卵巢癌患者外周血CD4+CD25highTreg細胞的測定結果與分析

【摘要】 目的 探討CD4+CD25highTreg細胞在卵巢癌患者診斷及鑒別診斷中的意義。方法 選擇手術治療經病理診斷的卵巢巧克力囊腫患者42例(巧克力囊腫組)和卵巢癌患者39例（卵巢癌組），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例。利用流式細胞儀進行CD4+CD25highTreg細胞檢測并進行比較。結果 卵巢癌患者CD4+CD25highTreg細胞水平明顯高于卵巢巧克力囊腫患者，卵巢癌晚期明顯高于早期患者。結論 檢測CD4+CD25highTreg細胞在卵巢癌患者早期診斷及鑒別診斷中具有重要意義。

【關鍵詞】 卵巢癌； CD4+CD25highTreg細胞； 診斷

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卵巢癌是一種惡性程度高、發展迅速的惡性腫瘤，發病率在女性生殖道惡性腫瘤中居第3位，病死率居第1位。卵巢癌早期癥狀隱匿，多于癥狀出現之前便發生盆腔腹腔及其部位轉移，70%~80%的患者就診時已處于晚期，因此，卵巢癌早期診斷及早期治療具有重要意義［1］。本文通過對卵巢癌早、晚期患者及卵巢巧克力囊腫患者CD4+CD25highTreg細胞進行的檢測，研究不同患者淋巴亞群異常的特點，旨在為卵巢癌的早期診斷及鑒別診斷提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年1月~2009年12月在本院住院行手術治療經病理診斷為卵巢巧克力囊腫患者42例(巧克力囊腫組)和卵巢癌患者39例（卵巢癌組），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例［2］。年齡為29～65歲，入選者均為新發病例，既往無手術史，排除合并其他惡性腫瘤、全身感染及心血管疾病等。正常對照50例，年齡（40.6±8.5）歲，全部經體檢證實為健康人。

1.2 標本采集和處理 均清晨空腹抽血，用EDTAK2抗凝真空管抽血2 ml備用。

1.3 檢測儀器試劑及方法 抗CD3-PerCP，抗CD25-PE，抗CD4-FITC抗體及同型對照，CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD45APCT細胞亞群試劑盒及Epics XL型流式細胞儀均購自美國貝克曼-庫爾特公司。檢測CD4+CD25high時，取2份新鮮采集的抗凝血各20 μl，分別加入抗CD3-PerCP/抗CD25-PE，抗CD4-FITC抗體及抗CD3-PerCP/抗CD4-FITC抗體/小鼠IgG-PE各10 μl，室溫避光溫育30 min，加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮為止，加入PBS 2 ml 3000 r/min離心5 min后棄上清，加入PBS 0.5 ml混勻后上機，選擇熒光強度>10的CD4+CD25high作為Treg細胞，記錄陽性細胞百分率。檢測淋巴細胞亞群時，另取新鮮采集的抗凝血20 μl，加入抗CD3-FITC/抗CD8-PE/抗CD45-PerCP/抗CD4-APC抗體10 μl，室溫避光溫育30 min，加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮為止，加入PBS 2 ml，3000 r/min離心5 min后棄上清，加入PBS 0.5 ml混勻后上機，選擇熒光強度>10的細胞，記錄陽性細胞百分率。

1.4 統計學處理 采用SPSS 11.0統計軟件對數據進行處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用兩樣本均數t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

3組患者中，卵巢巧克力囊腫患者CD4+CD25highTreg細胞無顯著異常（P>0.05），卵巢癌患者CD4+CD25highTreg細胞均有顯著異常(P<0.01)，晚期較早期有明顯異常（P<0.05），見表1。

：與正常對照組比較，*P<0.01；與卵巢癌早期比較嗎，△P<0.01

3 討論

人體中高表達CD25的CD4+T細胞是調節性T細胞（regulatory T cells，Treg），能抑制效應T細胞的功能［3］。CD25的CD4+T細胞通過識別，結合殺傷細胞抑制性受體，抑制自然殺傷細胞和細胞毒性T細胞的殺傷作用；并具有上調Fas配體的表達及可溶性Fas的分泌，誘導CD8+細胞的凋亡；抑制樹突細胞單核細胞和巨噬細胞等抗原遞呈細胞的抗原提呈能力等功能，促使腫瘤細胞發生免疫逃逸。卵巢癌的發生與發展是一個多因素多步驟的過程，與宿主因素密切相關，且最重要的是免疫功能，特別與T淋巴細胞功能的關系更密切。本研究結果顯示，卵巢癌組外周血高表達CD25的CD4+T細胞的表達明顯高于巧克力囊腫組與正常對照組，晚期卵巢癌組外周血高表達CD25的CD4+T細胞的表達明顯高于早期卵巢癌組。提示外周血高表達CD25的CD4+T細胞與卵巢癌的發生發展密切相關。因此，應用流式細胞儀檢測外周血淋巴細胞功能和高表達CD25的CD4+T細胞可用于卵巢癌患者的免疫狀態監測及判斷疾病進展程度。

參 考 文 獻

［1］ 沈鏗.卵巢癌化學治療的發展和挑戰.中國婦產科臨床，2006，3（1）：3-7.

［2］ 樂杰.婦產科學.第7版，北京：人民衛生出版社，2008：278-279.

［3］ 王禮文.CD4+CD25+調節性T淋巴細胞及相關標記物的研究進展.臨床檢驗雜志，2005，23(2):157-159.

（收稿日期：2011-08-05）

（本文編輯：郎威）