HPLC測定克霉唑乳膏含量的不確定度評估

[摘要] 目的 建立HPLC法測定克霉唑乳膏含量的不確定度分析方法。方法 通過建立HPLC含量測定法的數學模型，找出影響不確定度的因素并對各個不確定度分量進行評定。結果 計算各分量的相對標準不確定度，由此計算合成不確定度和擴展不確定度，從結果可看出對照品帶來的不確定性較大。結論 測量不確定度可用于對克霉唑乳膏含量測定結果的評定。

[關鍵詞] 克霉唑乳膏；含量；HPLC法；測量不確定度

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）36-78-02

Uncertainty Analysis on Assay for Clotrimazole Cream by HPLC

WANG Zhengyu

Suzhou Institute for Drug Control in Anhui Province，Suzhou 234000，China

[Abstract] Objective To establish an uncertainty analysis method for Clotrimazole cream by HPLC. Methods The mathematic model was established by HPLC identified the influence factors impact uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated. Results Each component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained. The results showed the control brought greater uncertainty. Conclusion The mathematic model of uncertainty is establish for applicable to evaluate the accuracy of assay of Clotrimazole cream.

[Key words] Clotrimazole cream；Content；HPLC；Uncertainty of measurement

克霉唑屬吡咯類抗真菌藥，對白念珠菌則可抑制其自芽孢轉變為侵襲性菌絲的過程；其含量大小直接影響到藥品的治療效果，而在含量的測定過程中存在著許多不確定因素，由于測量誤差的客觀存在，我們對被測量值的不能肯定的程度稱為不確定度。本文依據藥品質量標準對其進行含量測定，并按照測量不確定度評定與表示方法[1]的方法對實驗進行不確定度進行分析和評價，現報道如下。

1 實驗儀器與方法

1.1 儀器與試藥

Waters2695-2489型高效液相色譜儀（美國沃特斯公司）；梅特勒XP205型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）（d=0.01mg/0.1mg）；經標定的A級100mL、50mL單標容量瓶。哌拉西林對照品（中國生物制品檢定所提供，批號：100037-200306，含量100%，干燥后使用）；克霉唑乳膏（蕪湖三益制藥有限公司，批號：100204，標示量為10g/支，含量0.1g）；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸餾水。

1.2 色譜條件

色譜柱：日本島津ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；填充劑：用十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：磷酸鹽溶液-甲醇（25：75）流速1.0mL/min；進樣量：10μL；檢測波長：254nm。

1.3 測定法

對照品溶液的制備：取對照品適量（對照品1：11.80mg；對照品2：11.52mg），置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中約含克霉唑0.5mg的溶液。供試品溶液的制備：取本品5支內容物混勻，精密稱取適量（供試品1：1.3351g；供試品2：1.3325g），置25mL量瓶中，加甲醇15mL，置50℃水浴中振搖使克霉唑溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置2h，立即濾過，取續濾液放置室溫，即得。按照質量標準測定，結果計算出克霉唑的含量為90.3%。

2 結果

2.1 數學模型[2]

本品哌拉西林峰面積按外標法計算，克霉唑含量計算公式如下：

式中：Y-克霉唑乳膏百分含量，W0-對照品取樣量，Wx-供試品取樣量，AO-對照品中克霉唑的峰面積，S-對照品純度100%，Ax-供試品中克霉唑的峰面積，-克霉唑乳膏的平均裝量，f0-對照品稀釋倍數，fx-供試品稀釋倍數。可以得出方差：

2.2 各分量的相對標準不確定度

2.2.1 對照品純度的相對準確不確定度 克霉唑對照品純度為100%，對照品純度所引入的不確定度u（S）屬于B類不確定度。參照相關文獻[3]，按均勻分布換算：u（S）=0.25%/■=0.14%（暫假定其分散區間的半寬度a=0.25％），故：urel（S）=■=1.4×10-4。

2.2.2 對照品的稱量過程中引起的相對標準不確定度 （1）天平示值所引起的不確定度：本實驗用天平經過專業機構鑒定合格，電子天平的鑒定證書給出的最大允差為±0.03mg，按矩形分布計算：u（W01）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）稱量重復性所引起的不確定度：鑒定證書給出的重復性誤差為0mg，故u（W02）=0mg對照品采取的是減重法稱量，本實驗共稱取兩份對照品，每份共稱量了兩次（WO1=11.80mg，WO2=11.25mg），故每份對照品稱量的不確定度分別為：■，

