溶血和帶血細(xì)胞標(biāo)本對(duì)HBsAg結(jié)果的影響研究

【摘要】 目的：探討溶血標(biāo)本對(duì)HBsAg結(jié)果的影響并提出針對(duì)性預(yù)防措施。方法：選擇我院30例HBsAg（+）和30例HBsAg（—）臨床資料作為研究對(duì)象，分別記為觀察組及對(duì)照組，兩組標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)及溶血后檢測(cè)，觀察溶血對(duì)HBsAg檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果：觀察組兩次檢測(cè)均為（+），對(duì)照組非溶血檢測(cè)為（—），溶血檢測(cè)HBsAg（+）10例，HBsAg（—）20例。結(jié)論：標(biāo)本溶血后對(duì)HBsAg（+）檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響，但是會(huì)導(dǎo)致HBsAg（—）出現(xiàn)假陽(yáng)性，溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】標(biāo)本檢測(cè)；溶血；乙肝表面抗原；ELISA

【中圖分類(lèi)號(hào)】R446.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1007-8231（2011）11-1877-01

乙肝表面抗原（HBsAg）檢測(cè)是診斷乙型肝炎的主要指標(biāo)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展酶聯(lián)免疫法因其簡(jiǎn)便，靈敏度高，不需要特殊設(shè)備，被廣泛應(yīng)用，雖然檢測(cè)時(shí)標(biāo)本要求不能溶血，但是在實(shí)際工作中［1]，會(huì)遇到各種原因造成標(biāo)本溶血，溶血標(biāo)本中非特異性物質(zhì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果會(huì)造成一定的影響。本文介紹溶血標(biāo)本對(duì)HBsAg檢測(cè)結(jié)果的影響。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇我院30例HBsAg（+）和30例HBsAg（—）臨床資料作為研究對(duì)象，分別記為觀察組及對(duì)照組，觀察組男性19例，女性11例，年齡在19~56歲之間，平均35.5±4.4歲；對(duì)照組男性20例，女性10例，年齡在20~54歲之間，平均34.4±4.8歲。

1.2 方法 酶聯(lián)免疫試劑盒由浙江艾康生物技術(shù)有限公司提供，制備溶血標(biāo)本，受檢血清置于低溫冰箱（—40℃）冷凍20min，取出融化以3000r/min離心10min，分離溶血血清。反應(yīng)條每孔加入待檢測(cè)標(biāo)本50μl，設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照各1滴，設(shè)置空白對(duì)照1孔，每孔加入酶結(jié)合物1滴，空白對(duì)照除外，搖勻，封板，置于37℃避光孵化30min，棄孔內(nèi)液體，洗板5次晾干，每孔加顯色劑A、B各1低，置于37℃避光孵育15min，目測(cè)比色，肉眼觀察無(wú)色為HBsAg（—），顯藍(lán)色為HBsAg（+）［2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS13．0對(duì)各項(xiàng)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各項(xiàng)參數(shù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，使用X2，t檢驗(yàn)，P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1

觀察組兩次檢測(cè)均為（+），對(duì)照組非溶血檢測(cè)為（-），溶血檢測(cè)HBsAg（+）10例，HBsAg（-）20例。

3 討論

用ELISA檢測(cè)HBsAg有快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是各級(jí)實(shí)驗(yàn)室常用的試驗(yàn)方法，溶血標(biāo)本應(yīng)用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性，其原因可能為溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)，紅細(xì)胞或血紅蛋白中亞鐵血紅素，HBsAg產(chǎn)生假陽(yáng)性，溶血的原因較多［3]，主要是體外溶血及體內(nèi)溶血兩種，體內(nèi)溶血是物理因素造成的，如人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后，生物因素如惡性瘧疾、藥物毒性反應(yīng)引起的，體外溶血是代謝性因素如遺傳性疾病引起血細(xì)胞脆性增加、機(jī)械性破壞、冷凍、血液接觸表面活性劑等［4]。此外采集過(guò)程中注射器或容器不干燥、不清潔，淤血時(shí)間過(guò)久，抽血消毒時(shí)消毒劑未擦干就采集血液標(biāo)本，出血速度過(guò)快等。

在本組患者中HBsAg（-）溶血患者出現(xiàn)10例假陽(yáng)性，其原因可能為溶血血清中含有過(guò)氧化物酶物質(zhì)，血紅蛋白亞鐵血紅素、紅細(xì)胞與聚乙烯孔被抗原或抗體結(jié)合［5]，在洗滌過(guò)程中不能完全被洗滌，谷胱甘肽等過(guò)氧化物酶有明顯相關(guān)性，谷胱甘肽廣泛存在于人體組織及細(xì)胞中，發(fā)生溶血時(shí)，過(guò)氧化物酶進(jìn)入血漿，大量吸附在細(xì)胞碎片及纖維蛋白上［6]，增加了洗滌的難度，可使過(guò)氧化氫釋放出原生態(tài)氧，催化底物，甲苯胺生產(chǎn)可溶性物質(zhì)顯色，易出現(xiàn)假陽(yáng)性。檢測(cè)一般采用一步檢測(cè)法，往往難以洗脫殘留的過(guò)氧化物酶催化底物四甲基聯(lián)苯胺顯藍(lán)色，并產(chǎn)生假陽(yáng)性，有研究表明對(duì)標(biāo)本進(jìn)行二部法檢測(cè)［7]，首先將血清清洗掉，殘留的過(guò)氧化物酶含量極微，溫育過(guò)程中不會(huì)與酶結(jié)合物所含的抗體、抗原結(jié)合，經(jīng)過(guò)兩次洗滌，降低了殘留的可能性，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。溶血標(biāo)本在臨床檢驗(yàn)中一般不進(jìn)行檢測(cè)，要求退回重新采集標(biāo)本，增加了患者的痛苦，延長(zhǎng)了檢驗(yàn)時(shí)間。溶血標(biāo)本能使未感染乙型肝炎病毒的健康患者出現(xiàn)假陽(yáng)性，增加了臨床診斷的困難［8]，同時(shí)也給患者帶來(lái)很大的心理壓力。為避免溶血對(duì)HBsAg檢測(cè)結(jié)果的影響，要采取積極的預(yù)防措施，醫(yī)務(wù)工作者熟練操作，避免人為因素導(dǎo)致溶血的發(fā)生，要從標(biāo)本采集、檢測(cè)過(guò)程、試劑選取、設(shè)備選取、檢測(cè)方法的選擇都要做要一絲不茍，龍憲和等采用二部法操作能排除溶血釋放的Hb對(duì)HBsAg檢測(cè)影響說(shuō)明洗板質(zhì)量指ELISA檢測(cè)中有重要作用。對(duì)于乙肝表面抗原陽(yáng)性的溶血標(biāo)本，其結(jié)果一定要慎重，務(wù)必做好準(zhǔn)確無(wú)誤，否則會(huì)給患者帶來(lái)極大的痛苦，造成精神壓力。標(biāo)本溶血后對(duì)HBsAg（+）檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響，但是會(huì)導(dǎo)致HBsAg（-）出現(xiàn)假陽(yáng)性，溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。

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