高效液相色譜法測定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉主藥及雜質的含量

田 力，祝紅杰

哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉組成的復方制劑具有很好的協同抗菌作用，臨床用于治療各種感染性疾病。目前，醫藥市場中存在多個生產哌拉西林鈉他唑巴坦鈉的廠家，其產品在癥狀緩解時間、治愈率等方面均存在一定的差別。本文考察了3個企業生產的注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉的主藥和雜質含量。

1 材料

1.1 儀器 島津LC-2010CHT系列高效液相色譜儀(日本島津公司);色譜工作站465-06043LC solution single verl.22(中文工作站，日本島津公司);色譜柱Hypersil BDS-C18(250mm×4.6mm，5μm，大連依利特有限公司);十萬分之一分析天平(中德合資SARTORIOUS公司);DelTA320PH計(梅特勒-托利上海有限公司)。

1.2 試藥 哌拉西林鈉標準品(93.5%，中國藥品生物制品檢定所，批號:130419);他唑巴坦鈉標準品(99.1%，中國藥品生物制品檢定所，批號:130511);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4.5 g/支，美國惠氏制藥有限公司，批號:0907094、0908048、0908013);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(1.125 g/支，華北制藥集團，批號:20100202、20091006、20100204);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(2.25 g/支，珠海聯邦制藥有限公司，批號:00108301、00108305、00108309);甲醇(色譜純，美國TEDIA公司，批號:1010910);蒸餾水(自制去離子重蒸餾水，經0.22μm微孔濾膜濾過);磷酸(天津市化學試劑六廠，批號:840404);四丁基氫氧化銨水溶液(10%，國藥集團化學試劑有限公司，批號:20101111)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil BDS-C18(250mm ×4.6mm，5μm);流動相為甲醇∶B 相溶液(50/50，V/V);流速:0.8mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:220 nm;進樣量:1μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 流動相中B相溶液的配制［1］取10%四丁基氫氧化銨水溶液14mL，加入800mL水，用磷酸調節pH值至3.5，即得。

2.2.2 標準品儲備液的配制 分別精密稱定哌拉西林標準品171 mg及他唑巴坦標準品20.2 mg于10mL容量瓶中，以50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋至刻度，得含16 mg/mL的哌拉西林及2 mg/mL的他唑巴坦標準品儲備溶液。

2.3 專屬性考察 分別取哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉的標準品儲備溶液及兩種標準品的混合溶液 進樣，進樣量1μL，色譜圖見圖1～圖3。

圖1 他唑巴坦鈉色譜圖

圖2 哌拉西林鈉色譜圖

圖3 標準品混合溶液色譜圖

哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉保留時間分別為9.566min和4.561min，兩峰均與雜質峰分離良好，無干擾。

2.4 線性關系考察 分別精密量取標準品儲備溶液適量，以50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋至哌拉西林濃度為 2、4、8、10、12、16 mg/mL 及他唑巴坦濃度為 0.25、0.5、1、1.25、1.5、2 mg/mL 的溶液。分別精密吸取各濃度標準液1μL注入色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(A)對濃度(C)進行線性回歸，得哌拉西林鈉及他唑巴坦鈉的線性回歸方程分別為:A=2062830.8C+19400(r=1.0000);A=1272907.1C-9644.8(r=1.0000)。哌拉西林鈉在2～16 mg/mL、他唑巴坦鈉在0.25～2 mg/mL范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度考察 精密量取8 mg/mL的哌拉西林及1 mg/mL的他唑巴坦標準品溶液，連續進樣5次，記錄峰面積，計算RSD值。結果，哌拉西林及他唑巴坦的RSD分別為1.4%、0.2%。

2.6 樣品的主藥和雜質含量測定 分別取不同廠家各批號的樣品，用50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋成含哌拉西林鈉10 mg/mL、他唑巴坦鈉1.25 mg/mL的樣品溶液。分別精密量取樣品溶液1μL注入色譜儀，記錄峰面積，計算哌拉西林、他唑巴坦及雜質的含量。哌拉西林和他唑巴坦的含量數據結果見表1，雜質含量數據結果見表2。

表1 樣品中主藥含量測定結果(mg/mL，n=6)

表2 樣品中雜質含量測定結果(mg/mL，n=6)

3 討論

本實驗結果表明，3個廠家(各3批)樣品的哌拉西林平均含量分別為標示量的102.8%、96.4%、103.1%，他唑巴坦含量分別為標示量的99.8%、93.3%、98.1%，均符合藥典［2］規 定(90%～110%);雜質含量分別為1.72%、2.74%、1.85%，符合藥典［2］規定(＜4%)。

實驗中為了便于計算，只統計了峰面積在10000以上的雜質峰，保留時間分別為 3.65、4.218、5.414、6.415、7.532min，聯邦制藥的樣品比其他廠家多1個雜質峰，保留時間為3.874min，推測是該廠家制劑的特殊輔料。影響藥物療效的常見因素有主藥的多晶型或手性、主藥的化學純度及其穩定性與輔料等。輔料可以通過直接影響藥物性質而增加或降低藥物的活性，也可以間接地通過輔料自身的性質而影響藥效的發揮。本實驗僅對主藥的化學純度和雜質的含量進行了考察，3個廠家之間未見明顯差別，推測其不是影響臨床療效的因素。其他影響因素尚需進一步研究考察。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.

［2］周為民，李健和，彭六保，等.高效液相色譜法測定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)含量及有關物質［J］.中國當代醫藥，2009，16(9):7-10.