無抗生素微生物發酵飼料對仔豬免疫及抗氧化功能的影響

中國農業大學工學院 王娟娟 王順喜 ＊

中國農業大學農業部飼料工業中心 陸文清

北京晟亞育達生物科技有限公司 胡起源

研究表明，飼料經微生物發酵后，營養價值可得到明顯改善，pH明顯降低，富含有益微生物和有機酸。本試驗旨在應用固態發酵技術生產微生物發酵飼料，進行豬的無抗生素飼養，在前期試驗基礎上（陸文清和王翔，2008），進一步檢測發酵飼料對斷奶仔豬的免疫功能及抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及日糧 試驗動物選用 “杜長大”三元雜交仔豬，試驗采用玉米-豆粕型基礎日糧。基礎日糧為對照組；基礎日糧+金霉素為抗生素組；基礎日糧+發酵飼料為發酵料組。參考NRC（1998）豬的營養需要，按照等能量等蛋白質的原則配制基礎日糧，日糧組成及營養水平見表1。發酵飼料為北京晟亞育達生物科技有限公司研制，含有發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum）、釀酒酵母 （Saccharomyces cerevisae）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），預混料由北京德寶群興科貿有限公司提供。

1.2 試驗設計與飼養管理 選取72頭平均體重為（14.17±0.24）kg 斷奶的健康“杜長大”三元雜交仔豬，按飼養試驗要求隨機分為3個處理，每個處理設3個重復（圈），每圈8頭。按體重相近，公母各半，同一圈中每頭仔豬盡可能來自不同母豬的原則，隨機分成9圈。免疫消毒程序按豬場常規方法進行。

1.3 測定指標 試驗開始后，在第7天和第21天時，清晨前腔靜脈采血10 mL。其中，2 mL注入EDTA-K2抗凝瓶中混勻，在日本產F-800型全自動血細胞分析儀進行白細胞數量和分類的測定，淋巴細胞轉化率試驗根據 《全國臨床檢驗操作規程》（1991）執行。余下的血液靜置、離心（3000 r/min，10 min），分離血清，用于免疫球蛋白及抗氧化酶活性的測定。

表1 試驗日糧組成及營養水平

血清免疫球蛋白（IgA、IgG和IgM）采用用免疫透射比濁法測定，用日本島津CL-7200型全自動生化分析儀測定。

血清中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量，按照試劑盒說明書測定（南京建成生物工程研究所）。

1.4 統計分析 數據的統計分析采用SPSS13.0 for Windows（SPSS Inc.，USA）軟件進行方差分析，用Tukey法進行多重比較。P<0.05為差異顯著程度。

2 結果與分析

2.1 斷奶仔豬血液免疫指標 結果見表2。

表2 發酵飼料對斷奶仔豬免疫功能的影響

由表2可知，試驗開始后的第21天與第7天相比，血液中白細胞數量和淋巴細胞轉化率呈上升趨勢。試驗第7天白細胞數量組間無顯著差異（P>0.05），但在試驗期末白細胞數量組間差異顯著（P<0.05），發酵料組顯著高于對照組。單核細胞、嗜酸性粒細胞在試驗第7天還未分化出來，試驗期末二者在血液中的含量組間無顯著差異，此外，在試驗開始后的第7天和21天，白細胞分類的其他成分在各處理組也無顯著差異（P>0.05）。在試驗第7天，淋巴細胞轉化率以發酵料組最高，顯著高于其他兩組（P<0.01）。試驗期末淋巴細胞轉化率以發酵料組最高，抗生素組次之，對照組最低，顯著低于其他兩組（P<0.001）。

由表2可見，隨著試驗期的增加，仔豬血清I-gA、IgG和IgM水平呈上升趨勢。在試驗期末，發酵料組仔豬血清IgA濃度顯著高于其他兩組（P<0.01）。在整個試驗期內，三組仔豬血清IgG和IgM的含量無顯著差異（P>0.05）。

2.2 斷奶仔豬血液抗氧化指標 結果見表3。

表3 發酵飼料對斷奶仔豬抗氧化指標的影響

從表3可以看出，隨著試驗期的增加，發酵料組仔豬血液中 T-AOC、SOD、GSH-Px和 CAT水平均呈上升趨勢，MDA的濃度呈下降趨勢。在試驗期第7天，發酵料組仔豬血液中SOD、GSH-Px和CAT的活性均顯著高于對照組 （P<0.01或P<0.001）。發酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他酶的活性均差異不顯著（P>0.05）。在試驗第7天，仔豬血液的MDA值在各組間差異不顯著（P>0.05）。

