馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶新基因(Dd-cpl-1) 的克隆與序列分析

王高峰，彭德良，孫建華，黃文坤，彭煥，龍海波

1 天津師范大學生命科學學院，天津 300387

2 中國農業科學院植物保護研究所 植物病蟲害生物學國家重點實驗室，北京 100193

馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶新基因(Dd-cpl-1) 的克隆與序列分析

王高峰1,2，彭德良2，孫建華1，黃文坤2，彭煥2，龍海波2

1 天津師范大學生命科學學院，天津 300387

2 中國農業科學院植物保護研究所 植物病蟲害生物學國家重點實驗室，北京 100193

L型半胱氨酸蛋白酶基因 (Cathepsin L-like cysteine proteinase gene) 為與植物寄生線蟲寄生能力相關的多功能基因。運用RT-PCR和RACE的方法從馬鈴薯腐爛莖線蟲Ditylenchus destructor中克隆出1個L型半胱氨酸蛋白酶新基因 Dd-cpl-1 (GenBank登錄號為 GQ180107)。該基因 Dd-cpl-1 cDNA全長序列含有 1個 1 131 bp的開放性閱讀框(ORF)，編碼376個氨基酸殘基，其5′末端及3′末端分別含有29 bp和159 bp的非編碼區 (UTR)。Dd-cpl-1內含子外顯子結構分析結果表明，其基因組序列包含7個內含子，且各內含子兩端剪接位點序列遵守GT/AG規則。Dd-cpl-1基因推定的蛋白Dd-CPL-1與松材線蟲L型半胱氨酸蛋白酶高度同源，一致性達到77%。以不同物種中L 型半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列進行比對分析，推測推定的蛋白 Dd-CPL-1含有 L型半胱氨酸蛋白酶基因家族高度保守的催化三聯體(Cys183，His322和Asn343) 以及ERFNIN基系和 GNFD基系。半胱氨酸蛋白酶系統發育分析表明，Dd-cpl-1 屬于由 L型半胱氨酸蛋白酶組成的進化分支。Dd-cpl-1的這些序列特征進一步表明其為L型半胱氨酸蛋白酶基因。這是首次在馬鈴薯腐爛莖線蟲中克隆到的L型半胱氨酸蛋白酶，為今后在蛋白水平對其進行進一步的功能分析提供基礎。

馬鈴薯腐爛莖線蟲，L型半胱氨酸蛋白酶，Dd-cpl-1

Abstract:The Cathepsin L-like cysteine proteinase genes (cpls) are multifunction genes related to the parasitic abilities of plant parasitic nematodes. A new cathepsin L-like cysteine proteinase gene (Dd-cpl-1) (GenBank Accession GQ 180107) was cloned fromDitylenchus destructor by RT-PCR and RACE. The cDNA sequence consisted of a 1 131 bp open reading frame (ORF) encoding 376 amino acid residues that were franked by a 29 bp 5′-untranslated region (UTR) and a 159 bp 3′-UTR. Genomic sequence analysis showed that Dd-cpl-1 contained 7 introns, obeyed the GT/AG rule in the splice-site junctions. Homology analysis showed that the identity was 77% between Dd-cpl-1 deduced protein Dd-CPL-1 and cathepsin L-like cysteine proteinase of Bursaphelenchus xylophilus. Multi-sequence alignment indicated that there were the catalytic triad (Cys183, His322and Asn343) and two motifs ERFNIN motif and GNFD motif in deduced protein Dd-CPL-1. Cysteine proteinases phylogenetic analysis showed that Dd-cpl-1 belonged to the sub-clade of cathepsin L-like cysteine proteinases.

