120例骨髓增生異常綜合征的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及免疫表型檢測(cè)分析

王 潔，趙成艷，王 敏，李曉蘭

(1.大連市口腔醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116021;2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116027)

120例骨髓增生異常綜合征的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及免疫表型檢測(cè)分析

王 潔1，趙成艷2，王 敏2，李曉蘭2

(1.大連市口腔醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116021;2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116027)

［目的］評(píng)價(jià)血液及骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及干/祖細(xì)胞和骨髓細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)在骨髓增生異常綜合征(MDS)診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值。［方法］對(duì)120例MDS患者和對(duì)照組20例(缺鐵性貧血13例，血小板減少紫癜7例)患者的血液常規(guī)測(cè)定采用Sysmex-xe-2100血常規(guī)分析儀，血液及骨髓細(xì)胞涂片采用瑞-姬氏染色法，免疫表型測(cè)定采用“Becton Dickinson FACSCalib”流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。［結(jié)果］MDS患者外周血以?xún)上祷蛘呷禍p少多見(jiàn);骨髓增生程度以活躍和明顯活躍為主;病態(tài)造血以紅系和粒系為主，各占95.0%、61.7%;免疫學(xué)表型:干/祖細(xì)胞抗原(CD34、HLA-DR)及髓系早期抗原(CD33、CD13、CD117)表達(dá)明顯增高，并隨著病情的惡化逐漸增高，MDSRA組、RCMD組及RAEB組與對(duì)照組比較差異均有顯著性意義(P＜0.05);MDS-RAEB-Ⅱ組與RA組CD34的表達(dá)比較差異有顯著性意義(P＜0.05);髓系晚期抗原(CD15)在MDS-RAEB-Ⅱ型中降低明顯，與對(duì)照組比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。［結(jié)論］MDS患者血液骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及免疫表型的聯(lián)合檢測(cè)，有利于MDS的早期診斷、治療及預(yù)后判斷。

骨髓增生異常綜合征;血細(xì)胞;骨髓涂片;免疫表型

骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes，MDS)是一組起源于骨髓造血干/祖細(xì)胞的惡性克隆性疾病，主要特征為一系列病態(tài)造血、無(wú)效造血及有高風(fēng)險(xiǎn)性發(fā)展為急性白血病。因其臨床表現(xiàn)不典型，血液改變復(fù)雜，缺乏特異性等特點(diǎn)，確診比較困難。目前，MDS的診斷主要依靠外周血骨髓形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及免疫分型。作者將大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2006～2010年120例診斷為MDS的患者的形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)異常改變進(jìn)行回顧分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

120例MDS患者，男71例，女49例，年齡為18～82歲，中位年齡57.5歲。并將之前的FAB分型轉(zhuǎn)為相應(yīng)的WHO分型。由于，MDS-u及5q-分型的MDS患者例數(shù)極少，所以，不包括在本次分析之中。對(duì)照組20例，男13例，女7例，年齡為17～80歲，中位年齡55.5歲(其中缺鐵性貧血13例，血小板減少紫癜7例)。

1.2 方 法

形態(tài)學(xué)檢查指標(biāo)包括:外周血常規(guī)檢查:WBC、RBC、Hb及PLT等，并進(jìn)行涂片分類(lèi)，血常規(guī)檢測(cè)采用“Sysmex-xe-2100血常規(guī)儀”:骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查，取材滿(mǎn)意，采用瑞氏-姬姆薩染色法染色;免疫學(xué)檢查指標(biāo)包括:骨髓細(xì)胞免疫表型的測(cè)定:造血干細(xì)胞和髓系相關(guān)標(biāo)志(CD34、HLA-DR、CD33、CD13、CD14、CD15 和 CD117)，采用“Becton Dickinson FACSCalib”流氏細(xì)胞儀分析相關(guān)細(xì)胞表面抗原類(lèi)型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS15.0軟件對(duì)各型MDS骨髓造血干/祖細(xì)胞及髓系相關(guān)表面抗原比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血象特點(diǎn)

120例MDS患者中，一系和兩系減低患者比例低于三系同時(shí)減低患者的比例;RA、RAS、RCMD、RCMD-RS、RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ各亞型三系減低分別占 47.3%、50.0%、53.3%、40.0%、50.0%、51.2%。見(jiàn)表 1。

表1 120例MDS患者外周血特點(diǎn)Tab 1 Peripheral blood cell characteristics in 120 MDS patients n(%)

2.2 骨髓象特點(diǎn)

骨髓增生程度整體狀況為:以明顯活躍占45.0%、活躍占30.0%為主。MDS患者除RA、RAS只有紅系病態(tài)造血外，其余各型均有兩系以上病態(tài)造血，分別為粒系占61.7%，紅系占95.0%，巨系占28.3%，以紅系和粒系病態(tài)造血為主，巨系病態(tài)造血相對(duì)較少。見(jiàn)表2。

