鮮三七根莖中提取三七總皂苷的純化及脫色工藝研究

摘 要:目的:研究影響分離、純化、脫色三七總皂苷的主要影響因素，確立三七總皂苷純化脫色工藝。方法:鮮三七提取液，按醇沉1次，時間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇，醇沉濃度與樣液比例為1∶1，加絮凝劑濃度為4%的工藝進行處理，采用D101大孔吸附樹脂富集純化和D941離子交換樹脂脫色三七總皂苷。結果:70%的乙醇為洗脫劑，上柱液濃度為0.2g生藥/ml，上柱液的量為200ml，上柱后先用蒸餾水快速沖柱的倍量為1.5，洗脫劑的倍量為3倍，洗脫時的速度(滴速)為60滴/min。結論:D101大孔吸附樹脂富集純化和D941離子交換樹脂脫色三七總皂苷，效果較好。

關鍵詞:純化脫色樹脂絮凝劑

中圖分類號:TQ461文獻標識碼:A文章編號:1674-098X(2011)05(b)-0002-02

三七Panax notoginseng(Buck)F.H. Chen為五加科人參屬植物，有“金不換”、“南國神草”等美譽，是我國名貴中藥材，也是云南獨具特色的中藥材資源，在云南的中藥產業中占有舉足輕重的地位和作用。其具有活血祛瘀，通脈活絡，抑制血小板聚集和增加腦血流量。用于腦路瘀阻，中風偏癱，心脈瘀阻，胸痹心痛;腦血管病后遺癥，冠心絞痛屬上述癥候者。目前，用干品三七來提取三七總皂苷進行純化及脫色的有文獻報道，而對鮮三七提取的三七總皂苷進行純化和脫色還沒有文獻報道，因為在鮮三七提取過程中含有大量的糖類、鞣質和淀粉等雜質，在分離純化時很困難，容易堵塞柱子。所以，我們在提取時采用了生物酶和絮凝劑來進行處理。本文就是以鮮三七根莖提取的三七總皂苷，通過對D101大孔吸附樹脂富集純化和D941離子交換樹脂脫色工藝條件7進行研究，探索對鮮三七提取的三七總皂苷進行純化及脫色工藝的可行方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

離心用DL—40B離心機;減壓濃縮用低溫冷卻液循環泵(型號:OLS8—5/10)、循環水式多用真空泵(SHB—111)、旋轉蒸發儀(BUCHI Rotavaper R—200)。日本島津LC-10Avp高效液相色譜儀，SPD紫外檢測器，電子分析天平，超聲波清洗器。

1.2 試藥

鮮三七根莖中提取的三七總皂苷，由文山三七研究院新產品開發研究所試制;對照品三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈為色譜純，水為重蒸水。絮凝劑:購自山東奧康生物科技有限公司。

2 實驗方法

2.1 對鮮三七提取的三七總皂苷進行純化研究[1]

對干三七提取的三七總皂苷進行分離提純，經大量查資料證明，目前大孔樹脂有不同的三種型號:D101、AB-8及HPD-100，3種樹脂均可以富集、分離純化三七總皂苷，其中D101及HPD-100均為聚苯乙烯結構的非極性大孔樹脂且表面積均為400～500m2/g，但HPD-100為D101升級換代產品，AB-8為弱極性樹脂，為此我們選擇了D101大孔樹脂進行分離純化。

在用D101大孔樹脂純化之前，我們先用最佳提取工藝:把鮮三七根莖破碎為10目的鮮三七顆粒，加6倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2h，再加入0.1ml/200g生物酶A，0.2ml/200g生物酶B，可得到鮮三七提取液。

因鮮三七提取液中含有大量糖類、鞣質和淀粉等雜質，所以，造成在分離純化時很困難，容易堵塞柱子，所以，采用了絮凝劑來進行醇沉。表1就是我們考察的五個因素:醇沉的時間、醇沉乙醇的濃度、提取液濃縮后與乙醇濃度醇沉比例、絮凝劑的量、醇沉次數。

