晚期非小細胞肺癌RRM1蛋白表達與吉西他濱聯合順鉑化療療效的關系

高志強 韓寶惠 沈潔 顧愛琴 鐘華

肺癌是全球發病率和病死率最高的腫瘤,其中約80%為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC).因缺乏有效的早期診斷手段,初診時約75%的患者已失去了手術時機,晚期NSCLC目前仍以聯合化療為主,但5年生存率不到15%[1].影響NSCLC患者化療療效及生存的主要原因是腫瘤細胞對抗癌藥的抗藥性.核糖核苷酸還原酶M1(ribonucleotide reductase M1,RRM1)是最近被廣泛關注的一個基因,RRM1的表達水平與腫瘤細胞對吉西他濱耐藥密切相關[2].通過對RRM1表達的檢測,能否預測不同人群對吉西他濱的敏感程度以制定個體化化療方案、提高藥物治療的有效率,這些都成為人們感興趣和研究的主要目標.然而,近幾年國內的相關研究均未得到理想的試驗結果.在國內外研究的基礎上,本研究探討了RRM1蛋白的表達水平與吉西他濱聯合順鉑(GP方案)治療晚期NSCLC療效的關系.

1 材料與方法

1.1 研究對象 以2006年8月-2009年5月上海市胸科醫院收治的既往未接受過化療、無法手術切除的75例晚期(IIIb期-IV期)NSCLC患者為研究對象,75例患者均經支氣管鏡下活檢(58例)或穿刺活檢(17例)獲得病理學診斷.其中男性50例,女性25例;年齡35歲-73歲,中位年齡60歲;肺鱗癌21例,肺腺癌49例,其他類型5例.全部患者均具有可測量的腫瘤病灶,參照國際抗癌聯盟1997年TNM分期,IIIb期34例,IV期41例.吸煙者47例,不吸煙者28例.75例患者均接受GP方案(吉西他濱1,000 mg/m2d1,d 8+順鉑75 mg/m2d1,每28天為1周期).末次隨訪時間為2010年9月30日.

1.2 主要試劑 鼠抗人RRM1單克隆抗體購自Santa Cruz生物工程公司,免疫組織化學試劑盒購自華美生物工程公司.

1.3 實驗方法 收集75例NSCLC纖支鏡或肺穿刺活檢標本,用微波行抗原修復15 min,鼠抗人RRM1單克隆抗體(1:100)4oC過夜,磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.2)清洗后加Anti-Rabbit Envision HRP二抗37oC放置30 min,PBS清洗后DAB顯色,蘇木精對比染色,然后水洗、藍化、脫水、中性樹膠封片.以Lecia QWin Plus軟件對組織芯片結果進行分析,RRM1主要為胞漿染色,胞漿中出現棕黃色顆粒且面積占分析區域總面積比≥5%為RRM1(+)表達即高表達,<5%為RRMl(-)即低表達[3].由病理科兩位醫師(其中一位為主任醫師)在不知道臨床資料的情況下對標本染色結果進行判斷.

1.4 療效評價標準 按世界衛生組織與國際抗癌聯盟標準判定為完全緩解(complete response, CR)、部分緩解(partial response, PR)、輕度緩解(minimal response,MR)、疾病穩定(stable disease, SD)與疾病進展(progressive disease, PD).近期客觀有效為CR+PR+MR,受益為CR+PR+MR+SD,有效者應1個月后再檢查確認.疾病進展時間(time to progress, TTP)為自治療開始至腫瘤病灶出現進展的時間.生存期為治療開始至死亡或失訪的時間.行為狀態采用東部腫瘤協作組的體能狀態評分(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status Scale, ECOG-PS).

1.5 統計學分析 采用SPSS 13.0軟件進行數據分析.組間差異采用卡方檢驗.生存分析采用Kaplan-Meier法,生存率的比較采用Log-rank檢驗,P<0.05為差異有統計學意義.

2 結果

2.1 RRM1蛋白在晚期NSCLC組織中的表達及其與臨床特征之間關系 75例初治晚期NSCLC患者的病理標本中,RRM1蛋白表達陽性率為38.7%,與患者的性別、年齡、吸煙狀態、臨床分期及組織病理學類型無明顯相關性(P>0.05)(圖1,表1).