Keywords:Ditylenchus destructor, cathepsin L-like cysteine proteinase, Dd-cpl-1

由馬鈴薯腐爛莖線蟲Ditylenchus destructor 引起的甘薯莖線蟲病是制約我國甘薯生產的三大病害之一，近年來已成為北方薯區最嚴重的病害。馬鈴薯腐爛莖線蟲Ditylenchus destructor Thorne，又稱馬鈴薯莖線蟲，是1945年作為一個單獨的種從鱗球莖莖線蟲 Ditylenchus dipsaci 中分離出來的，許多國家和地區都將其列為檢疫性有害生物[1-3]。2006年葛建軍等在國內首次報道從馬鈴薯上分離到馬鈴薯腐爛莖線蟲[4]。宛菲等對來自國內的21個馬鈴薯腐爛莖線蟲種群及1個韓國馬鈴薯腐爛莖線蟲種群的rDNA-ITS進行測序研究，根據ITS擴增片段大小將其分為A型和B型2類群體[3]。依據D2/D3序列對上述 22個馬鈴薯腐爛莖線蟲不同種群進行系統進化分析，結果表明 A型和 B型種群形成 2個亞進化分支，這說明了馬鈴薯腐爛莖線蟲A型和B型群體在ITS區差異的實質[5]。對馬鈴薯腐爛莖線蟲的分子生物學研究相對于其他植物寄生線蟲而言比較滯后，目前只從馬鈴薯腐爛莖線蟲中克隆出 3個乙酰膽堿酯酶基因 (Acetylcholinesterase gene)[6-8]和 2個 β-1,4-內切葡聚糖酶基因 (β-1,4-endoglucanase gene)[9]。

L型半胱氨酸蛋白酶 (Cathepsin L-like cysteine proteinase) 亞基因家族為半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase) 基因家族成員之一[10]。半胱氨酸蛋白酶為多種內寄生生物的許多重要生理過程所必需，如蛻皮、角質層重塑、胚胎發生、取食及免疫逃避[11]。Urwin等首次從植物寄生線蟲大豆孢囊線蟲Heterodera glycines中克隆出1個L型半胱氨酸蛋白酶基因[12]。現已從植物寄生線蟲中克隆到多個 L型半胱氨酸蛋白酶基因，如大豆孢囊線蟲(GenBank Accession No. CAA70693)、南方根結線蟲Meloidogyne incognita (GenBank Accession No.CAD89795)、馬鈴薯白線蟲 Globodera pallida(GenBank Accession No. AAY45896)、腎狀腎形線蟲Rotylenchulus reniformis (GenBank Accession No.AAY45870) 和松材線蟲Bursaphelenchus xylophilus(GenBank Accession No. ACH56225)。在秀麗小桿線蟲Caenorhabditis elegans中發現，Ce-cpl-1為其早期胚胎發生所需[13-14]，參與秀麗小桿線蟲卵黃蛋白修飾的調節過程[15]。人體寄生線蟲馬來絲蟲 Brugia malayi成年雌蟲中的Bm-cpl-1和Bm-cpl-5與秀麗小桿線蟲中的L型半胱氨酸蛋白酶基因為不同種系但功能相同的基因 (Functional orthologs)[11]。在南方根結線蟲中，對Mi-cpl-1進行原位雜交實驗，結果表明其表達部位為南方根結線蟲腸道細胞，推測Mi-cpl-1可能主要在南方根結線蟲腸道中起消化作用[10]。Shingles等對 Mi-cpl-1的實時表達情況進行分析，結果發現Mi-cpl-1在南方根結線蟲整個生長發育階段的表達水平較高，且 RNAi實驗結果表明Mi-cpl-1與南方根結線蟲的寄生能力相關[16]。因此，植物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶參與植物寄生線蟲侵染寄主植株的過程，但其具體生物學功能仍不確定。在本研究中，用簡并引物FP和RP[17]從馬鈴薯腐爛莖線蟲中首次克隆出1個L型半胱氨酸蛋白酶基因，為今后在蛋白水平對其進行進一步的功能分析提供了基礎。

