離子色譜法測定牛奶中硫氰酸根離子

帕提曼·卡吾力 古麗曼·木哈買提拜 賈新建

硫氰酸鈉（NaSCN）是白色斜方晶系結晶或粉末，毒害品。它的毒性主要由其在體內釋放的氰根離子在體內能很快與細胞素氧化酶中的三價鐵離子結合，抑制該酶活性，使組織不能利用氧而產生中毒。原料乳或者奶粉中摻入硫氰酸鈉后可有效的抑菌、保鮮，延長產品的保質期，故不法奶戶用這點將硫氰酸鈉摻入原料乳或者奶粉中，損害了消費者的健康。隨著衛生部在食品安全方面的工作力度逐漸加大，2008年12月12日衛生部發布的《食品中可能違法添加的非使用物質和易濫用的食品添加劑名單（第一批）》中明確規定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質。國家為打擊違法添加非使用物質和濫用食品添加劑專項整治中，也制定有檢測方法，本方法在使用過程中，結果準確，重復性好，檢測限低，適用于牛奶中硫氰酸根的快速測定，保障了對硫氰酸根的離子在牛奶中的殘留監控。

1 材料與方法

1.1 儀器

離子色譜儀：配備淋洗液發生器和電導檢測器；

離心機：冷凍離心機。

1.2 試劑與材料

試驗用水均為超純水，乙氰（色譜純），固相萃取小柱：ONGUAR RP 柱（2.5 ml），或相當者（如 C18），使用前依次用5 ml甲醇和10 ml水活化。硫氰酸標準品：北京化工廠生產。

硫氰酸標準儲備液：將硫氰酸標準品于80℃烘箱內烘干2 h。準確稱取干燥后的硫氰化鉀1.6732 g于1000 ml容量瓶中，定容，混勻。即得1000 mg/kg硫氰根標準儲備液。

硫氰酸標準中間液：硫氰酸標準儲備液1 ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10mg/l。

硫氰酸標準使用液：移取 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml硫氰酸標準中間液、用水定容于10 ml容量瓶中，濃度分別為 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/l。

樣品處理與測定：取牛乳樣品4 ml，加入5 ml乙氰沉淀蛋白，取清液 1 ml，加水稀釋至 10 ml，0.22 μm尼龍膜過濾后，過ONGUAR RP柱，即可進樣。

1.3 離子色譜參考條件

色譜柱：強親水性陰離子交換柱。IONPACAS16，4.0 mm×250 mm 分析柱；IONPAC AG16，4.0 mm×50 mm保護柱；或其他相當者。

流動相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在線發生器在線產生。KOH梯度程序如下：

表1 流動相梯度

流速：1.0 ml/min；抑制器：ASRS-300型抑制器，4 mm；抑制器抑制模式：外接水模式，抑制電流175 mA；柱溫：30 ℃；進樣體積：100 μl。

1.4 標準曲線的繪制

按2.4建立的儀器條件，取濃度范圍在0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/ml的硫氰酸根標準溶液各加 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，用水定容于10 ml容量瓶中，上機測定，峰面積是：0.0478、0.1021、0.2672、0.5673、1.1523，所得標準曲線，方程分別為Y=0.6199-0.0092X，相關系數r=0.9999。

1.5 回收率試驗

在2.4項建立儀器條件下對添加了0.25、0.5、1.25 mg/kg硫氰酸的牛奶進行了回收率的測定試驗和批內相對標準偏差，重復測定3次，計算批間相對偏差，結果見表2。

表2 牛奶中硫氰酸不同添加濃度的回收率測定結果

圖1 硫氰酸根標準曲線

圖2 硫氰酸根標準品圖譜

圖3 標準添加樣1圖譜

圖4 標準添加樣2圖譜

圖5 牛奶樣品平行樣1圖譜

圖6 牛奶樣品平行樣2圖譜

1.6 樣品分析與結果（見表3）

表3 樣品測定結果

2 結果計算

X=(C-C0)×9×10/4

式中：X——液態牛奶中硫氰酸的含量(μg/ml)；

C——由標準曲線得到試樣溶液中硫氰酸的濃度(μg/ml)；

9——液態奶的體積與乙腈體積之和(ml)；

4——液態奶的體積(ml)；

10——稀釋倍數；

3 精密度

在重復性條件下，獲得的硫氰酸根的獨立測試結果能夠滿足標準要求。

4 討論

4.1 在測定樣品前，如果實驗室溫度較低，應等待柱溫升至30℃后再開泵。

4.2 配制好的樣品和流動相使用前0.45 μm或0.2 μm的水系濾膜過濾，可以獲得相對穩定的回收率。

4.3 方法中“只加水”淋洗液技術，能夠自動產生需要的淋洗液濃度，替代了傳統人工配制的方式，克服了因手動配制帶來的濃度不準確，操作繁復缺點。