膽鹽對附紅細胞體活力影響試驗*

龔大春,錢 微,史小娜

附紅細胞體病是由附紅細胞體寄生于人、動物的紅細胞表面、血漿及骨髓內所引起的以發熱、貧血、黃疸為主要臨床特征的人獸共患傳染病[1]。附紅細胞體病的出現在我國雖然只有30年的歷史[2]。但近年附紅細胞體病在人、動物呈逐年上升的趨勢,而其傳播方式還不十分清楚,據報道[3]附紅細胞體可能經吸血昆蟲、節肢動物、血源、垂直和接觸等方式傳播,至于經消化道傳播研究較少,消化道的主要活性物質膽鹽對附紅細胞體的影響尚未見報道,為此開展了本試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 選擇確診患附紅細胞體病,無并發癥且未用任何藥物治療,鏡檢RBC的附紅細胞體感染率在75%以上的病豬,無菌靜脈采血,按1∶10加入3.8%的檸檬酸鈉抗凝劑,混勻分裝置于4℃冰箱中暫存備用。

1.1.2 主要試劑儀器 豬膽鹽,規格25g,北京雙旋微生物制品廠;pH計(PB-10),電子天平,北京賽多利斯科學儀器有限公司;顯微鏡,恒溫培養箱,稱量瓶等。

1.2 方法

1.2.1 膽鹽對附紅細胞體活力的影響 電子天平稱取適量的豬膽鹽用滅菌生理鹽水配成0.003%、0.03%、0.1%、0.2%、0.3%、3%豬膽鹽溶液。分別取3 mL上述6種溶液于6個潔凈的稱量瓶中,再在每瓶中加 1 mL的附紅細胞體菌種混勻,置于37℃培養箱中,連續觀測6 h,每1 h觀測1次,在24 h時最后觀察1次,同時設生理鹽水對照。

1.2.2 附紅細胞體活力的判定標準 其活性按下列標準判定,附紅細胞體絕大多數吸附在紅細胞上,少數游離在血漿中的附紅細胞體前沖后撞的記為“5+”,在血漿中呈靈活自如的上下、左右、前后閃動,旋轉,振擺的記為“4+”,旋轉、振擺和閃動較弱的記為“3+”,僅能見到滾動或擺動的記為“2+”,活動很微弱的記為“+”,未發現附紅細胞體活動的記為“-”。

2 結 果

膽鹽對附紅細胞體活力的影響見表1。

表1 膽鹽在不同時間對附紅細胞體活力的影響Table 1 The effect of cholic acid sodium salt on Eperythrozoon vigor

表1顯示,3%的膽鹽在2 h內能顯著刺激附紅細胞體活力,2 h后活力下降,至6 h時活力喪失。0.3%和0.2%的膽鹽在4 h內刺激附紅細胞體活力,4 h后活力下降,到24 h時其活力微弱。0.1%的膽鹽保持24 h附紅細胞體活力,其中在3-4 h活力增強。0.03%和0.1%膽鹽對活力的影響基本相同;0.003%的膽鹽在3 h內對其活力無影響,3 h后其活力減弱。

3 討 論

試驗結果顯示,0.1%的膽鹽能保持附紅細胞體的活力,且在作用3-4 h時其活力增強;高濃度的膽鹽短時間作用可以刺激附紅細胞體的活力,長時間作用可以致死附紅細胞體;低濃度的膽鹽短時間作用對附紅細胞體的活力無影響,長時間作用能抑制附紅細胞體的活力,但不能將附紅細胞體致死;低于0.1%的膽鹽長時間作用后能抑制附紅細胞體的活力。

據文獻報道[4-7]人體小腸環境膽鹽的濃度為0.03%～0.3%,而關于動物小腸環境膽鹽濃度還未見相關報道。因此本試驗設計的膽鹽濃度范圍比較寬廣,為0.003%～3%。從理論上分析,人和動物十二指腸膽鹽濃度不會相差太遠,本試驗膽鹽的濃度范圍應該覆蓋了動物十二指腸膽鹽的濃度。據文獻報道[8]膽鹽對細菌有抑制作用,而對附紅細胞體的影響未見報道。本試驗顯示,膽鹽濃度在0.03～0.3%范圍內,對附紅細胞體的活力有不同程度的影響,在0.1%時能保持附紅細胞體的活力,在其它濃度對附紅細胞體活力有不同程度的抑制作用。

膽汁是由水、無機鹽、膽汁酸、膽固醇、膽色素、脂肪酸、卵磷脂等組成。在動物體內膽鹽是由膽汁酸與甘氨酸或牛磺酸結合形成的,市售膽鹽是膽汁酸的鈉鹽或鉀鹽。膽鹽的主要抑菌物質是牛磺膽酸、甘氨酸和去氧膽酸等,對革蘭陽性桿菌有很強的抑制能力,而對革蘭陰性桿菌僅有輕微的抑制能力。膽鹽的抑菌機理主要是使細菌的細胞膜損壞或者菌體裂解,對某些細菌有溶解作用,而對附紅細胞體的作用機理尚需進一步探討。

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