逍遙散對肝纖維化大鼠肝臟保護作用的研究

[摘要] 目的 觀察逍遙散對膽管結扎致肝纖維化大鼠肝功能及肝纖維化指標的影響。方法 采用膽管結扎法復制肝纖維化大鼠病理模型，各組大鼠分別以生理鹽水、陽性對照藥、低劑量逍遙散、高劑量逍遙散進行干預，測定各組大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平。結果 肝纖維化模型組大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平均顯著高于假手術組（P＜0.05）；陽性對照藥組、逍遙散高劑量組大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平均顯著低于肝纖維化模型組（P＜0.05）。結論 逍遙散對膽管結扎致肝纖維化大鼠肝功能具有一定程度的保護作用，對肝纖維化具有一定的防治作用。

[關鍵詞] 逍遙散；肝功能；肝纖維化

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2011）36-27-02

Study on Liver Protective Effect of Xiaoyao Powder in Hepatic Fibrosis Rats

WANG Youli1 LANG Dehai2

1.Shenzhen Health Center of Ninghai Coutry in Zhejiang Province，Ninghai 316514，China；2.Department of Surgeon，Second Hospital of Ningbo City in Zhejiang Province，Ningbo 315010，China

[Abstract] Objective To observe the effects of Xiaoyao Powder on the liver function and hepatic fibrosis indexes of the hepatic fibrosis rats induced by common bile duct ligation. Methods The rats models of hepatic fibrosis were made by common bile duct ligation. The rats were divided into five groups: control group，model group，positive drug control group，low dosage Xiaoyao Powder group and high dosage Xiaoyao Powder group，and all groups were treated separately with normol solution，positive drug，low dosage Xiaoyao Powder and high dosage Xiaoyao Powder respectively. Then the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats were detected. Results Compared with control group，the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats of model group all significantly were raised（P＜0.05）. Compared with model group，the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats of positive drug control group and high dosage Xiaoyao Powder group significantly were reduced（P＜0.05）. Conclusion Xiaoyao Powder has some influences on the protection of liver and has the effect on anti-hepatic fibrosis.

[Key words] Xiaoyao Powder；Liver function；Hepatic fibrosis

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是慢性肝病重要的病理特征，患者肝臟內纖維組織異常增生，是肝硬化的早期病理基礎和必經中間環節[1]。本研究采用膽管結扎法復制大鼠肝纖維化病理模型，探討逍遙散對肝纖維化大鼠肝功能的保護作用及對肝纖維化的對抗作用，以期為逍遙散臨床用于肝纖維化疾病的治療提供基礎試驗資料依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠，雄性，清潔級，體重（200±20）g，購自浙江大學醫學動物試驗中心提供，動物合格證號：SCXK（浙）2008-0112。

1.1.2 藥物與試劑 逍遙散（處方組成：甘草15g，當歸30g，柴胡30g，白術30g，白芍30g，茯苓30g），處方中的中藥飲片購自寧?？h藥材公司，經浙江省中醫藥研究生所定，粉碎成粗粉，常規水煎煮兩次，合并濾液，濃縮至含生藥1g/mL的藥液；利加?。ㄋw薊素膠囊，德國馬博士大藥廠生產，進口藥品注冊證號：H20090217）；丙氨酸氨基轉氨酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉氨酶（AST）、血清總膽紅素（TBIL）等肝功能指標試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、層粘蛋白（LN）、IV型膠原（Ⅳ-C）等肝纖維化指標試劑盒購自北京北方生物技術研究所。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 取Wistar大鼠100只，適應性喂飼3d后隨機分為5組，即假手術組、肝纖維化模型組，陽性藥對照組，逍遙散低劑量組、逍遙散高劑量組，每組各20只。

1.2.2 動物模型建立[2，3] 各組大鼠均于造模前禁食不禁水12h，以2%戊巴比妥鈉注射液腹腔注射進行麻醉，劑量為2.5mL/kg。麻醉成功后，常規消毒各鼠腹部皮膚，沿腹正中線做一切口，游離膽總管。肝纖維化模型組、陽性藥對照組，逍遙散低劑量組、逍遙散高劑量組以絲線將游離膽總管雙重結扎，并于造模后第2天起，分別灌胃生理鹽水、利加?。?.05g/kg）、逍遙散（8g/kg）、逍遙散（16g/kg），1次/d，給藥體積均為15mL/kg；假手術組僅游離膽總管，不結扎，于造模后第2天起，灌胃生理鹽水，1次/d，給藥體積為15mL/kg，連續給藥4周。

1.2.3 指標檢測及方法 末次給藥24h后，乙醚麻醉，腹主動脈抽血處死，留取血液5mL，分離血清，嚴格按試劑盒操作方法測定ALT、AST、TBIL等肝功能指標水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C等肝纖維化指標水平。

1.3 統計學處理

采用SPSS17.0統計學軟件進行數據處理，所有數據均以（χ±s）表示，組間比較采用方差分析，t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

實驗過程中共有9只大鼠死亡，其中肝纖維化模型組死亡4只，陽性藥對照組死亡1只，逍遙散低劑量組死亡3只，逍遙散高劑量組死亡1只。對死亡的大鼠及時進行解剖尸檢，結果顯示，8只大鼠均于造模手術后次日死于急性肝功能衰竭，1只大鼠于造模手術后第6天死于腹部手術切口感染。

