【摘要】鴨蛋清含有豐富的氨基酸,是提取天然氨基酸的一個新穎途經。在氨基酸生產的主要方法中,其中酶- 酸聯合水解法是目前生產氨基酸方法中較好的一種,所以利用酶- 酸聯合水解鴨蛋清提取氨基酸,具有可行性。同時利用雙酶- 酸酸水解鴨蛋清提取氨基酸的研究還未見報道,具有創新性,也顯示其廣泛的應用前景。
1.前言
我國鴨蛋產量居世界首位,目前的鴨蛋加工仍舊以傳統加工為主,如加工皮蛋、雙黃咸蛋等, 但鴨蛋的利用未實現最大化。如何開拓鴨蛋的利用渠道,正是我們思考的 問題。 蛋清占全蛋重量的32%, 蛋清屬于單純蛋白質, 能溶于水和鹽溶液,加熱易凝固。蛋清的主要成分是水和蛋 白質。其中: 水分: 86.2%, 蛋白質:12.3%,其余為脂肪、糖、礦物質。而蛋白質含有賴氨酸、組氨酸、精氨 酸等18 種氨基酸, 除脯氨酸為α- 亞氨基酸、甘氨酸不 含手性碳原子外, 其余氨基酸均為L-α- 氨基酸 [2] 。每 100g 蛋清中含有芳香族氨基酸1281mg, 其中L- 苯丙氨酸 為711mg, L- 酪氨酸570mg [1] 兩種蛋白質較多。鴨蛋清 蛋白質中不僅所含必需氨基酸的種類齊全, 而且含量豐富, 是天然食物中最理想的優質蛋白質 [3] , 同時它也是提取天 然氨基酸的主要來源。 多肽和蛋白質都是由氨基酸通過酰胺鍵連接而成的大分子化合物, 而目前氨基酸的生產方法主要有合成法、發酵法以及水解法。
2.氨基酸的主要生產方法
2.1 合成法
合成法主要有化學合成, 基因工程生產, 酶催化合成 三種方法。合成法雖然可以按照人的意愿合成氨基酸, 但成本太高、副反應多以及殘留化合物等問題制約著其發 展 [4] 。
2.2 發酵法
微生物發酵法, 包括微生物直接發酵生產氨基酸物質, 以及發酵產生某種特異性的酶產品而間接完成氨基酸物質的生產。早在1957 年, 日本就率先用微生物發酵法生產味 精, 我國是1964 年用該法投產的 [5)] 。但是由于發酵菌種類 單一, 得到的是單一品種的L-氨基酸, 且夾雜其他氨基酸的 種類和含量較少。發酵液經過預處理、離心或過濾除去菌體后, 可對其進行初步的提取,而若想得到高純度的氨基酸,還需進一步的精制提純如超濾、結晶, 工序較多且繁瑣。
2.3 蛋白質水解法
目前現代意義上的蛋白質水解是指以蛋白質為底物,利用酸、堿、酶的作用使蛋白質完全或部分水解的過程。
(1) 堿水解和酸水解
蛋白質水解最早采用的是堿法或酸法, 至少已有約100 多年的歷史, 這兩種方法簡單, 容易操作, 通常發生的是 完全水解。張國治 [6)] 利用堿法水解大豆蛋白, 進行了制 備新型調味料的研究。但在水解過程中多數氨基酸遭到不 同程度的破壞, 產生氨氣, 而且可以引起蛋白質的氨基酸 發生消旋, 得到DL- 氨基酸的混合物。 蛋白質酸水解, 常用鹽酸或硫酸在105-110℃反應20 小時作用進行水解。田桂萍 [7)] 等人, 做過采用鹽酸酸水 解蠶蛹來生產復合氨基酸營養物的研究。酸水解的優點是 不引起消旋化, 仍得到L- 氨基酸; 缺點是色氨酸被沸酸完 全破壞 [8)] , 含有羥基的氨基酸如絲氨酸或蘇氨酸有一小部 分被分解, 同時天冬酰胺和谷氨的側鏈酰胺也會被水解成 了羧基, 并且反應條件劇烈, 對設備要求高, 對環境污染 嚴重 [9)] 。