1 材料與方法

1.1 線蟲材料

馬鈴薯腐爛莖線蟲為本實驗室收集、培養和保存的實驗種群。馬鈴薯腐爛莖線蟲培養方法為：在PDA培養基上接種半裸鐮刀菌 Fusarium semitectum，25 ℃培養4 d后，將馬鈴薯腐爛莖線蟲接種在半裸鐮刀菌上，馬鈴薯腐爛莖線蟲以半裸鐮刀菌為食，25 ℃條件下進行生長繁殖[8,18-19]。培養40~50 d后收集培養皿蓋上的線蟲，用DEPC處理水多次洗滌后，將約100 μL的線蟲加入到1.5 mL的DNase/RNase-free離心管中，并加入1 mL TRIzol，液氮速凍，–80 ℃保存備用。

大腸桿菌感受態TOP010；普通DNA純化試劑盒 (天根生化科技有限公司)；EX Taq 酶 (TaKaRa公司)；TRIzol 試劑、Gene Race?Core Kit 及SuperScripeTMIII First-Strand Synthesis System for RT-PCR 試劑盒 (Invitrogen 公司)，pGEM-T easy系統試劑盒 (Promega公司)。

1.2 馬鈴薯腐爛莖線蟲總RNA提取及cDNA第一鏈合成

采取凍融法用 TRIzol試劑提取馬鈴薯腐爛莖線蟲的總 RNA。按照 Gene Race?Core Kit及SuperScripeTMIII First-Strand Synthesis System for RT-PCR 試劑盒說明書步驟合成 5′端及 3′端完整的cDNA第一鏈。

1.3 馬鈴薯腐爛莖線蟲的基因組DNA的提取

線蟲 DNA的提取參照彭德良的方法[20]，略有改動。挑取 10頭馬鈴薯腐爛莖線蟲于含有 10 μL ddH2O 的0.2 mL Eppendorf管中，在液氮中速凍，用75%酒精消毒并用酒精燈烤干后自然冷卻的玻璃棒研磨至冰融化，反復3次，加入7 μL的WLB (Worm lysis buffer)，3 μL 蛋白酶 K 溶液 (600 μg/mL)，混勻，4 000 r/min離心5~10 s收集蟲液于管底，–20 ℃冷凍30 min以上，然后轉入PCR儀，在65 ℃下溫育1.5 h，95 ℃反應10 min，取出后12 000 r/min離心1 min，取上清，于–20 ℃保存備用。

1.4 馬鈴薯腐爛莖線蟲cDNA片段的同源克隆

以簡并引物FP和RP為引物 (表1)，以cDNA第一鏈為模板進行 PCR擴增，反應條件為：94 ℃預變性 3 min；94 ℃變性 30 s，48 ℃退火 30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環；72 ℃延伸10 min。擴增的PCR產物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測和分離，用普通DNA純化試劑盒純化后連接到pGEM-T載體中，轉化 TOP010感受態細胞，挑取陽性單克隆搖菌，以FP、RP為PCR引物，用上述同樣的反應條件進行菌液檢測，送上海生工生物工程有限公司測序。

表1 本研究所用的PCR引物Table 1 PCR primers used in this study

1.5 3′ RACE

根據測序獲得的EST片段，用軟件Primer 5.0及DNAMAN設計基因特異引物CPF1、CPF2 (表1)，以cDNA第一鏈為模板，以3′ GeneRace Primer及CPF1為引物，PCR反應條件為：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，72 ℃延伸1 min，5個循環；94 ℃變性30 s，70 ℃延伸 1 min，5個循環；94 ℃變性30 s，65 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，25個循環；72 ℃延伸10 min。再以該PCR產物為模板，以3′ GeneRace Nested Primer和 CPF2為 PCR引物，進行 Nested PCR，PCR反應條件與上述PCR反應條件相同。PCR產物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳分離，純化目的片段，再進行連接、轉化、克隆、PCR菌液檢測后測序。

1.6 5′ RACE

根據測序獲得的EST片段，用軟件Primer 5.0及 DNAMAN設計基因特異引物 CPR1、CPR2(表 1)。以 cDNA 第一鏈為模板，以 CPR1和 5′GeneRace Primer為引物，進行PCR擴增；再以PCR產物為模板，以CPR2和5′ GeneRace Nested Primer為引物，進行 Nested PCR；PCR反應條件與 3′RACE相同。PCR產物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳分離，純化目的片段，再進行連接、轉化、克隆、PCR菌液檢測后測序。

