胞，調整細胞數總量約為1×10⁷ 個，用于抽提核結合蛋白質及總RNA。核蛋白提取后置-80 ℃凍存備用；總RNA抽提分離后加入30～50 ul DEPC水溶液RNA，于-80 ℃保存。

1.4 統計學方法 采用SPSS 10.0軟件包處理，計量資料以x±s表示，組內比較用t檢驗，組間比較采用分差分析，計數資料比較用χ²檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組患者不同時間血漿NF-кB、TNF-ɑ、IL-8、IL-6、脂氧素水平比較見表1。

兩組NF-кB活性在術后1天后逐漸升高，術后2天達到峰值，然后下降，但術后3天依然高于術前水平；A組NF-кB活性在術后1、2、3天均低于B組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

兩組術后TNF-ɑ、IL-6、IL-8水平均比術前明顯升高（P<0.05），術后2天達高峰，之后逐漸下降。

兩組術后脂氧素合成平均比術前明顯增加（P<0.05），術后2天達高峰，之后逐漸下降，A組術后的脂氧素合成比B組明顯增加（P>0.05），兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

SIRS是胰腺炎外科手術后的一種嚴重并發癥，可以直接導致肺損傷、肝腎功能不全以及傷口愈合延遲，甚至導致多器官功能衰竭（MODS），嚴重影響患者手術預后。研究表明外科手術在發揮治療作用的同時也可使機體產生應激反應^［1］，激活SIRS是胰腺炎外科手術后的一種嚴重并發癥，可以直接激活機體內參與全身炎癥反應的多種相關炎癥介質，造成細胞因子瀑布樣級聯反應和白細胞過度激活，釋放大量氧自由基及溶酶體酶，可直接破壞細胞膜及毛細血管內皮細胞，加重機體各器官的損傷。參與術后全身炎癥反應的主要介質有TNF-ɑ、IL-6、IL-8。TNF是出現最早且最重要的

炎性介質。近年來，圍術期中防止術后產生全身炎癥反應綜合征的治療手段愈來愈受到國內外學者的關注。國內外多項研究認為，烏司他丁有防止術后產生全身炎癥反應綜合征的作用^［2］，其作用機制可能為抑制多種蛋白酶活性，預防細胞因子級聯反應，抑制白細胞過度激活及炎癥介質的釋放，阻斷細胞因子炎性介質與白細胞之間的惡性循環作用，減輕各種蛋白酶對重要器官功能的損害，但其作用的中心環節還有待進一步探討。

目前國外大量研究認為脂氧素（Lipoxins）合成增加和NF-кB合成減少都標志著炎癥的消退^［3，4］。脂氧素是一種內源性促進炎癥消退的脂氧合酶^［5，6］，在體內主要是通過血小板與中性粒細胞或內皮細胞與中性粒細胞相互作用，通過跨細胞通道生物合成的。可有效阻止中性粒細胞通過毛細血管后小靜脈進入炎癥組織。同時可以促進巨噬細胞對調亡細胞的吞噬清除作用，有利于炎癥的消除。

NF-кB是一種能與多種細胞基因的啟動子和增強子中的кB序列位點發生特異結合的核轉錄因子^［7，8］，在SIRS發展為MODS的過程中起到瓶頸的作用，主要表現為：（1）可以調控炎癥介質的產生，Nemeth等研究發現NF-кB可使炎癥介質（如TNF-ɑ、IL-12、MCP-1、NO等）的產生增加，而使抗炎介質（1L-10）的產生減少，促使炎癥進一步擴大；（2）NF-кB可以促使炎癥細胞的活化，使內皮細胞受損造成微血管通透性增加，微循環障礙，成為器官功能障礙的始發環節；（3）介導內皮細胞與白細胞的相互作用，促使PMN與內皮細胞黏附，并在 IL-8趨化因子的作用下從內皮細胞間跨膜游出，向各個器官的實質細胞浸潤，釋放多種炎癥介質，引起各生命器官毛細血管內皮細胞損傷，通透性增高，導致實質細胞損傷和MODS。

本課題擬在圍術期中應用烏司他丁，采用凝膠電泳遷移率變化分析法（EMSA）、酶鏈免疫吸附（ELISA）和聚合酶鏈反應（PCR）等分子生物學手段，探討烏司他丁對脂氧素、NF-кB、TNF-ɑ、IL-6、IL-8的活性及其基因表達的影響，進一步探討其防止術后產生全身炎癥反應綜合征（SIRS）的作用機制。

經過本課題研究，筆者認為烏司他丁對胰腺炎手術后，患者脂氧素、核因子кB、TNF-ɑ、IL-6、IL-8都有抑制作用，能防止術后產生全身炎癥反應綜合征的作用。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2011-02-21）

（本文編輯：郎威）