2.2 RRM1蛋白表達與化療療效及生存期之間的關系 RRM1蛋白高表達組的化療有效率(31.1%)低于低表達組(41.3%),差異有統計學意義(χ2=10.558,P=0.005);RRM1表達陽性組的1年生存率(27.6%)低于陰性組(58.7%),差異有統計學意義(χ2=6.916,P=0.009);RRM1蛋白高表達組的中位生存期(10.70個月,95%CI:7.91-13.49)低于低表達組(13.30個月,95%CI:11.61-14.94),但差異無統計學意義(P=0.245);RMM1蛋白高表達組的疾病進展時間為(3.10個月,95%CI:1.65-4.55)低于低表達組(5.11個月,95%CI:3.58-6.42),差異有統計學意義(P=0.042)(圖2,表2).

圖 1 RRM1蛋白在晚期NSCLC組織中的表達(SP,X200).A:陽性表達;B:陰性表達.Fig 1 Expression of RRM1 in advanced NSCLC tissues (SP, X200). A: Positive; B: Negative.

圖 2 RRM1表達水平與NSCLC患者的生存曲線之間的關系.A:總體生存時間;B:疾病進展時間.Fig 2 Relationships between expressions of RRM1 and the survival curves of NSCLC patients. A: overall survival; B: time to progression.

表 1 各組晚期NSCLC患者的臨床特征Tab 1 Characteristics of patients with advanced NSCLC

表 2 晚期NSCLC患者的臨床療效及預后Tab 2 Response to treatment and survival time of patients with advanced NSCLC

3 討論

近年研究[4]表明,細胞信號轉導中相關因子的表達異常、腫瘤細胞DNA修復的異常及其它相關基因的表達異常與肺癌耐藥的產生也存在密切聯系,提示前瞻性地進行分子指標的測定是進行個體化治療、提高化療療效的關鍵.

RRM1是核苷酸還原酶調節M1亞單位,當ERCC1與XPD、XPG、XPA等修復基因將DNA鏈中受損的部分切除后,DNA鏈上留下的空缺就由RRM1提供的核苷酸來填補[5].目前研究表明,RRM1是導致腫瘤細胞對吉西他濱類耐藥的一個重要因素.

Rosell等[6]采用定量PCR的方法檢測了75例NSCLC患者的腫瘤標本中RRM1 mRNA等的表達,其中有22例患者接受了GP方案化療,發現低水平表達RRM1 mRNA的吉西他濱聯合順鉑組患者對化療的反應較好.Lee等[7]研究以免疫組織化學法檢測了40例晚期NSCLC組織中RRM1蛋白的表達,結果發現RRM1蛋白表達陽性率為35%,RRM1蛋白陽性表達組患者的疾病控制率(PR+SD)低于陰性表達組患者(23% vs 56%).本研究顯示RRM1蛋白表達陽性率為38.7%,RRM1蛋白高表達組的化療有效率(31.1%)低于低表達組(41.3%),差異有統計學意義(P=0.005);RRM1蛋白高表達組的1年生存率(27.6%)低于低表達組(58.7%),差異有統計學意義(P=0.009).

Ceppi等[8]檢測了70例NSCLC患者組織中RRM1 mRNA等的表達水平,結果發現低表達RRM1 mRNA的患者的中位生存時間較長(13.9個月 vs 10.9個月,P=0.039).Lee等[7]研究發現RRM1蛋白陽性表達組患者的總體生存期明顯短于陰性表達組患者(5.1個月 vs 12.9個月,P=0.022).本研究顯示RRM1蛋白高表達組的中位生存期(10.70個月)低于低表達組(13.30個月),但差異無統計學意義(P=0.245);RMM1蛋白高表達組的疾病進展時間為(3.10個月)低于低表達組(5.11個月),差異有統計學意義(P=0.042).

通過本研究進一步證實,在晚期化療的NSCLC患者中RRM1蛋白的表達水平與腫瘤細胞對吉西他濱耐藥及患者預后密切相關,提示RRM1蛋白表達水平高低可能會成為篩選接受化療的患者的一項指標.通過對RRM1蛋白的檢測,可以預測不同人群對吉西他濱的敏感程度以指導臨床用藥、提高藥物治療的有效率,同時減少不必要的藥物毒副作用和經濟支出,更好地實現對患者的個體化治療.

總之,RRM1蛋白的表達水平與接受GP方案治療的晚期NSCLC患者的化療療效及預后密切相關.但RRM1蛋白能否作為篩選患者的指標并真正應用于臨床,尚有許多重要問題需要解決.