四種梅毒血清檢測方法比較分析

潘蘭

梅毒(syphilis)是由蒼白螺旋體（Treponema pallidum,TP）(又稱梅毒螺旋體)引起的一種性傳播疾病，可侵犯皮膚黏膜及神經、心血管、骨骼等組織器官，引起慢性病變。近年來，我國梅毒的患病率呈逐漸上升的趨勢，因此，對梅毒進行快速、敏感、全面的檢測就顯得尤為重要。梅毒血清學試驗是目前國內外診斷梅毒的主要實驗室檢查方法。應用甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)、膠體金快速檢測試驗(SYP)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)四種血清學檢測方法，對梅毒患者的標本進行檢測，并對檢測結果及各種方法的優缺點進行比較及應用探討，結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2009年3月至2010年2月對全市進行婚檢的人員所采集標本6215份，醫院確診的梅毒患者標本75份。其中一期梅毒52例，二期梅毒21例，晚期梅毒2例，所有患者的梅毒診斷均符合標準[1]。

1.2 試劑與儀器

TRUST試劑盒由上海榮盛公司提供，SYP試劑盒由杭州艾康生物技術有限公司提供，TP-ELISA(IgG/IgM)試劑盒由廈門新創科技有限公司提供，TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供。CliniBio酶標儀和AW1全自動洗板機，梅毒振蕩儀。

1.3 方法

用甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）做非特異性抗體半定量檢測，用膠體金快速檢測試驗（SYP）、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）做特異性抗體定性檢測，TRUST、SYP、ELISA、TPPA四種方法均嚴格按試劑盒操作說明書進行操作，并在有效期內使用。

1.4 統計學方法用x2檢驗

2 結果

2.1 四種方法檢出情況

在6215份標本中，經TPPA確認后檢測出75份陽性標本，其陽性檢出率為1.21%(75/6215)，見表1。TRUST梅毒陽性檢出率為0.77%(48/6215)，SYP梅毒陽性檢出率為0.96%(60/6215)，ELISA梅毒陽性檢出率為1.19%(74/6215)。其中TRUST敏感性為57.3%，特異性99.91%，SYP敏感性76%，特異性99.95%，ELISA敏感性為97.3%，特異性99.98%。陽性檢出率：ELISA＞SYP＞TRUST，敏感性：ELISA＞SYP＞TRUST，特異性：ELISA＞SYP＞TRUST。

表1 三種檢測方法敏感性、特異性比較

TRUST特異性=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=[6135/（6135+5）]×100%=99.91%

SYP特異性=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=[6137/（6137+3）]×100%=99.95%

ELISA特異性=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=[6139/（6139+1）]×100%=99.98%

2.2 四種方法檢測結果比較

由表2可見，ELISA法與TPPA法檢測結果無統計學差異（P＞0.05），TRUST法、SYP法與TPPA法檢測結果差異有統計學意義（P＜0.01）。

表2 四種方法檢測6215份血清標本的結果比較

表3 四種血清學檢測方法檢測梅毒的診斷意義

3 討論

TRUST采用（VDRL）重懸于含有特制的甲苯胺紅溶液中制成，在白色卡片上進行實驗，以檢測血清或血漿中的反應素[2]。TRUST試驗檢查的是人體內的反應素，是一種非特異性類脂質抗體，人體在某些生理狀態，如懷孕時，TRUST可以出現假陽性；患有隱性傳染病，如風疹、水痘、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺結核、肺炎、亞急性細菌性心內膜炎等疾病時，TRUST也可以呈假陽性；許多慢性病，如類風濕性關節炎、SLE、風濕性心臟病、肝硬化、干燥綜合征、慢性胃炎和海洛因成癮等，TRUST同樣可以呈假陽性[3]。該方法操作簡便，試劑價格便宜、反應快，不需要特殊儀器設備，方便測定梅毒抗體滴度，其滴度變化與梅毒治療情況呈正相關，該法最適用于臨床醫生對梅毒性疾病的療效觀察、隨防。

SYP采用高特異性抗原抗體反應及免疫層析分析技術來定性檢測血清/血漿中是否含有梅毒特異性抗體的試驗方法[4]。SYP是應用現代生物工程技術制備的高度純化的單克隆梅毒螺旋體的基因工程抗原，能夠高度選擇地找尋與之相結合的抗體的原理，因而具有快捷(反應5～10min即可出結果)、簡便的特點，SYP的檢測過程中可最大限度地避免標本處理、溫度、濕度、pH值等對結果的影響，并且該法一次加樣，不需任何儀器設備，易于操作，既可用于批量檢測，也可用于少量標本的檢測。除了和傳統的確診實驗一樣對梅毒初染階段和先天梅毒敏感性較低之外，對其它階段的患者血清具有較高的敏感性和特異性。