1.7 cDNA全長擴增

依據 cDNA拼接序列，用軟件 Primer 5.0及DNAMAN設計基因特異引物CPF3、CPR3 (表1)，對cDNA序列進行全長擴增。以cDNA第1鏈為模板，以CPF3、CPR3為引物進行PCR擴增，PCR反應條件：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，65 ℃延伸2 min，5個循環；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸2.5 min，25個循環；72 ℃延伸10 min。PCR產物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳分離，純化目的片段，再進行連接、轉化、克隆、PCR菌液檢測后測序。

1.8 基因組序列克隆

依據已獲得的目的基因cDNA序列，用Primer 5.0及 DNAMAN在兩端非編碼區及其附近設計基因特異引物CPF4、CPR4 (表1)。以馬鈴薯腐爛莖線蟲DNA為模板，以CPF4與CPR4為引物進行PCR反應，擴增目的基因基因組序列。PCR反應條件為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性1 min，58 ℃退火1 min，72 ℃延伸3 min，37個循環；72 ℃延伸 10 min。PCR產物以1.0%瓊脂糖凝膠電泳分離，純化目的片段，再進行連接、轉化、克隆、PCR菌液檢測后測序。

1.9 L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA序列及其編碼蛋白氨基酸序列分析

在 NCBI網站 (www.ncbi.nlm.nih.gov/) 進行基因Blastx同源比對分析，用軟件DNAMAN對基因cDNA序列進行開放性閱讀框預測及其核苷酸序列翻譯，以軟件MEGA 4.0 UPGMA算法構建系統樹。以Compute pI/Mw (http://www.expasy.org/tools/pi_tool.html) 進行蛋白分子量 (Mw) 預測。以 GSDS(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/) 進行基因內含子外顯子結構分析。以 SingalP 3.0 (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/) 進行蛋白質信號肽預測。

2 結果與分析

2.1 馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA全長克隆與序列分析

用簡并引物進行PCR擴增，純化此擴增產物并進行測序，結果獲得1個498 bp的cDNA片段 (圖1)。經Blastx分析發現該片段與松材線蟲L型半胱氨酸蛋白酶 (GenBank登錄號：ACH56255) 高度同源，一致性 (Identities) 達到83%，表明實驗獲得的cDNA片段為目的基因L型半胱氨酸蛋白酶基因片段。依據馬鈴薯腐爛莖線蟲中該目的基因cDNA片段核苷酸序列設計基因特異引物，用RACE技術對目的基因3′和5′ cDNA末端序列進行克隆，測序結果表明，其大小分別為383 bp和606 bp (圖2，圖3)。對已獲得的3個cDNA片段進行序列拼接，結果獲得了1個全長為1 319 bp的cDNA序列。在該cDNA序列兩端設計基因特異引物，進行PCR擴增、測序，結果得到了1個大小為966 bp的cDNA片段(圖4)。將此966 bp的cDNA片段和目的基因cDNA拼接序列進行比對分析，分析結果顯示兩序列一致，這表明馬鈴薯腐爛莖線蟲中所獲得的L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA拼接序列正確。馬鈴薯腐爛莖線蟲中該L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA全長含有1個 1 131 bp的開放性閱讀框，其 5′端起始密碼子ATG前有1個大小為 29 bp的非編碼區，3′端有 1個159 bp的非編碼區，且3′端有多聚腺苷酸尾及加尾信號 (AATAAA)。這表明馬鈴薯腐爛莖線蟲中該L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA序列為完整序列，并命名為Dd-cpl-1，其GenBank登錄號為GQ 180107。

圖1 CP簡并引物PCR擴增Fig. 1 Agarose gel (1.0%) showing the PCR product of degenerate primers FP & RP. M: DL2000 marker; 1: PCR product of degenerate primers FP & RP.

