反相高效液相色譜法測(cè)定清肝二十七味丸中梔子苷的含量

鄒繼紅

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

反相高效液相色譜法測(cè)定清肝二十七味丸中梔子苷的含量

鄒繼紅

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：建立測(cè)定清肝二十七味丸中梔子苷的方法.方法：采用HPLC法，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱，流動(dòng)相為 0.1%三乙胺（10%磷酸調(diào) pH7.0）- 乙腈（83:17），流速為 1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm.結(jié)果：梔子苷的進(jìn)樣量在0.784-3.920μg與峰面積呈良好的線(xiàn)性，回歸方程為：Y＝1419.8X+3.095，（r＝0.9998）；平均加樣回收率為 99.1%，RSD=0.79%.結(jié)論：所用方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于清肝二十七味丸中梔子苷的質(zhì)量控制.

反相高效液相色譜法；清肝二十七味丸；梔子苷；含量測(cè)定

清肝二十七味丸又名欽那德貢斯樂(lè)，是根據(jù)蒙醫(yī)藥學(xué)配方理論及現(xiàn)代藥理研究方法研制而成的傳統(tǒng)名方，具有疏肝清熱、健胃消食、殺粘蟲(chóng)、抑制肝炎病毒、促使HBsAg轉(zhuǎn)陰的作用[1].主要用于急、慢性肝炎，脾胃虛熱，骨蒸煩悶，食欲不振，惡心嘔逆等癥[2]，是治療肝病的良藥.為了有效控制其質(zhì)量，作者參考有關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，采用反相高效液相色譜法對(duì)清肝二十七味丸中的梔子苷進(jìn)行測(cè)定，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，結(jié)果準(zhǔn)確、可信，精密度、重復(fù)性較好.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)安捷倫公司）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLER AE240電子天平（瑞士梅特勒公司）；梔子苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110748-200512）；乙腈為色譜純(美國(guó)Fisher)；水為娃哈哈純凈水；甲醇為分析純（天津市福晨化學(xué)試劑廠(chǎng)）.

蒙藥清肝二十七味丸（內(nèi)蒙古庫(kù)倫蒙藥廠(chǎng)，批號(hào)：090413，090414，090415）；陰性對(duì)照品的藥材（內(nèi)蒙古赤峰市中蒙醫(yī)院）.

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫為室溫，流動(dòng)相為0.1%三乙胺（10%磷酸調(diào)pH7.0）-乙腈 （83:17），流速為 1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm，進(jìn)樣量20μL.

1.2.2 溶液的制備 精密稱(chēng)取4.9mg梔子苷對(duì)照品，置25mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，即得196mg·L-1的對(duì)照品貯備溶液.精密吸取貯備溶液2mL，置10mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得39.2mg·L-1的對(duì)照品溶液.精密稱(chēng)取1.5g已研細(xì)的清肝二十七味丸，置具塞錐形瓶中，加入25mL50%甲醇，密塞，精密稱(chēng)定重量，超聲處理（功率：250w，頻率：40KHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液.按處方要求制備不含梔子苷藥材的樣品，同法制成陰性樣品溶液，備用.

1.2.3 陰性對(duì)照試驗(yàn) 取梔子苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件下分別進(jìn)樣 20μL，測(cè)定（圖 1）.由圖可知：陰性樣品對(duì)梔子苷的測(cè)定無(wú)干擾，且梔子苷與其他組分可達(dá)基線(xiàn)分離.

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密吸取4、8、12、16、20 μL梔子苷對(duì)照品貯備溶液，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為:Y=1419.8X+3.095，（r=0.9998）.結(jié)果表明：梔子苷進(jìn)樣量在0.784～3.920μg與峰面積具有良好的線(xiàn)性關(guān)系.

圖 1 對(duì)照品（A）、陰性對(duì)照（B）、供試品（C）溶液的高效液相色譜圖 1．梔子苷

1.2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為39.2mg·L-1的對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μL，分別進(jìn)樣，重復(fù)5次測(cè)定峰面積.計(jì)算得對(duì)照品的RSD=0.76%，樣品的RSD=0.92%，表明儀器精密度良好.

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液，分別于 0、4、8、12、24h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積.計(jì)算得梔子苷峰面積的RSD=1.3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定.

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批樣品，按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定.計(jì)算得樣品中梔子苷的平均含量為 0.660mg·g-1，RSD=1.1%，表明方法的重復(fù)性良好.

1.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱(chēng)取1.5g已知梔子苷含量的同一批 (批號(hào)為090414，含量為0.660mg·g-1)樣品粉末6份，分別精密加入一定量196mg·L-1的梔子苷對(duì)照品貯備溶液，按“1.2.2”項(xiàng)方法處理后進(jìn)樣20μL測(cè)定，計(jì)算梔子苷回收率，結(jié)果見(jiàn)表1.

1.2.9 樣品的測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)6份樣品，按“1.2.2”項(xiàng)方法進(jìn)行處理，然后分別精密吸取20μL對(duì)照品溶液和供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算梔子苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2.

2 討論

以分光光度計(jì)掃描梔子苷對(duì)照品溶液，其最大吸收波長(zhǎng)為238nm，故選取檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm.

在流動(dòng)相選擇的過(guò)程中，參考有關(guān)文獻(xiàn)[6-9]嘗試用乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-水、甲醇-0.2%冰醋酸溶液和水-乙腈-磷酸作為流動(dòng)相，但梔子苷峰形不佳.經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，最后當(dāng)采用文中的條件時(shí)，梔子苷的峰形對(duì)稱(chēng)，且與其他組分分離良好.

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（n=3）

樣品的預(yù)處理，曾經(jīng)采用甲醇和50%甲醇溶液分別進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)50%甲醇溶液的提取效率比較高，所以最終采用50%甲醇溶液為提取溶劑.

分別測(cè)定了超聲提取20min、30min和40min的樣品，結(jié)果提取30min和40min的樣品測(cè)得的結(jié)果比較接近，所以最后采用超聲30min.

〔1〕哈森高娃，白恒慧.清肝二十七味丸(欽那德貢斯樂(lè))治療病毒性乙型肝炎[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2007(6):20.

〔2〕陳東龍.清肝二十七味丸治療肝病的臨床觀(guān)察[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2007(6):16.

〔3〕熊野娟.HPLC測(cè)定復(fù)腎寧片中梔子苷的含量[J].江西化工，2007（4）：97-98.

〔4〕席海山.HPLC測(cè)定蒙藥沏其日甘-5中梔子苷的含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2009，26(3)：711-713.

〔5〕郝玉霞,王中彥,曹侃，等.HPLC 法測(cè)定梔子柏皮軟膠囊中梔子苷和小檗堿的含量[J].藥物分析雜志，2007，27（12）：1913-1916.

〔6〕李健，饒凡，吳逢波，等.HPLC測(cè)定鼻竇炎顆粒中的梔子苷[J].中國(guó)藥師，2008，11（9）：1076-1077.

〔7〕拉喜那木吉拉，胡春.HPLC測(cè)定蒙藥六味木香散中梔子苷含量[J].中成藥，2008，30（1）：147-148.

〔8〕蘇明武，王坤玲，鄧超，等.高效液相色譜法測(cè)定炎熱清膠囊藥材浸膏梔子苷含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27（11）：1386-1387.

〔9〕肖培云，楊永壽，劉光明.高效液相色譜法測(cè)定小兒導(dǎo)赤片中梔子苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（5）：1110-1111.

R286.0

A

1673-260X（2011）11-0097-03