壯陽促孕散對雌性腎陽虛大鼠垂體-性腺軸分泌激素的影響

摘要：試驗研究了中藥壯陽促孕散對雌性腎陽虛大鼠垂體—性腺軸分泌激素的影響，初步探討其作用機制。用氫化可的松造雌性大鼠腎陽虛模型，造模２１ ｄ，從試驗第八天開始，中藥治療組灌胃中藥壯陽促孕散，陽性對照組灌胃金匱腎氣丸，連續給藥１４ ｄ。放射免疫法測定血清中雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）、黃體生成素（ＬＨ）和促卵泡激素（ＦＳＨ）。結果表明，模型對照組造模后大鼠出現明顯的陽虛癥狀，體重下降，血清中Ｅ２、Ｐ下降，ＬＨ、ＦＳＨ升高，給藥后陽性對照組、中藥治療組大鼠體重增加，血清中Ｅ２、Ｐ升高，ＬＨ、ＦＳＨ下降。中藥壯陽促孕散可調節雌性腎陽虛大鼠血清中ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ的分泌，對生殖內分泌有促進作用。

關鍵詞：壯陽促孕散；大鼠；腎陽虛；垂體—性腺軸

中圖分類號：Ｒ２８５．２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）20－4240-03

Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＺＣＦ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ Ａｘｉｓ ｉｎ Ｋｉｄｎｅｙ－Ｙａｎｇ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｆｅｍａｌｅ Ｒａｔｓ

ＸＵ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ，ＪＵ Ｙｕ－ｌｉｎ，ＺＨＡＮＧ ｍｉｎ，ＸＩＡ Ｇｕａｎｇ－ｊｕｎ

（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹａｎＪｉ １３３０００，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｏｎ ｔｈｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｘｉｓ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ， tｈｅ ｋｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗａｓ ｂｕｉｌｔ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ｆｏｒ ２１ ｄａｙｓ． Ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔｈ ｄａｙ， Jｉｎｋｕｉｓｈｅｎｑｉ ｐｉｌｌ ａｎｄ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｂｙ ｇａｖａｇｅ ｆｏｒ １４ ｄａｙｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ Ｅ２， Ｐ， ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ building， ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｍｐｔｏｍ． Ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｕｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ． Ａｆｔｅｒ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ； while ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＬＨ ａｎｄ ＦＳＨ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＺＣＦ ｃｏｕｌｄ ａｄｊｕｓｔ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＬＨ， ＦＳＨ， Ｅ２ ａｎｄ Ｐ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ， ａｎｄ ｈａｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎ ｐｒｏｃｒｅａｔｉｏｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＺＣＦ； rａｔｓ； kｉｄｎｅｙ－ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ； pｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｘｉｓ

目前，利用中藥防治畜禽疾病的研究，逐步受到人們的重視。研究表明，中草藥能調節動物機體的繁殖機能，用中草藥防治家畜繁殖障礙性疾病也有報道，下丘腦-垂體-性腺軸（卵巢和睪丸）三級結構形成一個機能中心，在哺乳動物發育、生殖、衰老中起重要作用［１，２］。利用中藥來提高機體的性激素水平和改善下丘腦－垂體－性腺軸功能，是一條可探索的途徑。中藥壯陽促孕散是根據中獸醫基礎理論結合動物生理特點而研制的純中藥復方制劑，經前期藥效學、毒理學的相關研究，已經證明該中藥可有效提高家兔、犬、熊及小鼠等動物的繁殖性能［３，４］。該試驗通過觀察中藥壯陽促孕散對雌性腎陽虛大鼠垂體—性腺軸分泌激素的影響，初步探討其作用機制，為全面開發及臨床使用此藥提供理論依據。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１試驗動物健康雌性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２８只，體重１６０～１８０ ｇ，由延邊大學醫學院動物實驗室提供。