2.3 MDS患者骨髓中造血干/祖細(xì)胞及髓系抗原表達(dá)情況

MDS患者髓系成熟抗原表達(dá)異常，CD15作為成熟髓系抗原較對(duì)照組有不同程度的減低，在MDS-RAEB-Ⅱ亞型中尤為明顯(P＜0.05)。MDS患者髓系早期抗原表達(dá)異常，患者的CD13、CD33、CD117的抗原異常表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，并且隨著疾病的發(fā)展明顯惡化，其抗原表達(dá)逐漸增高。MDS患者骨髓造血干/祖細(xì)胞表達(dá)異常。本組MDS患者CD34、HLA-DR的抗原表達(dá)，隨著MDS的進(jìn)展即RA→RCMD→RAEB逐漸增高，與對(duì)照組比較差異均有顯著性意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表2 120例MDS患者骨髓象特點(diǎn)Tab 2 Bone marrow characteristics in 120 MDS patients n(%)

表3 骨髓造血干/祖細(xì)胞及髓系相關(guān)表面抗原表達(dá)Tab 3 Surface antigen rate of hematopoietic Dry/progenitor and myeloid cells (%)

3 討 論

MDS在臨床與實(shí)驗(yàn)室檢查中往往缺乏特異性的指標(biāo)。其臨床表現(xiàn)多樣，病情發(fā)展緩慢復(fù)雜，需要較長(zhǎng)的時(shí)間觀(guān)察動(dòng)態(tài)變化，給診斷帶來(lái)了一定的難度。所以，初始診斷用的外周血和骨髓標(biāo)本最好取自于未采用任何特殊治療之前。細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織化學(xué)和免疫表型特點(diǎn)，用于確定累計(jì)的細(xì)胞系列和成熟程度［1］。原始細(xì)胞技術(shù)是分型和確定疾病進(jìn)程的重要指標(biāo)，原始細(xì)胞的定義采用MDS形態(tài)學(xué)工作組的標(biāo)準(zhǔn)［2］。外周血和骨髓中原始細(xì)胞數(shù)以光學(xué)顯微鏡下所見(jiàn)為標(biāo)準(zhǔn)。按照此標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)對(duì)外周血常規(guī)及涂片的檢查、骨髓形態(tài)學(xué)及免疫表型的聯(lián)合檢測(cè)，提高其診斷率。

3.1 血象檢查

從表1可以看出，MDS患者血象表現(xiàn)為一系、二系或三系減低，其程度依不同的分型而各不相同。作者在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)患者的血紅蛋白降低，表現(xiàn)為大細(xì)胞性貧血。如果血細(xì)胞分析儀提示有幼稚或原始細(xì)胞、有核紅細(xì)胞及巨大血小板等需要做血涂片加以證實(shí)，血涂片可以彌補(bǔ)血細(xì)胞分析儀在形態(tài)學(xué)上的不足。血涂片的復(fù)檢非常重要。如果血涂片中發(fā)現(xiàn)原始細(xì)胞，以及幼稚粒細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞并伴有病態(tài)造血，則對(duì)MDS的診斷有很大的幫助。但是，血常規(guī)對(duì)MDS的診斷遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，還需更進(jìn)一步做骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查。

3.2 骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

可以了解骨髓中各系細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量的變化，從而反映骨髓造血是否正常。MDS骨髓象的特點(diǎn)基本為無(wú)效造血和病態(tài)造血。WHO標(biāo)準(zhǔn)將RA、RARS、RCMD、RCMD -RS以及 RAEB細(xì)化，便于臨床治療策略的個(gè)體化制定，以及預(yù)后判斷。目前，此方案已經(jīng)得到了血液學(xué)界的廣泛認(rèn)可［3］。而無(wú)論是FAB還是WHO分型，關(guān)于MDS分型的主要依據(jù)都是骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，即原始粒細(xì)胞的多少以及各系的病態(tài)造血情況。所以，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的檢查尤為重要。本研究分析了120例MDS的骨髓細(xì)胞病態(tài)造血情況，發(fā)現(xiàn)有些RA的病態(tài)造血不是很明顯，單純從形態(tài)學(xué)檢查很難鑒定。RCMD及RAEB各系有不同程度的病態(tài)造血，對(duì)MDS的診斷有很大的幫助，但必須排除良性病態(tài)造血，如造血原料缺乏、溶血性疾病和自身免疫性疾病等繼發(fā)性病態(tài)造血。從表2可以看出，紅系和粒系病態(tài)造血對(duì)MDS的診斷十分重要。骨髓病態(tài)造血是診斷MDS的關(guān)鍵形態(tài)學(xué)特征。但是，有些MDS患者病態(tài)造血不明顯，如RA患者，單純以形態(tài)學(xué)難以鑒定。同時(shí)，病態(tài)造血并非MDS所特有，故骨髓中只有一系病態(tài)造血時(shí)，診斷MDS尤其需要慎重。建議定期隨診，動(dòng)態(tài)觀(guān)察血象及骨髓象，并可進(jìn)行免疫學(xué)分型和細(xì)胞遺傳學(xué)檢查以明確診斷。

