肺癌患者血清血管內皮生長因子水平與預后及血小板的相關性研究

黃 謙,姜正華,朱慕云,桑慧穎,卞京文,李昌喜

(江蘇省蘇北人民醫院呼吸內科,江蘇揚州,225001)

肺癌是惡性腫瘤死亡的最常見原因,大多數 患者預后不良。實體瘤的發生發展關鍵依賴提供養分的功能血管,如果缺乏,腫瘤就無法實現生長和轉移。肺癌和其他實體瘤一樣,其生長和轉移離不開新生血管生成。血管內皮生長因子是1989年由Ferrara等發現并命名的一種糖蛋白,為血管生成的主要調控因子,通過與內皮細胞表面上的特異性受體結合而發揮其生物學活性。近年來的許多研究證實,血管內皮生長因子(VEGF)與肺癌新生血管和淋巴管的生長以及生物學行為密切相關[1]。本研究旨在探討肺癌患者血清VEGF水平與肺癌患者預后及血小板的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2005年5月～2006年4月在本院呼吸內科收治的診斷為原發性肺癌的患者(均經組織學或細胞學確診,并排除嚴重心、肝、腎、血栓性疾病、糖尿病、風濕性關節炎、慢性阻塞性肺疾病、感染性疾病、貧血、長期服用激素及1月內仍手術史、創傷史)及健康體檢者。肺癌組共60例,其中男46 例,女 14 例;年齡34～ 82歲,平均 65.3 歲 ;所有患者同時進行胸部CT、頭顱CT、放射性骨掃描、腹部B超等檢查,其中腺癌25例,鱗癌30例,小細胞癌5例;P-TNM分期(國際 UICC1997分期標準),Ⅰ+Ⅱ期13例,Ⅲ期32例,Ⅳ期15例。所有患者進行隨訪并記錄其生存期。健康體檢者共20例,其中男性15例,女性 5例,年齡22～80歲,平均年齡52.1歲。所有樣本采血前2周內未應用任何止血或抗凝藥物治療。

1.2 血清標本的收集與保存

肺癌患者(化療及手術前)及健康體檢者均為清晨空腹采用非抗凝管抽取外周靜脈血3 mL,室溫放置30～60 min后,5 000 r/min離心15 min后,分離血清分裝后-20℃低溫冷凍備用。同時采全血進行常規血小板計數。

1.3 檢測方法

人VEGFELISA試劑盒購于美國。檢測方法按試劑盒說明書進行,用酶標儀測定結果,VEGF檢測波長為450 nm。

2 結 果

2.1 肺癌患者和健康體檢者血清VEGF水平的比較

肺癌組60例,血清VEGF水平為(296.95±75.84)pg/mL,明顯高于對照組的(164.01±75.59)pg/mL統計學上有顯著性差異(P<0.001)。

2.2 肺癌患者血清VEGF水平與病理、臨床分期的關系(表1)

肺癌組中,不同病理類型及不同TNM分期的患者血清VEGF水平之間無明顯差異。

表1 肺癌患者血清VEGF水平與病理、臨床分期的關系

2.3 肺癌患者血清VEGF水平與患者生存期的相關性(圖1)

肺癌組60例患者均獲隨訪,隨訪率100%。生存期為確診日至患者死亡或末次隨訪的時間(2008年2月1日)。通過隨訪肺癌患者生存期(253.68±165.57)d,(35～753)d,中位生存期為211d,與肺癌患者血清VEGF水平呈負相關(r=-0.38,P<0.01)。

圖1 血清VEGF與生存期的相關性

2.4 肺癌組中血清VEGF水平與PLT的相關性(圖2)

肺癌組中 VEGF水平為(296.95±61.01)pg/mL,PLT水平為(244.45±71.29)×109/L(與對照組PLT無統計學差異),經相關分析,兩者存在正相關(r=0.26,P<0.05)。