2.2 逍遙散對各組大鼠肝功能指標的影響

肝纖維化模型組大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指標水平顯著升高，與假手術組比較，差異有統計學意義（t=5.06，P=0.027；t=6.26，P=0.021；t=5.78，P=0.032），提示膽管結扎后，大鼠肝功能明顯下降。與纖維化模型組比較，陽性藥對照組大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指標水平明顯降低，差異有統計學意義（t=6.25，P=0.022；t=6.85，P=0.032；t=5.96，P=0.041），逍遙散高劑量組大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指標水平亦明顯降低，差異有統計學意義（t=5.96，P=0.042；t=5.63，P=0.028；t=5.76，P=0.039），提示高劑量逍遙散對膽管結扎大鼠具有較好的保肝作用。見表1。

2.3 逍遙散對各組大鼠肝纖維化指標的影響

肝纖維化模型組大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纖維化指標水平顯著升高，與假手術組比較，差異有統計學意義（t=4.32，P=0.040；t=4.95，P=0.034；t=4.66，P=0.026；t=3.19，P=0.019），提示膽管結扎致大鼠肝纖維化模型方法可靠，造摸成功。與纖維化模型組比較，陽性藥對照組大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纖維化指標水平明顯降低，差異有統計學意義（t=3.78，P=0.017；t=5.12，P=0.042；t=3.76，P=0.038；t=3.10，P=0.014），逍遙散高劑量組大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纖維化指標水平明顯降低，差異亦有統計學意義（t=3.44，P=0.019；t=5.06，P=0.022；t=3.99，P=0.027；t=4.51，P=0.025），提示高劑量逍遙散對膽管結扎大鼠具有較好的抗纖維化作用。見表2。

3 討論

肝纖維化屬祖國醫學中的“脅痛”、“積聚”、“臌脹、“黃疸”等病證范疇，其基本病因病機為濕熱、疫毒之邪稽留血分，致使氣虛血瘀、瘀血阻絡，清熱利濕、活血化瘀、健脾益氣是本病的主要治則[4]。逍遙散原方出自《太平惠民和劑局方》，由甘草、當歸、茯苓、白芍、白術、柴胡等藥味組成，主治肝郁血虛脾弱證。方中柴胡疏肝解郁，可使肝氣條達，為君藥；當歸養血和血，白芍養血斂陰、柔肝止痛，共為臣藥，柴胡配合君藥補肝體而助肝用，使血和則肝和，血充則肝柔；白術、茯苓、甘草三藥健脾益氣，使營血生化有源，共為佐藥；甘草調和諸藥，兼為使藥；以上諸藥相合，共奏疏肝解郁、養血健脾之功效，可使肝郁得疏、血虛得養、脾弱得復[5-6]。

膽管結扎后，膽道梗阻，膽管內膽汁淤積，肝竇間膽汁反流，組織體液中TBIL水平異常升高，肝臟實質細胞及肝臟免疫功能等受到損害，引起肝臟間質纖維化，肝細胞壞死或凋亡，肝細胞膜通透性增高，其內部富含的AST、ALT等多種酶大量釋放入血，從而使血中AST、ALT活性水平升高[7]。故根據血中TBIL、AST、ALT等指標活性水平升高的程度，可反映出肝損傷的嚴重程度。而肝纖維化形成過程中，肝內彌漫性細胞外基質過度沉淀，能夠反映細胞外間質成分的HA、PCIII、LN及Ⅳ-C生成量會隨之增多，或其降解量會隨之減少[8]。

本研究結果表明，利用膽管結扎法致大鼠肝纖維化模型的方法簡便易行，模型組大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指標水平及HA、PCIII、LN、IV-C等肝纖維化指標水平均顯著升高，說明肝纖維化模型成功，結合造模術后大鼠一般情況分析，可說明該造模方法成功率較高。高劑量的逍遙散可顯著降低因膽管結扎而致肝纖維化大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指標水平，并顯著降低其血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纖維化指標水平，表明中藥復方逍遙散對膽管結扎致肝纖維化大鼠肝功能及肝纖維化病情就有明顯的保護和治療作用，且其效果與陽性對照藥利加隆相當，但有關其保肝及抗肝纖維化的作用機制尚有待于進一步深入研究。

[參考文獻]

[1] 鄺滿元，賈蕾羅，明英. 二氫楊梅素對肝纖維化大鼠肝功能及肝纖維化指標的影響[J]. 中國民族民間醫藥，2009，20（8）：6-7.

[2] 陰宏，馬紅，劉乃慧，等. 大鼠膽管阻塞性肝纖維化模型的建立[J]. 實驗動物科學與管理，2002，19（2）：1-4.

[3] 趙永忠，漆志平，徐慶，等. 荔枝核總黃酮抗膽管結扎大鼠肝纖維化的作用及機制[J]. 世界華人消化雜志，2010，18（20）：2084-2089.

[4] 楊壽輝，劉飛. 化纖方對肝纖維化大鼠肝功能及肝纖維化指標的影響[J]. 中西醫結合肝病雜志，2008，18（5）：294-296.

[5] 鄧中甲. 方劑學[M]. 北京：中國中醫藥出版社，2002：85.

[6] 張寧，夏珂，王業秋. 逍遙散在肝損傷模型大鼠體內的藥效學和藥動學研究[J]. 中草藥，2011，42（8）：1576-1579.

[7] 戚忠璽，耿蘭書，耿束華. 消臌軟堅丸對肝硬化大鼠肝功能、肝纖維化指標及肝臟病理學的影響[J]. 中醫研究，2008，21（8）：11-15.

[8] 盧雯雯，陳玖，吳國琳，等. 葛根素對酒精性肝損傷大鼠血清轉氨酶及肝纖維化指標的影響[J]. 浙江中醫雜志，2008，43（1）：7-9.

（收稿日期：2011-09-27）