中樞神經損傷疾病與烯醇化酶活性的相關性探討

符曉蘇 張志宇 孫 奕

目前已知烯醇化酶有 5 種形式組成 αα，ββ，γγ，αβ，αγ五種同功酶［1］。γγ型烯醇化酶特異地存在神經元細胞或神經內分泌細胞，稱之為神經元特異性烯醇化酶(NSE)。對于NSE的生物學特性及其臨床應用，尤其對神經元的腫瘤和肺小細胞癌的臨床診斷價值，已積累了大量的文獻資料［2］。本實驗用全自動生化儀酶偶聯速率法測定血清中的烯醇化酶活性。探討中樞神經系統疾病與ENO活性的相關性。

1.材料與方法

1.1 材料 73例經臨床確診的腦中樞神經系統疾病住院病例中，腦出血15例，腦梗死25例，顱內腫瘤5例，中樞神經感染12例，癲癇16例。男性47例，女性26例，年齡(52～72)歲，平均年齡62±5.60歲。健康組：370名體檢正常的健康者，其中男性197名，女性173名，年齡(56～75)歲，平均年齡65±8.90歲。標本來源于體檢中心。

1.2 方法 用日本OLYMPUS5400全自動生化分析儀酶偶聯速率法測定烯醇化酶活性。

1.2.1 緩沖液 40mmoL/L三乙醇胺，PH7.6。取三乙醇胺(含量≥78%，密度1.123～1.133，分子量149.19)6.8ml溶解于1000ml蒸餾水，pH校正至7.6。

1.2.2 底物緩沖液(R1) 稱取氯化鉀、硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、二磷酸腺苷、還原型輔酶溶于40mmol/L三乙醇胺緩沖液中，溶解后校正pH7.6，加丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶，置4℃冰箱保存。(R2)2-磷酸甘油酸溶液：2-磷酸甘油酸稱量后蒸餾水溶解后，置4℃冰箱保存。(試劑R1和試劑R2成分組合配方專利申請號2010102426284)。

1.2.3 用真空管抽取空腹靜脈血3ml，待血液凝固后離心分離血清待測，當天完成檢測。

1.2.4 統計學方法 用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，數據以(±s)表示，比較結果用t檢驗。

2.結果

2.1 臨床73例腦中樞神經系統疾病ENO活性結果15.52±5.27U/L，健康對照組ENO活性結果5.91±1.90U/L，見表1。

表1 腦挫傷及神經系統疾病與健康對照組ENO活性結果(±s)

表1 腦挫傷及神經系統疾病與健康對照組ENO活性結果(±s)

注：與健康對照組比*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組 別 例數 ENO(U/L)健康對照 370 5.91±1.90腦出血 15 14.951 ±5.94＊＊腦梗死 25 15.63 ±5.88＊＊顱內腫瘤 5 16.13±5.60*中樞神經系統感染 12 11.98±2.75＊＊癲癇 16 16.54±4.03＊＊

2.2 如果以大于健康組2S(9.7U/L)為陽性，結果見表2。

表2 73例腦中樞神經系統疾病陽性結果(±s)

表2 73例腦中樞神經系統疾病陽性結果(±s)

組別 例數 陽性例數腦出血 15 11腦梗死 25 21顱內腫瘤 5 3中樞神經系統感染 12 8癲癇16 14

3.討論

1965年科學家首次發現了一種大量存在腦組織中酸性可溶性蛋白質稱為14-3-2蛋白［3］。后來人們發現該蛋白特異性地位于神經元中，并有烯醇化酶(enolase，ENO)活性。烯醇化酶廣泛分布于人體各種組織細胞中是糖酵解過程中的關鍵酶，在正常情況下腦脊液和血清中只含有微量烯醇化酶，但在腦血管意外、腦創傷、腦腫瘤等疾病時NSE會增加，在此情況下血清ENO也會明顯升高。當缺氧、缺血或中毒情況下細胞內的酶釋放出來，并迅速進入細胞間隙，進而進入外周循環，血腦屏障受損程度越高釋放入血的烯醇化酶越多，血清含量越高，這就為檢測血中的烯醇化酶提供了依據［2，4，5］。烯醇化酶在糖代謝過程中催化2-磷酸甘油酸轉變成2-磷酸烯醇式丙酮酸，在丙酮酸激酶的作用下生成丙酮酸，與還原型輔酶、乳酸脫氫酶作用生成乳酸。根據反應原理用酶偶聯速率法檢測烯醇化酶活性。目前國內外實驗方法的研究報道很多，有用放免、電泳、酶標記及發光技術測定ENO的同工酶NSE［6～8］，本實驗特點是測定血清中 ENO 活性，方法簡便快速，特別在對腦神經是否有損傷具有過篩作用。

本研究結果顯示73例腦中樞神經系統疾病患者血清中烯醇化酶活性與健康組比較顯著增高，差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。ENO活性明顯升高其原因可能是在腦出血、腦梗死的情況下腦組織軟化、壞死、周圍組織水腫、神經元細胞膜完整性破壞，大量的烯醇化酶由神經細胞、血細胞內漏出，導致血清中ENO明顯升高，其中16例患者癥狀輕ENO活性升高不明顯。這與腦損傷后神經細胞、腦血管受損程度有關，結果顯示疾病與烯醇化酶活性呈正相關。據報道［9，10］NSE與腦梗死、腦出血臨床關系密切。我們實驗檢測的是烯醇化酶活性，NSE是烯醇化酶的同功酶，實驗病例結果說明烯醇化酶活性與NSE的關系呈正相關。為神經系統疾病診療提供參考同樣有一定意義。ENO活性與疾病的進展及愈后的關系我們將作進一步的實驗探討。

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8 崔俐，林世和，趙節緒，等.神經元特異性烯醇化酶及C-100蛋白對Creutzfeldt-Jakob病診斷價值的研究［J］.臨床神經病學雜志，2003，16(4)：193-195.

9 王義剛，邢永前，鄭華，等.神經元特異性烯醇化酶與急性腦梗死［J］.臨床神經病學雜志，2001，4(2)：74-75.

10 陳小江，邢永前，鄭華，等.腦出血急性期血清神經元特異性烯醇化酶與神經功能缺損的研究［J］.現代康復雜志，2000，4(11)：1666-1337.