3 討 論

圖2 血清VEGF與PLT的相關性

VEGF是由定位于6號染色體(6P21)編碼的一種45 KDa球蛋白,VEGF除內皮細胞產生外,還可由其他幾種細胞例如巨噬細胞、基底細胞、視網膜表皮細胞、惡性腫瘤細胞產生。現有研究表明:VEGF是作用最強、特異性最高的血管生成調控因子,它可與血管內皮細胞特異性地結合,能增強血管通透性,刺激血管內皮細胞的增殖,并促進血管內物質的滲出,抑制內皮細胞凋亡,激活蛋白酶致使細胞外基質降解,有利于新生血管生長及延伸,為內皮細胞的遷移和腫瘤細胞的轉移提供形態學基礎[2-4]。VEGF可通過以下機制調節腫瘤的血管形成和發展:①通過缺氧增加VEGF的轉錄,繼而刺激腫瘤組織分泌生長因子;②激活生長因子受體;③增加MMPs的產生,從而使血管通透性增加;④促使內皮細胞增殖、遷移,并誘導血管生成;⑤形成新的毛細血管網[5-6]。

Mattern等在1996年首次報道VEGF在非小細胞肺癌中的表達,現有研究證實在非小細胞肺癌患者中有高水平的VEGF的表達[7-8],另外在小細胞肺癌患者中高水平的VEGF也有報道[9]。本研究結果顯示,肺癌患者血清VEGF水平顯著高于對照組,也證實了肺癌患者中VEGF呈高表達,說明肺癌細胞確實能分泌大量的VEGF,促進腫瘤血管的生成,為腫瘤細胞的生長、侵襲及轉移提供條件,這與以上報道是一致的

本研究結果顯示,肺癌組患者血清VEGF水平與患者的TNM分期之間無明顯關系。相關研究[10-11]報道肺癌患者VEGF水平與肺癌 TNM分期密切相關,表明VEGF與腫瘤的浸潤轉移有關。而在其他的一些研究中表明二者之間無關系[12-13]。另外,我們的研究結果還顯示肺癌患者血清VEGF水平與肺癌的病理類型無關,這說明肺癌的不同病理類型具有同樣或相似的分泌VEGF的特性,這與國內外的報道是一致的[14-15]。

肺癌的病理及臨床TNM分期與肺癌的預后密切相關,但是它們并不能完全準確地預測患者的預后,需要一些新的指標。在一些關于非小細胞肺癌研究中表明VEGF過高表達與腫瘤的進展和較短的生存期有關[16-18]。作者在研究中觀察到肺癌患者血清VEGF水平與其生存期之間有顯著的負相關,這些均說明血清VEGF水平能夠反映肺癌的惡性程度,可作為手術前或化療前判斷患者預后的重要指標。

肺癌患者血清VEGF含量增加的機制尚不清楚,相關研究表明和外周血白細胞數、中性白細胞數、單核細胞數及血小板數密切相關[19-20]。有研究[21-22]表明VEGF也可以從外周血細胞中被釋放出,尤其是血小板。國外的一些研究[23-24]也顯示腫瘤患者血清VEGF水平與血小板及淋巴細胞計數相關,提示血小板是VEGF的重要儲存和運輸者。Choi等[25]研究表明非小細胞肺癌患者淋巴細胞和血小板中包含高水平的VEGF,所以在肺癌患者中血清高水平的VEGF與外周血細胞釋放有關。在作者的研究中,肺癌患者血清VEGF水平與血小板之間有顯著的正相關,這與孔德勇等[26]研究是一致的,表明在腫瘤血管形成過程中,VEGF與血小板之間可能存在相互作用,在肺癌患者中血小板可能是VEGF的一個重要運輸者,血小板可能在腫瘤血管的形成過程中通過釋放血管生成因子(例如VEGF)扮演一個重要的角色。我們認為肺癌患者血清VEGF增高機制可能為①肺癌組織中VEGF水平增高,癌細胞分泌的VEGF被單核細胞和血小板儲存,并隨穿過血管壁的細胞進入血循環釋放有關;②VEGF可導致血管通透性增加,從而加快VEGF的擴散,導致外周血中VEGF含量增加;③腫瘤細胞本身可分泌相關因子,通過血小板聚集,促進血小板分泌VEGF[27-28]。以上給我們帶來思考,臨床上適當的抗血小板治療是否能抑制肺癌患者血清VEGF的水平,從而控制肺癌血管的生成,改善患者的預后?臨床上某些抗腫瘤藥物(如吉西他濱)是否具有間接的抑制肺癌血管生成,控制肺癌轉移的作用?這些問題有待于進一步的研究。

綜上所述,肺癌患者血清VEGF異常增高,且與肺癌患者的生存期成負相關,血清VEGF可作為評估肺癌患者預后的一個重要指標。另外,肺癌患者血清VEGF水平與PLT水平呈正相關,提示血小板在腫瘤血管形成的過程中起重要的作用。

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