3.3 免疫分型的重要性

雖然細(xì)胞形態(tài)學(xué)一直是診斷MDS的金標(biāo)準(zhǔn)，但在實(shí)際工作中，由于病態(tài)造血類(lèi)型繁多，缺乏公認(rèn)的量化標(biāo)準(zhǔn)，以及工作人員的水平等原因易被忽略。另外，不是所有的MDS患者都存在著特征性的骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)異常，更要排除某些良性疾病繼發(fā)病態(tài)造血。而有文獻(xiàn)報(bào)道，異常核型的染色體檢出率也僅僅為40% ～70%［4］。大量的研究結(jié)果顯示，免疫分型在MDS的診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮了重要作用。其中，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型對(duì)MDS的診斷和預(yù)后具有重要的價(jià)值［5，6］，特別是可以定量和定性分析CD34祖細(xì)胞或成熟粒細(xì)胞，以及單核細(xì)胞。MDS是一組惡性克隆性干/祖細(xì)胞疾病。某些免疫表型的變化能夠?qū)寺⌒缘乃柘祼盒阅[瘤進(jìn)行鑒別診斷。同時(shí)單一的表型異常并沒(méi)有特異性，必須結(jié)合不同的抗體組合來(lái)進(jìn)行觀(guān)察。在臨床高度懷疑但形態(tài)學(xué)和遺傳學(xué)不能診斷時(shí)，免疫表型將成為MDS(特別是RA)的重要指標(biāo)。當(dāng)骨髓 CD34細(xì)胞≥1.5%時(shí)，免疫表型對(duì)MDS的診斷更具意義［7］。

3.4 髓系原始干/祖細(xì)胞表型對(duì)于MDS的研究?jī)r(jià)值

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)確定的原始細(xì)胞比例通常和流式細(xì)胞儀檢測(cè)的CD34細(xì)胞的比例有很好的相關(guān)性［8］。從表3也可以看出，MDS-RA組CD34細(xì)胞與對(duì)照組比較差異有顯著性意義，MDS-RAEB-Ⅱ組CD34細(xì)胞與MDS-RA組比較差異有顯著性意義，即RA/RAS→RCMD/RCMD-RS→RAEB-Ⅰ→RAEB-Ⅱ，患者骨髓細(xì)胞CD34表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，并且隨著病情的惡化逐漸增高，CD15較晚期出現(xiàn)髓系抗原逐漸減少。HLA-DR、CD34及其他髓系抗原的檢測(cè)，不僅有助于MDS診斷，而且對(duì)預(yù)后有重要意義;本組120例MDS患者有23例轉(zhuǎn)化為急性白血病。其中，REAB-Ⅰ型和REAB-Ⅱ型轉(zhuǎn)化為白血病為19例，其他4例。所以，本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HLA-DR、CD34等早期抗原表達(dá)越高，越容易轉(zhuǎn)化為白血病。

本研究對(duì)120例MDS患者骨髓與免疫表型的回顧分析，發(fā)現(xiàn)其聯(lián)合檢測(cè)有助于提高M(jìn)DS的早期診斷率，并對(duì)MDS的診斷、治療及預(yù)后評(píng)估有重要臨床價(jià)值。

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Analysis of cell morphology and immunophenotype detection in 120 patients with myelodysplastic syndrome

WANG Jie，ZHAO Cheng-yan，WANG Min，LI Xiao- lan
(1.Department of Laboratory，Dalian Stomatological Hospital，Dalian116021，China;2.Department of Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To evaluate morphology of the blood and bone marrow cells and surface antigen detection of stem/progenitor and bone marrow cells in the diagnosis and prognosis of patients with myelodysplastic syndrome(MDS).［Methods］The study included 120 MDS cases and 20 cases as control group，which included 13 iron - deficiency anemia cases and 7 thrombocytopenic purpura cases.Blood routine was determined by"Sysmex - xe - 2100"blood analyzer.Blood and bone marrow smears were dyed by"Wright- Giemsa"dyeing method.Immunophenotypes were analyzed by flow cytometric using BD FACSCalib.［Results］MDS patients＇peripheral blood showed two - line or three - line reduce.Bone marrows＇myeloproliferative degree was active and obvious active.Pathological hematopoietic was seen with erythroid and myeloid lines，respectively account for 61.7%and 95.0% .Stem/progenitor cells＇expression of antigens(CD34，HLA - DR)and myeloid early antigens(CD33，CD13，CD117)were significantly higher，and gradually heightened with the aggravation of the illness.MDS-RA，RCMD and RAEB type all had significant difference from control group(P＜0.05).The expression of CD34 in MDS-RAEB -Ⅱtype had presented difference with MDS-RA(P＜0.05).Myeloid late antigen(CD15)decreased significantly in MDS -RAEB -Ⅱtype(P＜0.05).［Conclusion］Blood and bone marrow cell morphology combined with immunophenotype detection in MDS patients is helpful for early diagnosis，treatment and prognosis judgment of MDS.

Key words:myelodysplastic syndromes;blood cell;bone marrow smears;immunophenotyping

R553.1

A

1671-7295(2011)05-0495-04

2011-06-03;

2011-08-12

王 潔(1971-)，女，山東煙臺(tái)人，副主任技師。E-mail:Melen Wang5@gmail.com

趙成艷，主任技師。E-mail:zcy196412@163.com