1155例HIV感染者外周血中T淋巴細胞亞型的結果分析

【摘要】 目的：研究艾滋病病毒感染對外周血T淋巴細胞亞型的影響。方法：采用流式細胞計數儀檢測我市1155例HIV感染者外周血中T淋巴細胞亞型的變化。結果：HIV感染者CD4細胞百分數和CD4/CD8比值顯著降低，CD8細胞百分率明顯升高，差異有統計學意義（p<0.01).感染者年齡不影響其表達，差異有統計學意義（p>0.05）。結論：HIV感染者T淋巴細胞亞群的檢測，對判斷病情和評估療效均有重要的臨床價值。

【關鍵詞】 FCM；HIV；T淋巴細胞亞群

Analysis of T lymphocyte phenotype of 1155 HIV infected persons in peripheral blood

Li qiao qing Chen yan zhi

People抯 hospital of Bao shan Yun Nan Province 678000 China

【Abstract】 Objective: To study HIV infection on T lymphocyte subtype of peripheral blood.Methods: The peripheral blood T lymphocyte phenotype changes of 1155 HIV infected persons detected by Flow Cytometric in our city. Results: percentage of CD4 cell and ratio of CD4/CD8 HIV infected significantly decreased， percentage of CD8 cell was significantly higher， the difference was statistically significant (p <0.01). The age difference of HIV infected persons does not affect the expression of CD4/ CD8， there is no statistically significant (p > 0.05). Conclusion: The detection of T lymphocyte subsets in HIV infected persons for judging the conditions of patient and assessment of effect of curing disease has important clinical value.

【Keywords】 FCM;HIV;T cell subsets

【中圖分類號】 R512.91【文獻標識碼】 Ｂ【文章編號】 1007-8231（2011） 07-0288-03

準確可靠的CD4+T淋巴細胞檢測是評價HIV感染者免疫功能狀況，預測病程進展，確定疾病分期和治療時期，評價抗病毒藥物治療效果和估測預后的主要指標。進行性CD4+T淋巴細胞損耗可能與臨床上出現嚴重癥狀有關，也預示可能預后不良。世界衛生組織（WHO）和歐美等國家均推薦HIV感染者每3－6個月監測一次CD4+T淋巴細胞水平，并以該指標作為開始預防間質性漿細胞肺炎和其它機會性感染，以及開始抗逆轉錄病毒治療的因素。我院按照國家抗病毒治療的相關規定執行，我科HIV檢測實驗室為抗病毒治療提供及時、準確的數據。

1資料與方法

1．1臨床資料

1155例患者均為我市HIV抗病毒治療病人，男688例，女467例。最大年齡75歲，最小年齡2歲，平均年齡（36.5±13.87）歲。

1．2儀器與試劑

儀器為美國BD FACSCalibur流式細胞分析儀

使用BD CaliBRITE微球，運行FACSComp軟件進行儀器的質量控制。

定期進行儀器校準，做好室內質量控制，參加實驗室能力驗證。

使用 MultiSET軟件及配套三色試劑CD3CD4CD8來獲取和分析T淋巴細胞亞群。

1.3流式細胞術計數法原理

流式細胞術(FCM)是對細胞和微粒進行快速、靈活、定量分析分類的高精技術，它融合了激光、電子計算機、單克隆抗體、熒光素化學、細胞化學染色等技術的優點。其基本原理是以激光為光源，將被檢細胞用熒光標記抗體結合后輸入流式細胞儀，通過高速流動系統對細胞排列成行，一個一個的流經檢測區，當細胞從流動室噴嘴處流出時，超聲振蕩攪動液流，使液流斷裂成一連串均勻的小滴，每滴內最多只含有一個細胞，細胞經熒光探針的光反應和標記物的光散射能力中獲取信息，由光電倍增管接收并轉化成脈沖信號，并進行增強，數據經電腦處理、分辨細胞的類型從而檢測出各類淋巴細胞。

1．4檢測方法

標本使用抗凝全血，在Falcon流式進樣管內加入20ul T淋巴細胞CD3CD4CD8抗體和反向加樣50ul全血，輕輕充分混勻，置室溫避光處放置15min，加入10倍稀釋FACS溶血素450ul，置室溫避光處放置15min。用MultiSET自動軟件獲取15000個淋巴細胞，自動分析T淋巴細胞免疫亞型，報告CD4+，CD8+T淋巴細胞百分率CD4+，CD8+T淋巴細胞絕對計數及CD4+/CD8+比值。

1．5統計學處理

實驗數據用SPSS 13.0軟件包處理，數據采用均數±標準差（x±s）表示。

2結果

2.1HIV感染者T淋巴細胞亞群結果如下：

HIV感染者CD4+細胞百分率，CD4+，CD8+T淋巴細胞絕對計數，CD4+/CD8+比值顯著降低，CD8+細胞百分率則明顯增加。結果見表1。

2．2HIV感染者年齡，性別對細胞免疫功能的影響：結果見表2。

2.3成人及青少年艾滋病分期標準（CDC，美國，1993年）（見表3)

