2160份臨床標本中泌尿生殖道支原體耐藥性的研究分析

作者單位：272100 山東省濟寧市市中區婦幼保健院（鄧廣博）；山東省濟寧市第一人民醫院（孟潔）；山東省濟寧市任城區中醫院（張慶平）

通訊作者：鄧廣博

【摘要】 目的 比較抗生素對臨床標本中泌尿生殖道支原體的抗菌作用。方法 采用直接肉湯藥盤法定量測定了臨床標本中422株解脲脲原體（Uu）和108株人型支原體（Mh）對8種抗菌藥物的耐藥性。結果 422株Uu對四環素、強力霉素、氧氟沙星、環丙沙星、米諾環素、阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素耐藥率分別為38.4%、23.2%、20.4%、65.4%、32.2%、0%、0.9%及5.7%；108株Mh對四環素、強力霉素、氧氟沙星、環丙沙星、米諾環素、阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素耐藥率分別為59.2%、48.1%、33.3%、75.9%、50.0%、100%、100%及27.8%。耐四環素的Uu株對強力霉素、環丙沙星、米諾環素都有交叉耐藥，但對阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素無交叉耐藥，耐四環素的Mh株對強力霉素、氧氟沙星、環丙沙星、米諾環素和交沙霉素有顯著性交叉耐藥。結論 泌尿生殖脲原體的耐藥性監測，對指導臨床治療具有重要意義。

【關鍵詞】 泌尿道感染； 抗生素； 支原體感染； 抗藥性； 微生物

Resistance of urogenital mycoplasma from clinical specimens to antibiotics for quantitative detection by direct broth dish method DENG Guang-bo，MENG Jie，ZHANG Qing-ping.Central District Maternity Children Hospital of Jining，Jining 272100，China

【Abstract】 Objective To compare the activity of antibiotics against urogenital mycoplasma from clinical spceimens.Methods Resistance of 8 antimicrobial agents against 422 strains of ureaplasma urealyticum（Uu） and 108 strains of mycoplasma hominis（Mh） from clinical specimens were determined using the direct broth dish methods.Results For 422 Uu the percentage of strains resistant（R）was as follows:tetracycline（38.4%），doxycycline（23.2%），ofloxacin（20.4%）， ciprofoxacin（65.4%），minocycline（32.2%），azithromycin（0%），roxithromycin（0.9%），josamycin（5.7%）.For 108 Mh the percentage of strains R was respectively:tetracycline（59.2%），doxycycline （48.1%），ofloxacin（33.3%），ciprofoxacin（75.9%），minocycline（50.0%），azithromycin（100%），roxithr-omycin（100%），and josamycin（27.8%）.The tetracycline-resistant Uu showed cross-resistance to doxycycline、ciprofoxacin and minocycline， but none of species showed cross-resistance to azithromycin、roxithromycin、jasamycin. The tetracycline-resistant Mh showed cross-resistance to doxycycline、ofloxacin、ciprofoxacin、minocycline and josamycin.Conclusion Resistance monitoring of urogenital mycoplasma periodically has important significance in clinical drug treatment.

【Key words】 Urinary tract infections; Antibiotics; Mycoplasma infections; Drug resistance; Microbial

近年來，對泌尿生殖道支原體所致感染受到普遍重視。隨著新抗菌藥物的不斷開發和使用，泌尿生殖道支原體耐藥性也不斷變化。為此，筆者采用直接肉湯藥盤法快速從泌尿生殖道感染患者標本中定量檢測泌尿生殖道支原體對常用抗菌藥物的耐藥性，旨在能部分反映濟寧地區泌尿生殖支原體耐藥情況，為臨床快速治療泌尿生殖道支原體感染患者提供參考依據。現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例來源 從性病門診收集了2160份泌尿生殖道感染患者標本，其中擬診為NGU840例，慢性前列腺炎362例，陰道炎或宮頸炎404例，慢性淋病554例。絕大多數患者有不潔性生活史，病程為3個月～2年，多數經不規則抗菌藥物治療，就診時為反復發作。

1.1.2 標本收集 男性患者通過肛門指檢按摩留取前列腺液或前段尿離心沉淀；女性患者用無菌棉拭子取宮頸分泌物或中段尿。尿標本經3000 r/min離心10 min，棄上清液，沉渣作為接種物。

1.1.3 抗菌藥物 8種抗菌藥物即標準品鹽酸四環素、強力霉素為sigma公司購置粉劑；標準品米諾環素為美國立達藥廠產品；阿奇霉素為克羅地亞普利瓦大藥廠生產；羅紅霉素為浙江紹興制藥廠產品；氧氟沙星、交沙霉素為中國科學院上海藥物研究所提供的粉劑；環丙沙星為湖南南光藥業有限公司提供的產品。以上抗菌藥物均用二甲基甲酰胺溶解，再用滅菌蒸餾水配成24 mg/ml的溶液作貯存液，-70 ℃冰箱保存備用。