圖2 Dd-cpl-1基因3′ RACE擴增Fig. 2 Agarose gel (1.0%) showing the PCR product of Dd-cpl-1 3′ RACE. M: DL2000 plus marker; 2: PCR product of Dd-cpl-1 3′ RACE.

圖3 Dd-cpl-1基因5′ RACE擴增Fig. 3 Agarose gel (1.0%) showing the PCR product of Dd-cpl-1 5′ RACE. M: DL2000 marker; 3: PCR product of Dd-cpl-1 5′ RACE.

2.2 馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因基因組序列克隆及序列分析

根據已獲得的馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因 cDNA全長序列，設計基因特異引物CPF4和 CPR4，以馬鈴薯腐爛莖線蟲 DNA為模板擴增目的基因的基因組序列并測序，結果獲得了 1個2 242 bp大小的DNA片段 (圖5)。依據馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA全長序列及其基因組序列進行內含子外顯子結構分析發現，馬鈴薯腐爛莖線蟲 L型半胱氨酸蛋白酶基因含有 7個內含子，且內含子兩端拼接位點序列遵守GT/AG規則 (圖 6)。

2.3 馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列分析

圖4 Dd-cpl-1基因cDNA全長PCR擴增Fig. 4 Agarose gel (1.0%) showing the PCR product of CPF3& CPR3. M: DL2000 plus marker; 4: PCR product of CPF3 &CPR3.

圖5 馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因基因組序列PCR擴增Fig. 5 Agarose gel (1.0%) showing the PCR product of CPF4& CPR4. M: DL2000 plus marker; 5: PCR product of CPF4 &CPR4.

根據馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA全長序列推測其編碼蛋白含有376個氨基酸殘基，分子質量約為42.4 kDa。以SingalP 3.0對馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶進行信號肽預測，結果顯示在其氨基端含有1個由20個氨基酸殘基組成的信號肽。以來自不同物種的4種L型半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列進行序列比對分析，推測馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶含有保守的催化三聯體，分別為Cys183、His322和Asn343，且含有ERFNIN基系和GNFD基系 (圖7)。這表明，從馬鈴薯腐爛莖線蟲中所克隆到的基因Dd-cpl-1具有L型半胱氨酸蛋白酶基因家族所具有的序列特征[21-24]，進一步證明其為L型半胱氨酸蛋白酶基因。

圖6 馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因內含子外顯子結構分析結果Fig. 6 Intron-exon structure analysis result of cathepsin L-like cysteine proteinase from D. destructor.

圖7 馬鈴薯腐爛莖線蟲與其他物種中L型半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列比對分析Fig. 7 Multi-sequence alignment of cathepsin L-like cysteine proteinases from D. destructor and other organisms. AAL16954,AAY45870, XP_002638172, Dd-CPL-1 is the CPL of Delia radicum, Rotylenchulus reniformis, Caenorhabditis briggsae and Ditylenchus destructor, respectively; Catalytic triad of Cys, His and Asn (*); Two conserved motifs of ERFNIN and GNFD (--).

2.4 不同類型半胱氨酸蛋白酶系統進化分析

馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶與不同物種中不同類型的半胱氨酸蛋白酶系統進化分析表明，其系統進化樹包含 4個進化分支 (Subclade)，分別由B型、L型、S型及Z型半胱氨酸蛋白酶組成；其中，L型半胱氨酸蛋白酶進化分支包含 2個支系，第 1個支系由植物寄生線蟲、人寄生線蟲捻轉血矛線蟲 Haemonchus contortus和自由生線蟲秀麗小桿線蟲L型半胱氨酸蛋白酶組成，另1個支系由非線蟲動物蓖子硬蜱 Ixodes ricinus、甜菜夜蛾Spodoptera exigua、菜蛆Delia radicum與黃粉甲蟲Tenebrio molitor L型半胱氨酸蛋白酶組成 (圖8)。這表明，馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶同松材線蟲、秀麗小桿線蟲、大豆孢囊線蟲、捻轉血矛線蟲、馬鈴薯白線蟲、腎狀腎形線蟲和南方根結線蟲L型半胱氨酸蛋白酶親緣關系較近。同源比對分析結果顯示，馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶與上述 7種線蟲 L型半胱氨酸蛋白酶一致性(Identities) 分別為77%、67%、66%、65%、64%、64%和 60%，這再一次表明馬鈴薯腐爛莖線蟲的Dd-cpl-1為L型半胱氨酸蛋白酶基因。