CD4<200/ul和/或出現艾滋病指針性癥狀（如卡氏肺囊蟲肺炎等）時，就可定義為進入艾滋病期。如表中A3，B3，C1-C3期。

2.4判斷HIV感染者發生臨床合并癥的可能性并進行預防（如表4）

表4

2.5確定抗HIV藥物治療開展的時機及進行療效評價

注：*女性患者基線CD4+T淋巴細胞≥250/mm3時，不推薦使用含有奈韋拉平（NVP）的方案，因為奈韋拉平可以增加肝毒性；

**有條件地區可以在開始抗病毒治療前進行病毒載量檢測

3討論

3.1HIV是一種多嗜性病毒，能感染人體的許多細胞，細胞表面的CD4分子是HIV的主要受體，AIDS是HIV選擇性感染CD4+T淋巴細胞的結果。HIV感染通過多種直接和間接的病理機制導致CD4+T淋巴細胞的損傷死亡。

3.2疾病進展的總體特點是人體血液中CD4+T淋巴細胞的數量逐漸減少以及病毒血癥的增加。外周血中CD4+T淋巴細胞的數量對于確定HIV感染狀況，是否進入發病期，判斷HIV感染者的臨床并發癥，確定抗HIV藥物治療的時機及機會性感染的預防和治療均具有極其重要的作用。

3.3當HIV感染者CD4+T淋巴細胞<200個/μl或百分率≤14%時，即進入艾滋病發病期。CD8+T淋巴細胞是機體抗HIV最主要的免疫細胞，在HIV感染初期，隨著病毒量的增加，CD8+淋巴細胞的數量也隨之上升，其數量與病毒量呈正相關［2］。CD4+/CD8+比值是反映細胞免疫平衡狀態的敏感性指標，CD4+/CD8+比值的下降被認為是疾病嚴重和預后不良的重要指標之一［3］。

3.4在T淋巴細胞分類中，CD4代表T輔助細胞而CD8代表T抑制細胞和T殺傷細胞。CD4+T淋巴細胞是HIV感染的主要靶細胞，而其本身又是免疫反應的中心細胞；CD8+T淋巴細胞是免疫反應的效應細胞。正常人的CD4+T淋巴細胞約占總的T淋巴細胞的65%，CD8+T淋巴細胞約占35%。

3.5人體感染了HIV后，涉及的主要病理過程就是免疫系統的損害，主要表現為：CD4+T淋巴細胞的丟失，絕對計數的減少，同時CD8+T淋巴細胞數量增加，CD4和CD8的比例失調。因此CD4+，CD4+T淋巴細胞計數作為直接測定免疫功能的方法，是提供HIV感染病人免疫系統損害狀況最明確的指標。

3.6用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴細胞＜200/mm3或CD4+T淋巴細胞的百分比＜14%的HIV感染者可歸入艾滋病。

3.7判斷HIV感染者的臨床合并癥（各種機會性感染與CD4+T淋巴細胞的相關性），如CD4+T淋巴細胞＜200/mm3時，很容易發生卡氏肺囊蟲肺炎；而巨細胞病毒感染和鳥分支桿菌感染常發生于CD4+T淋巴細胞＜50/mm3的病人，極少見于CD4+T淋巴細胞＞100/mm3的病人。幫助確定抗HIV藥物治療及機會性感染預防性治療的適應癥，例如，當CD4+T淋巴細胞＜200/mm3時，應給予抗卡氏肺囊蟲肺炎的預防性治療。

3.8通過檢測1155例HIV感染者的T淋巴細胞亞群，結果顯示：HIV感染者CD4+細胞百分率及CD4+/CD8比值顯著降低，而CD8+細胞明顯增高。其中CD4+細胞百分率≤14%者占26.6%，提示部分人已發展為AIDS。不同年齡的HIV感染者不影響T淋巴細胞亞群在外周血中的表達，但不同性別的HIV感染者3項指標均存在一定的差異，從結果分析看，男性CD4+細胞百分率和CD4+/CD8+比值下降比女性更顯著。

3.9抗HIV藥物療效的重要判斷指標

HIV感染是指人體感染HIV后直至發展為AIDS的全過程，時間長，臨床表現錯綜復雜。隨著對HIV抗病毒治療工作的深入和發展，本院對我市1155例抗病毒治療病人的T淋巴細胞亞群進行檢測分析，結合HIV病毒載量檢測和耐藥監測，以了解HIV感染者T淋巴細胞亞群的特點及其與艾滋病病情的關系，對HIV感染病人進行臨床分期，指導臨床醫生對抗病毒治療藥物調整，，指導艾滋病患者的抗病毒治療，確定治療時機，選擇治療方案，評價治療效果，為我市的防艾工作提供科學有效的數據。總之，HIV感染者定期檢測T淋巴細胞亞群，對制定最恰當的治療計劃，指導預防方案和進行臨床治療均有重要的臨床意義。

參考文獻

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[3]肝硬化患者外周血及腹水T淋巴細胞亞群的變化及意義[J].胃腸病學和肝病學雜志，2006，15(6):601-602

[4]全國艾滋病檢測技術規范（2009年修訂版）