在試驗期末，發酵料組仔豬血液中T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT水平均顯著高于對照組（P<0.05或P<0.01或P<0.001），MDA值顯著低于對照組（P<0.05）。發酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他抗氧化指標均差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

3.1 發酵飼料對斷奶仔豬血液免疫指標的影響從試驗結果發現，隨著試驗期的增加，發酵飼料組豬血液中白細胞數量高于對照組，淋巴細胞轉化率也高于抗生素組和對照組。研究表明，日糧添加益生素（含酪酸菌、糞鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳鏈球菌、酵母菌和芽孢桿菌）可以增加血液中白細胞數量（武晶等，2009）。T淋巴細胞是體內主要的免疫活性細胞，在胸腺中發育成熟以后經血液、淋巴循環運行定居于外周免疫器官，發揮免疫細胞的功能，以植物凝集素作為促分裂因子來檢測淋巴細胞的轉化功能，其轉化率的高低常作為衡量機體免疫水平的指標，T淋巴細胞轉化率越高，意味著淋巴細胞在外來因子的刺激下增殖反應越強，機體的細胞免疫能力越強。有研究報道，斷奶仔豬飼料中添加益生菌 （酵母菌和乳酸菌），T淋巴細胞的轉化率提高（朱元招等，2008；胡發軍等，2003）。這表明，發酵飼料中益生菌有刺激免疫的作用，日糧添加發酵飼料能刺激仔豬的非特異性免疫反應，使得豬在疫病應激情況下生長性能良好。

本試驗期第21天時，發酵料組仔豬血清IgA的濃度高于抗生素組和對照組。Erickson和Hubbard（2000）研究表明，乳酸桿菌能夠提高試驗動物模型IgA的產量。Perdigon等（1995）研究報道，小鼠口服嗜酸乳酸桿菌或干酪乳酸桿菌能夠顯著提高分泌IgA漿細胞的數量。由此看來，該發酵飼料可能因其富含發酵乳桿菌，從而促進仔豬機體的體液免疫反應，提高機體抵抗能力，抵抗各種病原微生物感染。

3.2 發酵飼料對斷奶仔豬血液抗氧化指標的影響 大量研究表明，益生菌具有抗氧化活性（張江巍和蕾郁生，2005），本試驗結果顯示，與抗生素添加組相比，日糧添加發酵飼料可顯著提高仔豬血液SOD含量。由此可見，添加富含益生菌發酵飼料的日糧可增強仔豬機體清除自由基的能力，有助于提高仔豬的抗應激能力。

4 結論

從血液中白細胞數量、淋巴細胞轉化率和I-gA的含量看，采食添加發酵飼料的日糧后，能刺激仔豬機體的非特異性免疫反應和體液免疫反應，從而提高豬的抗應激和抗病能力，改善豬的生長性能。

從血液抗氧化指標的測定結果看，采食添加發酵飼料的仔豬機體抗氧化能力增強，利于緩解仔豬斷奶應激。

[1]胡發軍，林映才，鄭黎，等.活性酵母對早期斷奶仔豬生產性能和免疫機能的影響[J].動物營養學報，2003，15（4）：49 ～ 53.

[2]陸文清，王翔.發酵飼料對大腸桿菌感染仔豬的生長性能、腸道菌群和血清生化參數的影響[J].飼料與畜牧，2008，9：28～30.

[3]武晶，趙克斌，王立賢，等.育肥豬日糧中通過營養調控和添加益生素或牛至油替代抗生素的研究[J].動物營養學報，2009，21（5）：645 ～ 651.

[4]張江巍，蕾郁生.乳酸菌抗氧化活性的研究進展 [J].中國乳品工業，2005，33（1），33 ～ 37.

[5]中華人民共和國醫政司.全國臨床檢驗操作規程[M].南京：東南大學出版社，1991.

[6]朱元招，尚秀國，楊立彬，等.乳酸桿菌復合菌劑對仔豬生長和免疫的影響[J].飼料研究，2008，1：1 ～ 3.

[7]Erickson K L，Hubbard N E.Probiotic immunomodulation in health and disease[J].J Nutr，2000，130：403 ～ 409.

[8]NRC.Nutient Requirements of Swine （10th revised edition） [M].Washington，DC：National Academy Rress，1998.

[9]Perdigon G，Alvarez S，Rachid M，et al.Immune system stimulation by probiotics[J].J Dairy Sci，1995，78：1597 ～ 1606.