所以對照品稱量相對準確不確定度為

2.2.3 玻璃儀器引起的相對標準不確定度 ①溫度：容量瓶的校準是在室溫為20℃下進行，本次實驗溫度也保持在20℃，所以由溫度引起的標準不確定度可以忽略不計。②校準：實驗過程中用到一個A級25mL容量瓶，其容量允差為±0.03mL，按均勻分布計算，由容量允差所引起的標準不確定度為：u（25）a=0.03/■=1.732×10-2mL。

2.2.4 供試品和對照品稀釋相對標準不確定度 供試品溶液稀釋和對照品溶液稀釋過程中都用到25mL容量瓶1個，故由稀釋所引起的相對標準不確定度為：urel（f0）=u（25）a/25=1.732×10-2/25=6.928 ×10-4，urel（fx）=6.928×10-4。

2.2.5 供試品稱量引起的相對標準不確定度 （1）天平示值引起的不確定度：u（Wx2）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）天平稱量重復性引起的不確定度：u（Wx1）=0/■=0mg。

平行稱量供試品兩份，取樣量分別為：樣品1：1.3351g，樣品2：1.3325g。供試品1的urel（Wx-01）=■=2.599×10-4，供試品2的urel（Wx-02）=■=2.604×10-4。

所以，供試品稱量的相對標準不確定度為

2.2.6 對照品峰面積引起的相對不確定度 （1）實驗過程中，第一份對照品共進樣5次，峰面積分別為1016497.85、1014151.81、1012991.14、1014735.03、1015554.85，平均峰面積AO2=1014486.14。可以得出相對偏差SD=1309.317，urel（AO1）=1.290×10-3。（2）第二份對照品共進樣3次，峰面積分別為：1016454.56、1018113.57、1017112.7，平均峰面積AO2=1017226.94。同理可得urel（AO2）=8.21×10-4。對照品溶液色譜峰面積的相對不確定度：urel（AO）= ■=1.327×10-4。

2.2.7 樣品峰面積的相對不準確度 樣品1峰面積：1048989.68、1059992.96、1048835.30；樣品2峰面積：044787.33、1049553.47、1048858.12，可以得出相對偏差SDX1=6397.778，urel（AX1）=6.078×10-3SDX2=2574585，urel（AX2）=2.457×10-3。所以供試品峰面積的合成相對不確定度：urel（AX）=■=5.691×10-4。

2.3 不確定分量

各因素引起的不確定量進行匯總。見表1。

3 討論

筆者通過對HPLC法測定克霉唑乳膏含量中不確定度的逐一分析和量化，評定出測量結果的合成標準不確定度和擴展不確定度。從結果可以看出不確定度主要來自對照品的稱量，本實驗對照品取樣量相對供試品較小，容易引起誤差也是必然，為了減少誤差，稱量過程中要多注意環境的影響，實驗前應校正天平，在試驗過程中要遵循SOP嚴格操作，盡量排除偶然誤差，減小系統誤差，把實驗做好做準。由于本品為乳膏劑，故在取樣時應特別注意，應準確稱量，避免因稱量不準所引起的含量值不準。

不確定度的分析，有助于我們發現試驗過程中出現的偏差，發現問題、解決問題，最終能提高試驗的準確性，提高實驗者的試驗技能[5]。因此，日常檢驗工作中，不確定度的評估工作應定期開展。

[參考文獻]

[1] 國家質量技術監督局. 測量不確定度評定與表示[M]. JJF1059-1999，北京：中國計量出版社，1999：19-24.

[2] 沈圓，郭亞東. 淺談測量不確定度評定中“數學模型的建立”[J]. 中國衛生檢驗雜志，2005，15（12）：1534.

[3] 黃諾嘉，楊文紅，黃奕濱，等. HPLC法測定蘆薈膠囊中蘆薈苷含量的不確定度評定[J]. 中國藥業，2009，12（9）：1318-1320.

[4] 李金海. 誤差理論與測量不確定度評定[M]. 北京：中國計量出版社，2003：148.

[5] 儲黎娟. 冷原子吸收光譜法測定食品中汞不確定度評定[J]. 中外醫學研究，2011，9（13）：153-154.

（收稿日期：2011-11-04）