3 討論

研究發現，南方根結線蟲Mi-cpl-1在南方根結線蟲腸道細胞中表達[10]，并且在其整個發育過程中的表達量很高，同時還與南方根結線蟲的寄生能力表現出相關性[16]。但至今仍未見關于植物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶組織免疫定位分析的報道。馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶信號肽預測結果表明，其氨基端有1個由20個氨基酸殘基組成的信號肽，這表明馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶為分泌型蛋白。馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶的組織免疫定位分析，將為闡明該酶在馬鈴薯腐爛莖線蟲侵染寄主過程中的具體生物學功能提供新的線索。

圖8 不同物種間半胱氨酸蛋白酶系統進化樹Fig. 8 Phylogenetic trees of cysteine proteinases from different species.: Cathepsin L-like cysteine proteinase (Ce-CPL-1) from free-living nematode C. elegans; : Cathepsin L-like cysteine proteinase (Hc-CPL-1) from human parasitic nematode Haemonchus contortus; : Cathepsin L-like cysteine proteinase cloned from D. destructor. The GenBank Accession No. and the species’ names of different cysteine proteinases are indicated in the ends of every branch.

人寄生線蟲捻轉血矛線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因Hc-cpl-1能夠對秀麗小桿線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因Ce-cpl-1缺失突變體進行功能補償。因此推測動物寄生線蟲中的L型半胱氨酸蛋白酶基因與秀麗小桿線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因功能同源[25]，Ford等的實驗結果進一步支持了這一觀點[11]。但目前仍未有證據表明植物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因同動物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因一樣，與秀麗小桿線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因功能同源。本研究中，以來自不同物種的B型、L型、S型和Z型半胱氨酸蛋白酶進行系統進化分析，結果表明，秀麗小桿線蟲、捻轉血矛線蟲與包括馬鈴薯腐爛莖線蟲在內的5種植物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶形成一個支系，獨立于由非線蟲動物中的 L型半胱氨酸蛋白酶所形成的另一個支系 (圖 8)。這表明，植物寄生線蟲中的L型半胱氨酸蛋白酶基因與秀麗小桿線蟲及捻轉血矛線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因Ce-cpl-1和Hc-cpl-1親緣關系較近。由此推測，植物寄生線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因可能與動物寄生線蟲和秀麗小桿線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因為不同種系但功能相同的基因，其參與植物寄生線蟲的早期胚胎發育等過程。馬鈴薯腐爛莖線蟲L型半胱氨酸蛋白酶基因cDNA全長與基因組序列的克隆及其相關序列特征分析為今后在蛋白水平闡明該基因的生物學功能提供了基礎。

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Cloning and sequence analysis of a new cathepsin L-like cysteine proteinase gene from Ditylenchus destructor

Gaofeng Wang1,2, Deliang Peng2, Jianhua Sun1, Wenkun Huang2, Huan Peng2, and Haibo Long2
1 College of Life Sciences, Tianjin Normal University, Tianjin 300387, China
2 The State Key Laboratory for Biology of Plant Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received: April 23, 2010; Accepted: June 12, 2010

Supported by: National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2010CB833603), National Natural Science Foundation of China (No.30872404).

Corresponding author: Jiye Cai. Tel/Fax: +86-20-85223569; E-mail: tjycai@jnu.edu.cn

國家重點基礎研究發展計劃 (973計劃) (No. 2010CB833603)，國家自然科學基金 (No. 30872404) 資助。