(2) 酶水解
人類利用蛋白酶水解蛋白質生產食品和調味料已有悠 久歷史, 像日本的納豆、中國的豆腐乳以及印度尼西亞的 丹貝等制品都是人們利用微生物蛋白水解豆類蛋白質生產 的食品。酶水解蛋白質在溫和的條件下進行, 從而避免了 在激烈條件下產生的副反應。這樣既不破壞氨基酸, 也不 發生消旋作用, 其蛋白質水解產物的氨基酸和起初蛋白質 相近, 因此日益受到了重視。國內關于食用蛋白水解的研 究報道自20 世紀90 年代開始出現, 主要的原料蛋白為乳 清、大豆、酪蛋白、蠶蛹蛋白、魚蛋白及動物血清蛋白等 [10)] 。如周愛梅 [11)] 、房新平 [12)] 等人嘗試用單酶水解動物 蛋白, 宋蓮軍等人 [13)] 進行了蠶蛹蛋白雙酶水解工藝條件 研究, 朱蓓薇等人 [14)] 進行了雙酶水解羊胎盤的實驗研究, Miche)Linder [15)] 等人將小牛骨骼進行酶性水解成功回收了小牛骨蛋白, Benjakul [16)] 分別用中性和堿性蛋白酶水解牙鱈的廢棄物。國外以酪蛋白、乳清、血清、大豆、玉米、 大米、小麥、水產品等為原料的蛋白質水解物類產品都已 正在研制或已經成功上市。
(3) 酶- 酸聯合水解
酶- 酸水解具有酸法或酶法水解之長, 補其短的優越性, 因為蛋白質先經酶解后, 所生成的肽片已大大減少, 削弱了其側鏈基團對肽的屏蔽保護作用, 減少了他們之間的阻擋效應, 因而可用較稀的酸或較少時間進行水解, 且水解徹底。由于所用的酸濃度較低或酸水解時間較少, 這 樣酸水解對氨基酸破壞就大為降低, 能夠保留水解產物的營養價值。黎星樹和鄺光榮 [17)] 做了植物蛋白酶—無機酸聯合水解畜血實驗, 還有于淑娟等 [18)][19))] 人也嘗試了酶酸 水解實驗, 結果都表明聯合水解比單酶水解或酸水解優越, 水解率高, 反應溫和, 水解徹底。
3.結語
綜上所述, 目前國內外生產氨基酸方法主要有合成法、 發酵法、堿水解、酸水解和酶水解, 而水解法利用合成法 和發酵法之長, 應用較廣泛。其中水解法生產氨基酸的原 料通常采用植物蛋白、水產物、動物角蛋白和血清等, 而 關于鴨蛋清蛋白水解的研究很少。但采用雙酶—酸水解提 取氨基酸卻未見報道。蛋清蛋白解離成氨基酸主要有兩個 階段, 一是溶解階段, 二是水解階段。所謂的溶解就是切 斷維系蛋白質空間結構的鍵, 使之變成多肽片段, 而水解 是使多肽降為游離的氨基酸。 所以, 采用鴨蛋清雙酶-酸水解提取氨基酸是具有創 新性和可行性, 同時鴨蛋清含有豐富的天然氨基酸, 其中 含有我國缺口較大的L- 苯丙氨酸的含量較多, 利用鴨蛋清 提取L- 苯丙氨酸, 一是可擴大鴨蛋的加工利用空間; 二是 可解決我國L- 苯丙氨酸不足, 為醫藥、食品加工等行業補 充豐富的天然氨基酸; 三是鴨蛋清的氨基酸營養豐富, 市 場前景廣闊。
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