TP－ELISA是利用基因重組工程合成梅毒特異性抗原包被在微孔滴定板上，用雙抗原夾心法檢測血清中的梅毒特異性抗體的一種較新的梅毒血清學診斷方法。文獻[3]報道：雙抗原夾心法ELISA檢測梅毒螺旋體敏感性高，結果可與TPPA試驗媲美，且假陽性和假陰性不易出現，故特異性也較好。而且由于機體不會產生太多的抗體，所以不會有“鉤狀效應”的出現，也不會因此而產生假陰性。此方法操作簡便，一次可完成多份標本的檢測，其試驗結果由儀器分析，客觀而準確，易于讀取、保存。可以自動化、標準化、大批量同時檢測，工作中對ELISA的室內質量控制也有更多的經驗。因此，TP-ELISA法是目前梅毒篩選、早期診斷、確認的最好方法之一。但TP—ELISA法主要缺點為該法檢測的是梅毒IgM和IgG的混合抗體，梅毒IgG抗體治愈后相當長時間內仍然存在較高的陽性率，甚至終身[5]。因此，TP-ELISA單獨陽性只能說明正在感染或曾經感染過，不能判斷梅毒疾病活動與否，或處于恢復期，因此不能作為療效監測手段[6]。

TPPA試驗是將特異性梅毒螺旋體抗原包被在明膠顆粒上，省略了吸收劑，不受生物學因素影響，與血清中的特異性抗體結合后，出現肉眼可見的凝集反應的檢測方法[7]。TPPA法具有特異性強、敏感性高，血清、血漿皆可用于檢測的特點，但反應時間較長，最少需要1.5h，而且價格較昂貴，不適于大批量的檢測。

比較本次實驗結果：①TRUST法靈敏度和特異性均低于SYP、ELISA，存在一定的假陽性率和假陰性率。因此對早期梅毒的輔助診斷能力差，不適合用于早期梅毒的輔助診斷。②SYP法是一種快速體外診斷技術，與TRUST、TP-ELISA法相比，此法簡便、快捷、低成本，可對臨床上疑診梅毒的患者進行篩選。③ELISA是一種基于基因工程的特異性檢測技術[8]，靈敏度和特異性均高于TRUST、SYP，且與TPPA鑒定試驗的吻合度較高，對梅毒的早期輔助診斷較好。因此，ELISA陽性只說明正在感染或曾經感染過，不能判斷梅毒疾病活動與否，所以不能作為療效監測手段[10]。

本組75例陽性血清標本檢測結果可表明：TRUST(-)SYP(-)ELISA(-)TPPA(-)提示排除梅毒或初期感染潛伏期；TRUST(+)SYP(+)ELISA(-)TPPA(-)提示假陽性或初期感染期；TRUST(+)SYP(+)ELISA(+)TPPA(+)提示梅毒感染期；TRUST(-)SYP(+)ELISA(+)TPPA(+)提示晚期梅毒或梅毒既往感染[9]。綜上，我們認為目前對臨床各期梅毒應根據臨床不同的目的用SYP法進行篩選，并結合TRUST進行診斷，仍有疑問者，再用ELISA或TPPA進行確診，將是一般醫療機構較為理想的血清學實驗組合。既能有較高的敏感性和特異性，又能很好地進行療效觀察，提高臨床實驗室對梅毒性疾病的診斷率，最大限度地避免誤診和漏診。

[1] 張學軍.皮膚性病學[M].6版.北京：人民衛生出版社，2004:208-214.

[2] Wang Fang，Cheng Hai.The Detection Technique to Treponema Pallidum in the Laboratory[J]．The Chinese Journal of Dermatovenereology，2003，17(2)：135．

[3] 曾英.梅毒血清學檢測方法比較及臨床應用探討[J].國際檢驗醫學雜志，2007，28(11)：1054.

[4] 葉應撫，王毓三，申子喻.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006:649-650.

[5] 王林娜，鄭和義．梅毒血清學快速診斷試驗研究進展[J]．國外醫學，皮膚性病學分冊，2004，30(6)：399-401.

[6] 宋繼權，盛晚香，馮誼，等.ELISA在梅毒血清學診斷中的應用[J].中國皮膚性病學雜志，2000，14(4)：258-259.

[7] Workowski K Aerman SM.Exually transmitted diseases treatment guidelines[J].MMWR Recomm Rep，2006，55(36)：997-1002.

[8] 林碧，陳筱華.血液梅毒篩查中不同實驗方法適用性探討[J].浙江實用醫學，皮膚病學與性病學，2008，13(1)：38-38.

[9] 薛黎，曹文艷,曹玲等．評價三種梅毒檢測方法的臨床診斷意義[J]．新疆醫科大學學報，2007，29(9)：1037-1038.

[10] 朱玉梅.早期梅毒的TRUST和TPPA檢測對比臨床探討[J].當代醫學,2010,16(20):108-109.