美卡素對急性腦缺血再灌注大鼠海馬CA1區PPARγ的影響

馮 濤

河南南陽醫專第一附屬醫院神經內科 南陽 473058

腦缺血再灌注對改善缺血半暗帶區域腦組織的血液供應、神經元功能的恢復具有重要意義。但缺血再灌注過程中也產生大量神經毒性因子，引起明顯的缺血再灌注損傷［1］。過氧化物酶體增殖劑激活受體γ（PPARγ）在機體廣泛分布，介導多種生物效應。現已研究表明PPARγ與糖代謝的調節、腦梗死及動脈粥樣硬化有關，且動脈粥樣硬化和高血糖都是腦梗死的獨立危險因素。對PPARγ的研究，為腦梗死的防治提供了一個新方向［2］。美卡素（替米沙坦）是血管緊張素受體拮抗劑，在預防和治療高血壓、動脈粥樣硬化性心血管疾病方面有重要作用，在常規劑量下能部分激活PPARγ，繼而產生代謝調節作用和腦保護作用。

本實驗采用大鼠大腦中動脈缺血再灌注（MCAO）模型，觀察大鼠急性腦缺血再灌注后海馬CA1區PPARγ表達情況、神經行為學改變及美卡素干預后的變化，為美卡素應用于臨床治療缺血性腦血管病提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料 鄭州大學實驗動物中心提供SD大鼠，德國Lecia顯微照像系統采集圖像，美卡素由德國勃林格殷格翰公司研制生產。PPARγ抗體由北京中杉生物工程公司提供。

1.1.1 動物分組：選取72只雄性SD大鼠，體質量（220±20）g，隨機分為4組：A組（正常組）、B組（假手術組）、C組（模型組）、D組（干預組）。每組18例，每組又被分為24h、72h、7d時間點三個亞組，每個亞組6只。

1.1.2 MCAO模型制備：采用改良Zea Longa線栓法制備：10%水合氯醛腹腔注射麻醉（350mg／kg），分離左側頸總動脈（CCA）、頸內動脈（ICA）、頸外動脈（ECA），在頸外動脈上剪一 “v”形小口，插入線栓，固定線栓至ECA，順勢插入線栓，緩慢向ICA入顱方向推進，約18～20mm有阻力時停止，將線和ECA一同結扎，縫合皮膚，2h后進行再灌注。

1.1.3 動物神經行為學評分：參照Zea Longa 5分制標準進行評分：0分，無神經行為改變；1分：前肢呈屈曲或者半屈曲狀；2分：單肢出現運動障礙，可見畫圈運動；3分：行走時可見向一側傾斜或摔倒；4分：意識不清或死亡。選擇1～3分動物進行實驗觀察。

1.1.4 動物處置：A組為正常大鼠；B組切開皮膚，分離左側頸總動脈后縫合皮膚；C組制作大鼠 MCAO模型，在MCAO后2h給予0.9%氯化鈉液2mL灌胃；D組在MCAO后2h給予美卡素［1.5mg／（kg·d）］灌胃。各時間點進行神經行為學評分后處死，灌注固定后取腦、固定、制作腦部冠狀石蠟切片。免疫組化染色（SP法）測定CA1區PPARγ的表達變化。

2 結果

2.1 神經行為學評分 A、B組無明顯神經行為學改變，C、D組神經行為學評分均明顯增高，D組神經功能缺損較C組降低 （P＜0.05），結果見表1。

表1 4組大鼠神經行為學改變評分比較 （）

表1 4組大鼠神經行為學改變評分比較 （）

注：與C組相比，▲P＜0.05

組別24h 72h 7d A組000 B組 0 0 0 C組 2.48±0.51 2.46±0.58 1.97±0.67 D組 1.58±0.52▲ 1.48±0.53▲ 1.17±0.48▲

2.2 海馬CA1區PPARγ的表達變化 4組大鼠海馬CA1區PPARγ均有表達，A、B組PPARγ表達變化不明顯（P＞0.05），C、D組PPARγ24h表達明顯，72h明顯下降，7d下降趨于平穩，D組PPARγ表達明顯高于C組各時間點（P＜0.05），結果見表2。

表2 4組海馬CA1區PPARγ表達變化比較 （）

表2 4組海馬CA1區PPARγ表達變化比較 （）

注：與 A、B組相比，＃P＜0.05；與C組相比，※P＜0.05

A組136.27±8.08130.69±2.78142.08±4.05 B組 130.43±6.37140.39±2.45142.72±2.36 C組 103.45±6.44＃ 96.87±8.24＃ 110.14±8.73＃D組 120.11±4.35＃※114.13±6.07＃※128.93±8.47＃※

3 討論

急性缺血性腦血管病是多種原因導致腦全部或局部血液循環障礙、組織缺血缺氧，出現局灶或全腦功能受損癥狀。腦梗死灶在缺血缺氧幾分鐘后就形成，如果沒有血液的再灌注及良好的側枝循環的建立，梗死灶逐漸向缺血半暗帶區（Ischemic Penumbra，IP）擴展，最終與IP完全融合。腦缺血后早期恢復血流的再灌注顯得十分重要。過氧化物酶體增殖劑激活受體γ（PPARγ）是基因轉錄中傳遞過氧化物酶體增長因子效應的一類細胞核受體，在調節血糖穩定，抑制炎癥因子及抗動脈粥樣硬化等有重要作用。腦缺血再灌注后，小膠質細胞的激活、誘導型一氧化氮的過度表達等誘導的免疫炎癥反應是造成再灌注損傷的主要原因之一［3］。PPARγ激動劑可抑制JAK－STAT、NF－κB等炎癥信號通路來抑制炎癥介質的生產和釋放，起到抑制炎癥反應的作用，從而減輕腦缺血再灌注損傷。

現研究表明美卡素（替米沙坦）不但是ARB類藥物，還是在常規治療劑量下具有激動PPARγ的作用［4］。替米沙坦是選擇性的PPARγ激動劑與吡格列酮等傳統的PPARγ激動劑相比，替米沙坦克服了傳統PPARγ激動劑可引起水鈉潴留，增加體重等不良反應。對于合并高血壓、糖尿病、心功能不全等的腦血管疾病，應用替米沙坦治療具有有廣闊的前景。本實驗發現，應用美卡素干預大鼠急性腦缺血再灌注后，海馬CA1區PPARγ表達明顯增多，大鼠神經行為學評分降低，起到腦保護的作用，也為美卡素應用于臨床治療缺血性腦血管病提供理論依據。

［1］Pulsinelli WA，Jacewicz M，Levy DE，et al.Ischemic brain injury and the therapeutic window［J］.Ann NY Acad Sci，1997，835（19）：187－193.

［2］郭金濤，高甜，宋穎飛.PPARγ激動劑對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后IL－1β、IL－6和 TNF－α含量的影響［J］.中國實用神經病雜志，2008，11（2）：20－22.

［3］Wang JY，Shum AY，Chao C.Production of macrophagein flammatory protein－2following hypoxia／re oxygen nationinglial cells［J］.Glia，2000，32：155－164.

［4］Diep QN，El Mabrouk M，Cohn JS，et al.Structure，endothelial function，cell growth，and inflammation in blood Vessel of angiotensin II－infused rats：role of peroxisome proliferator activated receptor gamma［J］.Circulation，2002，105（19）：2296－2302.