1.1.4 培養基 采用雙相液體培養基：牛心消化液500 ml、葡萄糖1 g、氯化鈉5 g、尿素1 g、精氨酸1 g、0.1%酚紅20 ml、鮮酵母液100 ml、雙蒸餾水480 ml，pH值調至6.5，每瓶分裝90 ml，低磅滅菌，-25 ℃保存。使用前加入新生小牛血清10 ml、青霉素2000 U/ml，分裝于無菌小瓶（3 ml）^［1］。

1.2 方法

1.2.1 采用直接肉湯藥盤法 將四環素、強力霉素、米諾環素、阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素、氧氟沙星、環丙沙星分別按中介（I）、耐藥（R）即4.8 μg/ml濃度加入96孔聚苯乙烯板孔內，冷凍真空干燥，置4 ℃冰箱備用。

1.2.2 取0.2 ml泌尿生殖道感染患者標本接種含3 ml雙相液體培養基小瓶內，充分混勻，分別取100 μl加入吸附藥物的聚苯乙烯板孔內，設加抑制劑孔作為解脲脲原體（Uu）與人型支原體（Mh）鑒定孔，不加藥物孔為對照孔，加蓋置濕盒內放置37 ℃溫箱培養24～48 h觀察結果。

1.2.3 判定方法 對照孔24～48 h變紅，表示Uu或Mh生長；鑒定孔：1號孔變紅為Uu生長，2號孔變紅為Mh生長，兩孔均變紅表示Uu與Mh均生長，加藥孔24～48 h變紅，表示所加藥物無抑制作用，不變紅表示所加藥物有抑制作用。

2 結果

422株Uu、108株Mh的藥敏結果見表1。

表1 臨床標本中Uu與Mh株對8種抗菌藥物的耐藥性

注：I表示中介，R表示耐藥

由表1所示，在抗菌藥物4 μg/ml濃度下，以阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素對Uu抗菌活性最強，分別達100%、99.1%和93.4%，其次為氧氟沙星和強力霉素，分別為74.9%和70.6%；環丙沙星、四環素和米諾環素對Uu抗菌作用較弱，分別為20.4%、46.9%和48.4%。此外，結果也顯示，阿奇霉素、羅紅霉素對Mh呈高度抵抗，耐藥率達100%，但氧氟沙星、交沙霉素對Mh較為敏感，其抗菌作用分別為53.7%和64.8%。

162株Uu、64株Mh在四環素8 μg/ml濃度下，對其他7種抗菌藥物交叉耐藥情況見表2。

表2 耐四環素的Uu與Mh株對7種抗菌藥交叉耐藥率（n，%）

續表：

注：交叉率即交叉耐藥率

由表2可見，耐四環素的Uu株，同時呈現對強力霉素、環丙沙星和米諾環素有顯著性交叉耐藥（χ²0.57，0.23，0.25，P＞0.05），但對阿奇霉素、羅紅霉素、交沙霉素、氧氟沙星無顯著性交叉耐藥。耐四環素Mh株，除高度抵抗阿奇霉素、羅紅霉素外，同時對強力霉素、氧氟沙星、環丙沙星、米諾環素和交沙霉素有顯著性交叉耐藥（χ²0.04，0.27，0.09，0.05，1.21，P＞0.05）。

3 討論

有關泌尿生殖道支原體感染的治療，過去首選藥物為四環素。近年來發現，耐四環素的Uu與Mh株，在基因組中攜帶鏈球菌耐四環素基因，產生耐藥性，故不能作為首選藥物。Oggini等^［2］研究發現轉座子上攜帶tetM基因，它可以單獨作為tetM基因耐藥性轉座子或與其它耐藥性基因一起共同組成多重耐藥基因，導致對多種藥物的耐藥性。本實驗選用三類藥物中的8種分別測定臨床標本中Uu與Mh對其耐藥性。結果顯示，除阿奇霉素、羅紅霉素和交沙霉素對Uu株作用強外，其余藥物對Uu及Mh均呈現不同程度的耐藥性。耐四環素的Uu與Mh株，對強力霉素、米諾環素、環丙沙星也呈現高度耐藥，是否由tetM介導或多重耐藥基因引起，有待進一步探討。阿奇霉素和羅紅霉素對Mh高度抵抗，耐藥率達100%。說明臨床上不同種脲原體感染，應選擇不同抗菌藥治療，達到防止耐藥菌株，徹底治愈之目的。

采用直接肉湯藥盤法，與以前抗支原體藥敏方法比較^［3］，其優點是簡便、快速，能直接定量檢測臨床標本中支原體對抗菌藥物的耐藥性，直接為臨床提供選擇治療泌尿生殖道支原體藥物。

參 考 文 獻

［1］ 吳移謀，趙宗南.從非淋菌性尿道炎患者中分離尿素分解支原體的研究.中華皮膚科雜志，1999，24:251-252.

［2］ Oggini MR， Dowson CG， Smith JM， et al.The tetracycline resistance gene tet（M） exhibits mosaic structure. Plasmid， 2001，35:156-163.

［3］ 吳移謀，尹衛國，余敏君，等.3種抗菌藥物體外五種支原體的活性研究.中國現代醫學雜志，1996，6:8-9.

（收稿日期：2011-02-09）

（本文編輯：陳丹云）