蓮房花青素誘導人肝癌細胞SMMC-7721凋亡的研究

梁慧敏 時小燕 隨裕敏 朱 斌

原花青素是一種廣泛存在于植物內的酚類聚合物，在葡萄皮和籽內含量最高，有很強的生物學活性及藥理作用［1］。有報道，原花青素對乳腺癌、肺癌及白血病等腫瘤有顯著的抑制作用［2］。而對蓮房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus，LSPC)的研究較少。目前發現LSPC有抗腫瘤作用，為進一步探討LSPC抑制細胞增殖的機制，本研究探討了LSPC是否能誘導人肝癌細胞株SMMC-7721細胞凋亡，以期為臨床應用提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 材料、化學試劑和儀器 人肝癌細胞 SMMC-7721購自中國醫學科學院基礎醫學研究所;胎牛血清購于Gibco公司;RPMI 1640購于Gibco公司;LSPC由本實驗室自制，純度＞98%為棕褐色粉末;DMSO、MTT均購自Promega公司;其他試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 MTT實驗 選擇對數生長期SMMC-7721細胞，將濃度為1×105/ml細胞接種于96孔板(200μl/孔)。24 h后換含不同濃度(0.025，0.25，2.5，25，250 μg/ml)LSPC 培養液200 μl，分別于24，48 h后棄上清，加5 mg/ml MTT液20 μl/孔，4 h后棄上清，加DMSO 150μl/孔，振搖待藍色晶體溶解，測定570 nm吸光值(A值)，空白孔調零。設陰性孔(加200 μl含細胞完全培養基)和空白孔(只加200μl完全培養基)，每組濃度設3個平行孔，取均值。按下列公式計算抑制率:

細胞增殖抑制率/%=(對照組A值-處理組A值)/(對照組A值-空白組A值)×100%。

2 結果

不同濃度LSPC對SMMC-7721細胞增殖的影響 由圖1可知，LSPC作用24 h，低濃度組(0.025μg/ml)細胞增殖抑制率與對照組相比，差異無統計學意義;中高濃度(0.25～250 μg/ml)組顯著高于對照組;LSPC作用48 h，試驗組細胞抑制率均顯著高于對照組。

圖1 LSPC對肝癌SMMC-7721細胞增殖抑制率的影響

3 討論

研究發現，一些中藥復方或單味藥有效成分有誘導腫瘤細胞凋亡作用［3］。原花青素是植物中多酚類化合物，也是一種氧自由基清除劑和脂質過氧化抑制劑［4，5］。蓮房中含蛋白質、脂肪、糖、維生素 B2及微量蓮子堿等，有“化瘀止血”功效。

本文用MTT法觀察LSPC對SMMC-7221細胞增殖的抑制作用，發現LSPC在0.25～250μg/ml對SMMC-7221細胞凋亡有顯著的抑制(P＜0.01)，且細胞抑制率呈濃度、時間依賴，與文獻報道LSPC的作用類似［6］。至于LSPC誘導SMMC-7721細胞凋亡的具體過程，及哪些分子參與，還需進一步證實。本研究發現了LSPC能抑制人肝癌細胞SMMC-7721生長并誘導其凋亡，為傳統中藥在腫瘤治療研究和應用開拓新思路。

［1］ Bagchi D.Oxygen free radical scavenging abilities of Vitamins C and E，and a grape seed Proanthocyanidin extract in vitro.Res commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95(21):179-189．

［2］ Lotito SB，Actis Goretta L.Influence of oligomer chain length on the antioxidant activity of procyanidins.Biochem Biophys Res Commun，2000，276(3):945-951．

［3］ Zhou ZH，Song M Z，Yu E X，et al.Progress on apoptosis induction of cancer ceils by chinese traditional herbs.Foreign Med Sci-Tradit chin Med，1998，20(3):3-5．

［4］ Packer L，Rimbach G，Virgili F.Antioxidant activity and biologic properties of a procyanidin-rich extract from pine(Pinus maritima)bark，pycnogenol.Fre Rad Biol Med，1999，27(56):704-724．

［5］ Sun Z G，Zhao WZ，IU Y，et al.Inhibitory effects of proanthocyanidins from the seed of Vitis vinifera on forming of micronucleus of mouse bone marrow polysomic red blood cells induced by cyclophosphamide and study of its mechanism.Lisgizhen Med MaterⅣd Res，2000，11(5):386-387．

［6］ Meeran SM，Katiyar SK.Cell cycle control asa basisfor cancer chemoprevention through dietary agents.Front Biosci，2008，13:2191-2203.