經過以上因素的考察，分析，反復試驗，得出三因素的結論:醇沉最佳時間為12 h;醇沉乙醇濃度為70%;醇沉次數為1次。

然后我們又進行其余兩個因素:提取液濃縮后與乙醇濃度醇沉比例與絮凝劑的用量進行兩因素水平正交試驗。按以上最佳工藝提取的鮮三七提取液，我們確定了醇沉次數為1次，醇沉時間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇。現按醇沉濃度與提取液按不同比例，加不同的絮凝劑進行了二因素正交實驗(表2)。

通過實驗，可確定鮮三七提取液處理工藝條件為:醇沉濃度與樣液比例為1∶1，絮凝劑濃度為4%。

把提取的鮮三七提取液，按醇沉1次，時間為12h，醇沉濃度為70%的乙醇，醇沉濃度與樣液比例為1∶1，加絮凝劑濃度為4%的工藝進行處理。處理好的三七提取液，上D101大孔樹脂純化，同時，在純化時我們還考察了洗脫劑的選擇、上柱液濃度的選擇、上柱液的量、上柱后先用蒸餾水快速沖柱的倍量、洗脫劑的倍量、洗脫時的速度(滴速)等因素，這六個因素都對三七總皂苷的純化有影響。

以上六因素經過考察，分析，反復試驗，得出試驗結論:70%的乙醇為洗脫劑;上柱液濃度為0.2g生藥/ml;上柱液的量為200ml;上柱后先用蒸餾水快速沖柱的倍量為1.5;洗脫劑的倍量為3倍;洗脫時的速度(滴速)為60滴/min。

2.2 對鮮三七提取的三七總皂苷進行脫色劑的篩選[2]

經過多次試驗證明，D101大孔樹脂分離效果確實好，但脫色效果不好。所以，我們選擇了活性炭和氧化鋁來脫色，可兩者脫色時流速非常慢，而且效果不明顯，其中的氧化鋁在脫色中損失很大。而用大孔弱堿性陰離子交換樹脂D-941柱子來脫色，脫色效果最好，與其它三種進行了比較。下表3就是四種脫色效果的比較。

經以上四種脫色材料試驗證明，最后我們選擇大孔弱堿性陰離子交換樹脂D-941來脫色，脫色效果較好，總皂苷顏色偏白。

用以上D101大孔樹脂來分離得到的三七總皂苷，把三七總皂苷分別用蒸餾水和70%乙醇溶解，得到兩種上柱液，分別過D-941樹脂柱，再分別收集洗脫液得到兩種三七總皂苷，經兩種檢測對比，70%乙醇為上柱液溶劑時，單體皂苷Rb1和Rg1保留率均很高，且純度也較蒸餾水的高。所以，我們選擇了70%乙醇為上柱液溶劑，工藝簡潔合理。把分離得到70%的洗脫液，分別上四棵大孔弱堿性陰離子交換樹脂D-941柱子來脫色，然后分別用蒸餾水、30%、50%、70%的乙醇洗脫，收集合并過柱液和洗脫液，減壓濃縮，真空干燥得四種脫色后的三七總皂苷，經檢測洗脫溶劑為70%時，所得總皂苷質量最高。所以，我們確定70%乙醇為最優洗脫溶劑。

按以上成型工藝，我們進行了鮮三七提取三七總皂苷與干三七提取三七總皂苷的比對實驗，通過實驗可知，鮮三七總皂苷得率比干三七總皂苷得率高、三個單體(R1+Rg1+Rb1)含量為鮮三七比干三七高。所以，開展鮮三七的產地加工，是拓寬三七加工路子，促進三七資源的多樣化綜合利用，加強對產業鏈結構控制的重要方面，極大地提升了三七產業技術層次，實現了產品經濟附加值的明顯提高。

參考文獻

[1]謝茵，邢桂琴，劉秀芬.三七提取液中三七總皂苷的分離純化工藝研究[J].山西醫科大學學報，2006，27(6):613～615.

[2]李東，黃羅生，平其能.三七總皂苷純化和脫色工藝研究[J].海峽藥學，2008，20(1):12～15.