生殖器皰疹患者超氧化物歧化酶活力及自然殺傷細胞表達的檢測

鄒明華 李楚潮 劉臘鳳 劉瓊芬

生殖器皰疹(genital herpes，GH)是常見的性傳播疾病之一，由I型單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus type 1，HSV-1)或Ⅱ型單純皰疹病毒(HSV-2)引起的一種性傳播疾病，臨床主要由HSV-2感染引起［1］。GH發病率逐年增高，易反復發作，給患者和社會帶來沉重的心理和經濟負擔［1，2］。GH的發病機制尚未完全清楚，有研究顯示HSV病毒感染機體后，引發機體的細胞免疫紊亂及氧化應激狀態失衡，主要是T細胞水平表達低下、Th細胞及Tc細胞分化偏態［2，3］。本研究探討GH患者氧化應激狀態與細胞免疫水平，以探討GH的發病機制，可用于指導GH的治療、判斷預后。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集24例GH患者，所有患者來自我院2010年8月至2011年1月性病科門診，診斷符合2000年我國衛生部疾病控制司和全國性病麻風病控制中心聯合頒布的GH診斷標準。24例GH患者中男16例，女8例，年齡18～40歲(平均23.6歲)，病程2 d～2年，平均病程10.1個月。患者就診前3個月內均未系統性應用免疫抑制劑、免疫調節劑、皮質類固醇制劑。收集24例健康體檢者作為正常對照，其中男14例，女10例，年齡18～36歲(平均22.9歲)，患者與健康對照者年齡、性別差異無統計學意義。

1.2 實驗方法

1.2.1 SOD的檢測 早晨空腹肘靜脈取血2 ml，分離血清待測。采用透射比濁法，SOD標準試劑合由南京建成生物研究所提供，檢測方法參照試劑說明書和文獻進行［3］。

1.2.2 NK細胞表達的流式細胞術分析 取GH患者肝素抗凝血100 ul，加入淋巴細胞檢測試劑25 ul，混勻，室溫避光染色20 min;加入2 ml紅細胞裂解液，室溫避光放置10 min;1500 r/min離心5 min棄上清液，加磷酸鹽緩沖液(PBS)2 ml，混勻;1500 r/min離心5 min棄上清液，加2%多聚甲醛PBS 500 ml固定，放置4℃ ～8℃冰箱待檢測。每管加細胞液100 μl，加入 10 μl抗 CD4 mAb-PerCP，溫室避光放置 15 min;紅細胞溶解液0.5 μl溶解紅細胞15 min;破膜劑I、II固定和破膜;加PBS3 ml，1200 r/min離心5 min，棄上清;加細胞因子抗體，每份標本分別加同型對照IgG1-FITC;溫室避光放置15 min;加 PBS 4 ml，1200r/min;離心 10 min，棄上清;適量 PBS重懸細胞上流式細胞儀檢測;每份標本檢測1萬個細胞結果經Cell Quest功能軟件進行參數獲取和數據分析。

1.3 統計學方法 采用SAS 8.01統計軟件進行統計學分析，組間比較方差分析后采用t檢驗，以P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

GH患者SOD活力明顯低于健康對照組(t=-4.14，P=0.0001);NK細胞的水平明顯低于健康對照組(t=-2.67，P=0.0133)(見表1);SOD活力與NK細胞表達無顯著相關性(r=-0.02566，P=0.9170)。

表1 GH患者SOD活力與NK細胞表達

3 討論

SOD是組織細胞中清除自由基的主要預防系統，活力反映了機體清除氧自由基的能力，對有害的超氧陰離子自由基產生特異的歧化反應，阻止自由基攻擊核酸、蛋白質、不飽和脂肪酸等生物大分子，使之發生交聯或斷裂，保護細胞免于損傷［4，5］。SOD與產生的自由基發生歧化反應，保護組織細胞免受損傷;而信息蛋白迅速傳遞信息，反饋到控制SOD表達的基因快速作出應答，產生足量的SOD，以滿足組織細胞代謝的需要，當這種異常的應答一旦長時間的存在下去，必然要導致組織細胞內代謝失去平衡，導致細胞發生異變。NK細胞是機體免疫系統的重要免疫細胞，是抗病毒感染的第一道防線［4，5］。在免疫過程中，NK細胞的存在決定著細胞毒性T淋巴細胞體細胞向成熟細胞毒性T淋巴細胞的分化并且控制著記憶T細胞的形成。MHC-I類分子將感染HSV的細胞首先呈遞給NK細胞，NK細胞直接而迅速地殺滅病毒［2］。最近的研究顯示GH患者外周血NK細胞數量減少;此外，患者皮損內HSV-2病毒載量與NK細胞水平呈顯著的負相關［6］，提示NK細胞活性減低，抗病毒作用減弱，抑制T淋巴細胞的增殖。癌癥患者NK細胞活性降低，SOD與過氧化氫酶協同能夠恢復患者的NK細胞活性［7］。

本研究旨在探討GH患者SOD與過氧化氫酶協同能否恢復患者的NK細胞活性，提高患者的免疫水平。研究結果顯示，GH患者外周血中SOD活力明顯減低，可能與HSV感染消耗了抗氧化物SOD，造成了機體的氧化應激失衡。GH患者NK細胞數量明顯低于正常人群，但SOD活力與NK細胞數無顯著相關性，可能與HSV病毒感染屬于局限性，未引起全身性炎癥反應有關，本研究結果與易勤等人［7］報道的結果基本一致。提示GH患者存在氧化應激狀態失衡、細胞免疫抑制，抗病毒作用減弱現象;在治療上除了給予抗病毒治療，同時給予免疫增強劑和抗氧化劑能有效地降低GH的復發率。

［1］周文泉，桑紅.生殖器皰疹的流行病學和診治進展.中華男科學，2003，9(8):611-618.

［2］林路洋，李常興，曹開源，等.單純皰疹-II型病毒感染的皮損部位病毒載量與外周血Th及Tc的相關性研究.中國熱帶醫學雜志，2009，9(9):994-997.

［3］季健平，吳再彬，劉歧山，等.超氧化物歧化酶超微量測定法.南京鐵路醫學院學報，1991，10(1):27.

［4］馬玉玲，張培菊，李士玉.肝病患者血清LPO SOD檢測結果分析.濟寧醫學院學報，1998，21(2):43-44.

［5］史天良，劉維蘭，韓小友，等.焦化工人癌癥高發與超氧化物歧化酶異常的研究.腫瘤研究與臨床，2000，12(2):101-102.

［6］林路洋，李常興，武明昌，等.生殖器皰疹患者皮損HSV-2病毒載量與外周血細胞免疫功能的關系.嶺南皮膚性病科雜志，2008，15(6):327-331.

［7］易勤，張誼芝，張敏.生殖器皰疹患者氧化應激與細胞免疫狀態的研究.四川大學學報(醫學版)，2006，37(1):150-151.