１．１．２試驗儀器ＤＦＭ－９６型多管放射免疫計數器（眾成機電技術公司）；電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

１．１．３試驗藥品放射免疫分析試劑盒，購于北京北方生物技術研究所，批號０８０８２０；壯陽促孕散， 由延邊大學農學院藥理實驗室制備；金匱腎氣丸，購于北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠，批號 ８０１１９１３；氫化可的松，購于安陽九州藥業有限責任公司，批號０７０５０５－１。

１．２方法

１．２．１動物分組與給藥方式健康雌性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２８只自購入后，喂養１周，隨機分為４組：正常對照組、模型對照組、陽性對照組和中藥治療組， 每組７只。除正常對照組外，其余３組從試驗的第一天起，每天上午按照每千克體重注射２０ ｍｇ氫化可的松注射液肌肉注射，連續２１ ｄ。從試驗第八天開始，中藥治療組每天按照每千克體重灌胃１．０ ｇ中藥壯陽促孕散；陽性對照組按照每千克體重灌胃２．７ ｇ金匱腎氣丸；正常對照組和模型對照組每天灌胃去離子水２ ｍＬ，連續給藥１４ ｄ。給藥期間，每隔１ ｄ稱體重，按體重變化調整給藥量。

１．２．２指標測定最后一次給藥１ ｈ后，眼球采血，室溫靜置３０ ｍｉｎ 后，３ ０００ｒ／ｍｉｎ 離心２０ ｍｉｎ，吸出血清，-２０ ℃冰箱保存備用。采用放射免疫法測定血清中雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）、促卵泡生成激素（ＦＳＨ）、促黃體生成激素（ＬＨ）。

１．２．３數據處理試驗數據進行方差分析統計學處理。

２結果與分析

２．１生理狀態變化

模型對照組大鼠被毛無光澤、枯槁豎起，弓背蜷縮，倦怠，動作遲緩，攝食少，糞便稀，體重增長緩慢，與腎陽虛癥狀表現相符。給藥后中藥治療組、陽性對照組大鼠腎陽虛癥狀明顯改善， 與模型對照組相比大鼠被毛順滑，攝食正常，糞便基本成型，但精神狀態不如正常對照組。

２．２體重變化

由圖１可知，正常對照組平均體重持續上升，并且試驗前后體重增長幅度很大；模型對照組前７ｄ體重有波動，但總體沒有增長，以后持續下降；陽性對照組和中藥治療組在給藥前，即前７ｄ，體重上下波動，給藥后，體重緩慢增長，增長趨勢基本相同，但增長幅度不大。

２．３大鼠血清中Ｅ２、Ｐ、ＬＨ、ＦＳＨ含量

由表１可見， 模型對照組與正常對照組相比Ｅ２、Ｐ、ＦＳＨ和ＬＨ差異顯著（Ｐ＜０．０５）；中藥治療組和陽性對照組與模型對照組相比，Ｅ２差異顯著（Ｐ＜０．０５），Ｐ差異不顯著（Ｐ＞０．０５），但比模型對照組有所增加，ＦＳＨ、ＬＨ均差異顯著（Ｐ＜０．０５）。說明中藥壯陽促孕散能有效改善大鼠血清中Ｅ２、Ｐ、ＦＳＨ和ＬＨ激素的分泌，對大鼠生殖內分泌有促進作用。

