攜帶人類GAD67基因真核表達載體的構建及轉染骨髓基質細胞*

謝三平,陳吉相,李慧,徐婧,黃園園

1.華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院神經內科,武漢 430022;2.荊州市中心醫院神經內科,湖北荊州 434020

攜帶人類GAD67基因真核表達載體的構建及轉染骨髓基質細胞*

謝三平1,2,陳吉相1#,李慧1,徐婧1,黃園園1

1.華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院神經內科,武漢 430022;2.荊州市中心醫院神經內科,湖北荊州 434020

目的:構建攜帶人類谷氨酸脫羧酶67(GAD67)基因的真核表達載體pDC316-CMVEGFP-GAD67,并轉染大鼠骨髓基質細胞(BMSCs)。方法:利用基因重組技術,構建 pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表達載體;利用脂質體將其轉染通過貼壁方法分離培養出來的BMSCs,熒光顯微鏡下觀察并經流式細胞儀檢測其轉染效率,免疫組化檢測GAD67蛋白在BMSCs中的表達。結果:成功構建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表達載體,轉染BMSCs后熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光細胞,流式細胞儀檢測轉染后48 h的轉染效率為37.3%,免疫組化檢測轉染后48 h,BMSCs內GAD67蛋白呈陽性表達。結論:構建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表達載體并成功轉染BMSCs。

谷氨酸脫羧酶67;真核表達載體;轉染;骨髓基質細胞

#【通訊作者】陳吉相,Tel:86-27-85726203,E-mail:cz283895@yahoo.cn

研究顯示,癲癇的發生與神經元退行性變性引起的腦內興奮性遞質與抑制性遞質系統功能失衡有密切聯系。谷氨酸(glutam inic acid,GLU)和γ-氨基丁酸(gamma-am inobutyric acid,GABA)是調節腦內興奮性與抑制性平衡最重要的2種遞質,谷氨酸脫羧酶(g lu tamic acid decarboxylase,GAD)催化GLU脫羧反應生成GABA。GAD有GAD65和GAD67兩種亞型,其中GAD67在調節GABA的生成和釋放中起主要作用[1]。利用攜帶及表達GAD67基因的神經干細胞腦內移植治療癲癇可能具有重要價值[2]。骨髓基質細胞(bonemarrow stromal cells,BMSCs)是骨髓內造血干細胞以外……