高效液相色譜法測(cè)定桃紅四物口服液中芍藥苷的含量

安 曄，趙明宏，何 靜

桃紅四物口服液由熟地、川芎、當(dāng)歸、白芍、桃仁、紅花組成，具有活血祛瘀、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效，主治病癥為婦女血行瘀滯，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)前腹痛拒按或經(jīng)行不暢，經(jīng)色紫暗有塊，或月經(jīng)過(guò)多，或延久淋漓不盡，舌紫暗或有瘀斑紫點(diǎn)，脈弦澀或細(xì)澀。白芍為方中主藥之一，其主要活性成分為芍藥苷。為有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定了桃紅四物口服液中芍藥苷的含量。

1 儀器、試劑與試藥

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);Agilent-1100系列四元泵，Agilent Chemstation色譜工作站;VWD檢測(cè)器;TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。芍藥苷(批號(hào):110753-200413，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.1% 磷酸水(14∶86)［1］;流速 1.0mL/min;柱溫為室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇溶解，制成每1mL含0.11 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品色譜圖

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取桃紅四物口服液5mL，置25mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻。用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。色譜圖見(jiàn)圖2。藥苷在0.044～0.179μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 供試品色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn) 取樣品溶液，精密進(jìn)樣10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算得其 RSD=0.4%(n=6)，儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取桃紅四物口服液樣品溶液，室溫放置，于 0、2、4、6、8 h 分別精密進(jìn)樣 10μL，測(cè)定芍藥苷峰面積，計(jì)算得其RSD=0.5%，結(jié)果表明，樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(080622)桃紅四物口服液，按“2.3”項(xiàng)下方法，分別平行制備6份樣品溶液，測(cè)得芍藥苷的平均含量為0.475 mg/mL，RSD=1.6%(n=6)。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取已知芍藥苷含量(0.462 mg/mL)的桃紅四物口服液1mL，精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液(0.11 mg/mL)4.0mL，按照“2.3”項(xiàng)制備樣品供試液6份，按“2.1”項(xiàng)色譜條件分析，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率99.5%，RSD=1.2%。

樣品測(cè)定:取3批樣品，依法制備，精密吸取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行含量測(cè)定，見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/mL)

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制備工藝制備不含白芍的陰性樣品，按樣品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。結(jié)果芍藥苷保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾峰影響。見(jiàn)圖3。

圖3 陰性液色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱定芍藥苷對(duì)照品11.23 mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含芍藥苷11.23μg的對(duì)照品溶液，搖勻。吸取上述對(duì)照品溶液 4、6、8、10、12、14、16μL注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)、芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程:Y=20540 X+232890，r=0.9998。結(jié)果表明，芍

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 芍藥苷對(duì)照品溶液經(jīng)紫外分光光度計(jì)在200～400 nm下掃描，選擇最大吸收波長(zhǎng)230 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 筆者對(duì)甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)、甲醇-水(25∶75)、乙腈-水(12∶88)進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果甲醇-水(25∶75)、乙腈-水(12∶88)兩個(gè)系統(tǒng)拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，分離效果不好，以甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)為流動(dòng)相時(shí)，分離效果好，保留時(shí)間適度，故確定甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)為本方法的流動(dòng)相［2］。

3.3 本文采用HPLC法對(duì)桃紅四物口服液中的芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，靈敏度高，分離度好，干擾少，重現(xiàn)性好，可以作為桃紅四物口服液的質(zhì)量控制方法。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)［S］.北京化學(xué)工業(yè)出版社，2010:96-97.

［2］顧海霞.高效液相色譜法測(cè)定孕康口服液中芍藥苷含量［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12(11):1051.