３小結與討論

腎陽虛動物模型的造模方法很多［５］，用氫化可的松造大鼠腎陽虛模型是其中的一種主要方法［６］。試驗造模后大鼠生理特征與腎陽虛癥狀相符，說明氫化可的松造模成功。

雌性動物生殖系統突出的生理特點是具有周期性，在下丘腦—垂體—卵巢軸的調控下，有關的激素發生周期性的變化。正常情況下，卵巢雌激素和孕激素的分泌受到下丘腦和腺垂體分泌的ＬＨ和ＦＳＨ激素調控［７，８］。下丘腦周期性脈沖式分泌促性腺激素釋放激素（ＧｎＲＨ），通過垂體門脈系統作用于腺垂體，促使ＦＳＨ和ＬＨ的分泌和周期性釋放。發情前期，卵泡分泌雌二醇（Ｅ２），發情期排卵后黃體分泌Ｅ２和大量孕激素（Ｐ），同時反饋性地抑制ＧｎＲＨ以及垂體分泌的ＬＨ和ＦＳＨ，ＬＨ和ＦＳＨ隨之下降，由于此時血中ＬＨ和ＦＳＨ的下降，下丘腦分泌促性腺激素，ＧｎＲＨ的分泌增加，又促使ＬＨ和ＦＳＨ的分泌增加，于是進入下一個發情周期。下丘腦垂體卵巢軸的自上而下的調控以及Ｅ２、Ｐ自下向上的反饋調節作用，影響協調著雌性動物的整個生殖內分泌系統的功能。何嘉琳等［９，１０］造腎陽虛模型后雌二醇（Ｅ２）和孕激素（Ｐ）下降，并且由于失去了Ｅ２和Ｐ的反饋性抑制，ＧｎＲＨ、ＬＨ和ＦＳＨ隨之上升，經中藥治療后，Ｅ２和Ｐ水平上升，ＬＨ和ＦＳＨ下降。本試驗研究發現，模型對照組血清中Ｅ２和Ｐ明顯降低，ＬＨ和ＦＳＨ水平明顯上升。中藥治療組、陽性對照組雌性大鼠血清中Ｅ２和Ｐ升高，ＬＨ、ＦＳＨ下降。與Ｅ２和Ｐ對下丘腦和垂體分泌的ＬＨ、ＦＳＨ有負反饋調節作用的觀點一致。

由試驗結果可知，中藥壯陽促孕散的作用機制可能是通過作用于卵巢促進Ｅ２和Ｐ的分泌。但由于垂體分泌的ＦＳＨ、ＬＨ一方面受下丘腦的調節，另一方面還受Ｅ２、Ｐ的負反饋調節，因此壯陽促孕散是否也直接作用于垂體，還有待于進一步研究。該研究表明，中藥壯陽促孕散可調節腎陽虛大鼠血清中ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２和Ｐ的分泌，對雌性腎陽虛大鼠垂體－性腺軸有調節作用。

參考文獻：

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［４］ 李太元，鞠玉琳，田廣燕，等． 用中草藥制劑提高犬繁殖率的研究［Ｊ］．黑龍江畜牧獸醫，２００５（８）：７３－７４．

［５］ 盧文麗，方肇勤．陽虛動物模型的造模方法與評析［Ｊ］．上海中醫藥大學學報，２００４（１２）：４４－４８．

［６］ 陳英華，孫琪，歐陽軼強，等．腎陽虛動物模型造模方法綜述［Ｊ］．中國醫藥學報，２００３，１８（６）：３７０－３７２．

［７］ ＳＣＨＯＥＶＥＲＳ Ｅ Ｊ，ＫＩＤＳＯＮ Ａ，ＶＥＲＨＥＩＪＤＣＮ Ｊ Ｈ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｏｎ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｄ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｗ ｏｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］． Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ， ２００３， ５９（9）：２０１７－２０２８．

［８］ 姚泰．生理學［Ｍ］．第六版．北京：人民衛生出版社，２００３．３８１－３８３．

［９］ 何嘉琳，方曉紅，高濤，等．育麟顆粒對排卵障礙大鼠子宮、卵巢ＥＲ及下丘腦弓狀核超微結構影響的研究［Ｊ］．中國中醫藥科技，２００８，３（２）：９０－９２．

［１０］ 張少文，張濤，謝文．補腎為主的中藥復方對去卵巢大鼠性腺軸及甲狀腺軸功能的影響［Ｊ］．中國中醫藥科技，２００３，１０（２）：８４－８５．