銀杏葉中銀杏內酯的提取\\分離和測定方法研究

摘 要:銀杏葉中銀杏內酯的提取，對溶劑萃取法和溶劑萃取——柱提法進行比較，實驗證明，利用溶劑萃取法所得銀杏內酯含量明顯高于溶劑萃取——柱提法，是一種操作簡單、能耗低且銀杏內酯含量較高的方法。銀杏內酯的含量測定，實驗中采用高效液相色譜(HPLC)測定銀杏提取物(GBE)中銀杏內酯含量的優化方法，GBE用甲醇溶解后，經酸性氧化鋁柱凈化，由反向HPLC測定銀杏內酯含量，該方法快速、有效，準確度高，重現性好。可用于銀杏葉及其提取物(GBE)中銀杏內酯的快速測定和分析。

關鍵詞:銀杏內酯白果內酯銀杏提取物HPLC法

中圖分類號:R284文獻標識碼:A文章編號:1674-098X(2011)09(a)-0009-01

銀杏(Ginkgo biloba L.)又名公孫樹，是最古老的植物之一，故有裸子植物活化石之稱。據《本草綱目》記載，銀杏果具有斂肺平喘、止遺尿、白帶的作用。現代藥理研究表明，銀杏內酯成分除具有擴張冠狀動脈血管、增加腦血流量、改善腦營養及抗菌作用外，還有較強的血小板活化因子(PAF)抑制作用。

1 材料與儀器

(1)材料:銀杏葉(產自江蘇省邳州市)，724樹脂(上海樹脂廠)，聚酰胺(100~130目，湖南澧縣一中試劑廠)。酸性氧化鋁(層析柱用，80~100目，天津化學試劑三廠)400°С下活化5h后使用。甲醇(色譜純)，去離子水，標準樣品:GA、GB、GC和BB。銀杏葉提取物(GBE):黃色粉末，河南魯山，其他試劑均為分析純。

(2)儀器:安捷倫公司HP1050液相色譜儀，視差檢測儀。

2 實驗方法與結果

2.1 溶劑萃取法

(1)采用干燥綠色銀杏葉500g;(2)浸泡銀杏葉時蒸餾水適量:按第1次6倍量、第2次5倍、第3次5倍量、浸提時保持沸騰并不停攪拌;(3)浸泡時間第1次2h、第2次、第3次各1h;(4)95%乙醇熱溶(78°C)水浸膏3次，每次用量按葉重1倍計;(5)石油醚脫脂6～8次;(6)乙酸乙酯萃取7～8次:(7)水洗萃取液至pH=7;(8)利用NaHCO3水溶液蕩洗可將黃酮類化合物轉化為鹽類并轉入水相。

共進行3次平行試驗，得率分別為0.61‰、0.64‰、0.62‰，產品為白色針狀晶體。經HPLC檢測，產品總內酯含量平均為81.5%。

2.2 溶劑萃取—柱提法

2.2.1 工藝流程，圖1

2.2.2 工藝條件

(1)選用干燥的綠色銀杏葉200g;(2)浸取劑用量以第一次6倍量、第二次4倍量為宜;(3)浸提時保持沸騰狀態并不斷攪拌(4)浸泡時間第一次2h、第二次1h;(5)樹脂顆粒應均勻，樣品液上柱前樹脂應水洗至中性。所用水為去離子水;(6)水洗去雜質時所用水量為銀杏葉投料量的8～10倍。

共進行4次平行試驗，得率(%)分別為2.44、2.51、2.48、2.5，平均為2.48%，產品為淡黃色固體粉末，易溶于水及乙醇。經HPLC檢測，這種方法的銀杏內酯含量為9.0%。

3 銀杏內酯的測定方法

3.1 銀杏內酯含量測定

(1)色譜條件:色譜柱:SUPELCO18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相:四氫呋喃—甲醇—水(1∶8∶15)，流速:0.5ml/min，檢測器:視差折光檢測器，柱溫34°C，檢測器溫度35°C。用外標法定量，進樣量5μl。

(2)對照溶液的制備:精密稱取銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C和白果內酯對照品適量，分別加甲醇溶解，釀成2mg/ml的對照品儲備溶液。依次用30%甲醇稀釋成含銀杏內酯A、B、C和白果內酯10、25、50、100、150μg/ml的系列對照品溶液。

(3)供試品溶液的制備:準確稱取銀杏提取物4mg，置于2ml容量瓶，30%甲醇溶解后，加30%甲醇至刻度線，搖勻。溶液過酸性氧化鋁吸附柱，用0.45μm的微孔濾膜過濾，作為供試液。

3.2 結果

(1)精密度試驗:取濃度為50μg/ml的銀杏對照品溶液，按色譜條件，重復進樣10次，測得銀杏內酯A、B、C和白果內酯的RSD分別為1.1%，1.1%，1.3%，1.0%，表明本法精度良好。

(2)加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的銀杏提取物2mg，共6份，3分加入四種銀杏內酯對照品儲備液(2mg/ml)40μl，3份加入對照品儲備液80μl，按供試品溶液制備項操作，以法制備、進樣，計算回收率，GA、GB、GC和BB的平均回收率分別為97.2%(RSD=2.4%)，99.3%(RSD=1.9%)，97.4%(RSD=1.8%)和97.7%(RSD=2.5%)。表明本法有良好的回收率。

(3)穩定性試驗:取銀杏內酯供試品溶液在0、1、2、4、6、8h分別進樣，記錄峰高，接過4種峰高的RSD分別為1.4%，1.4%，1.2%和1.5%。可見樣品溶液在8h內穩定。

2.4 樣品測定

取銀杏內酯供試液50μl注入液相色譜儀進行測定。測得4mg銀杏提取物中含GA的量為0.115mg，GC的量為0.047mg，BB的量為0.162mg，即銀杏內酯含量為9.0%。

4 結語

(1)對比試驗表明，溶劑萃取法制備設備簡單，產率高，能耗低，投資少，衛生安全，且得率高，為提取銀杏內酯的較佳方法。采用的溶劑萃取—柱提法質量優，含量高，但產率低。因為這種方法的最終目的是銀杏內酯和黃酮的混合物，所以銀杏內酯的含量較低，如果用于銀杏內酯提純還要加入除黃酮的步驟。

(2)采用HPLC —RI法，優化了對銀杏提取物的銀杏內酯含量的測定他方法，滿意的直接測得四種銀杏內酯的含量。實驗中用示差折光檢測器檢測，四種內酯在一定濃度的范圍內線性特性良好。本實驗方法操作簡便快速，準確度高，重現性好。

參考文獻

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