肺癌患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與預(yù)后及血小板的相關(guān)性研究

黃 謙,姜正華,朱慕云,桑慧穎,卞京文,李昌喜

(江蘇省蘇北人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科,江蘇揚(yáng)州,225001)

肺癌是惡性腫瘤死亡的最常見原因,大多數(shù) 患者預(yù)后不良。實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵依賴提供養(yǎng)分的功能血管,如果缺乏,腫瘤就無法實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。肺癌和其他實(shí)體瘤一樣,其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移離不開新生血管生成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是1989年由Ferrara等發(fā)現(xiàn)并命名的一種糖蛋白,為血管生成的主要調(diào)控因子,通過與內(nèi)皮細(xì)胞表面上的特異性受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)活性。近年來的許多研究證實(shí),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與肺癌新生血管和淋巴管的生長(zhǎng)以及生物學(xué)行為密切相關(guān)[1]。本研究旨在探討肺癌患者血清VEGF水平與肺癌患者預(yù)后及血小板的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

2005年5月～2006年4月在本院呼吸內(nèi)科收治的診斷為原發(fā)性肺癌的患者(均經(jīng)組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診,并排除嚴(yán)重心、肝、腎、血栓性疾病、糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性阻塞性肺疾病、感染性疾病、貧血、長(zhǎng)期服用激素及1月內(nèi)仍手術(shù)史、創(chuàng)傷史)及健康體檢者。肺癌組共60例,其中男46 例,女 14 例;年齡34～ 82歲,平均 65.3 歲 ;所有患者同時(shí)進(jìn)行胸部CT、頭顱CT、放射性骨掃描、腹部B超等檢查,其中腺癌25例,鱗癌30例,小細(xì)胞癌5例;P-TNM分期(國(guó)際 UICC1997分期標(biāo)準(zhǔn)),Ⅰ+Ⅱ期13例,Ⅲ期32例,Ⅳ期15例。所有患者進(jìn)行隨訪并記錄其生存期。健康體檢者共20例,其中男性15例,女性 5例,年齡22～80歲,平均年齡52.1歲。所有樣本采血前2周內(nèi)未應(yīng)用任何止血或抗凝藥物治療。

1.2 血清標(biāo)本的收集與保存

肺癌患者(化療及手術(shù)前)及健康體檢者均為清晨空腹采用非抗凝管抽取外周靜脈血3 mL,室溫放置30～60 min后,5 000 r/min離心15 min后,分離血清分裝后-20℃低溫冷凍備用。同時(shí)采全血進(jìn)行常規(guī)血小板計(jì)數(shù)。

1.3 檢測(cè)方法

人VEGFELISA試劑盒購(gòu)于美國(guó)。檢測(cè)方法按試劑盒說明書進(jìn)行,用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,VEGF檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm。

2 結(jié) 果

2.1 肺癌患者和健康體檢者血清VEGF水平的比較

肺癌組60例,血清VEGF水平為(296.95±75.84)pg/mL,明顯高于對(duì)照組的(164.01±75.59)pg/mL統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P<0.001)。

2.2 肺癌患者血清VEGF水平與病理、臨床分期的關(guān)系(表1)

肺癌組中,不同病理類型及不同TNM分期的患者血清VEGF水平之間無明顯差異。

表1 肺癌患者血清VEGF水平與病理、臨床分期的關(guān)系

2.3 肺癌患者血清VEGF水平與患者生存期的相關(guān)性(圖1)

肺癌組60例患者均獲隨訪,隨訪率100%。生存期為確診日至患者死亡或末次隨訪的時(shí)間(2008年2月1日)。通過隨訪肺癌患者生存期(253.68±165.57)d,(35～753)d,中位生存期為211d,與肺癌患者血清VEGF水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.38,P<0.01)。

圖1 血清VEGF與生存期的相關(guān)性

2.4 肺癌組中血清VEGF水平與PLT的相關(guān)性(圖2)

肺癌組中 VEGF水平為(296.95±61.01)pg/mL,PLT水平為(244.45±71.29)×109/L(與對(duì)照組PLT無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異),經(jīng)相關(guān)分析,兩者存在正相關(guān)(r=0.26,P<0.05)。

3 討 論

圖2 血清VEGF與PLT的相關(guān)性

VEGF是由定位于6號(hào)染色體(6P21)編碼的一種45 KDa球蛋白,VEGF除內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生外,還可由其他幾種細(xì)胞例如巨噬細(xì)胞、基底細(xì)胞、視網(wǎng)膜表皮細(xì)胞、惡性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生。現(xiàn)有研究表明:VEGF是作用最強(qiáng)、特異性最高的血管生成調(diào)控因子,它可與血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性地結(jié)合,能增強(qiáng)血管通透性,刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的滲出,抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,激活蛋白酶致使細(xì)胞外基質(zhì)降解,有利于新生血管生長(zhǎng)及延伸,為內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)[2-4]。VEGF可通過以下機(jī)制調(diào)節(jié)腫瘤的血管形成和發(fā)展:①通過缺氧增加VEGF的轉(zhuǎn)錄,繼而刺激腫瘤組織分泌生長(zhǎng)因子;②激活生長(zhǎng)因子受體;③增加MMPs的產(chǎn)生,從而使血管通透性增加;④促使內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移,并誘導(dǎo)血管生成;⑤形成新的毛細(xì)血管網(wǎng)[5-6]。

Mattern等在1996年首次報(bào)道VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá),現(xiàn)有研究證實(shí)在非小細(xì)胞肺癌患者中有高水平的VEGF的表達(dá)[7-8],另外在小細(xì)胞肺癌患者中高水平的VEGF也有報(bào)道[9]。本研究結(jié)果顯示,肺癌患者血清VEGF水平顯著高于對(duì)照組,也證實(shí)了肺癌患者中VEGF呈高表達(dá),說明肺癌細(xì)胞確實(shí)能分泌大量的VEGF,促進(jìn)腫瘤血管的生成,為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移提供條件,這與以上報(bào)道是一致的

本研究結(jié)果顯示,肺癌組患者血清VEGF水平與患者的TNM分期之間無明顯關(guān)系。相關(guān)研究[10-11]報(bào)道肺癌患者VEGF水平與肺癌 TNM分期密切相關(guān),表明VEGF與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)。而在其他的一些研究中表明二者之間無關(guān)系[12-13]。另外,我們的研究結(jié)果還顯示肺癌患者血清VEGF水平與肺癌的病理類型無關(guān),這說明肺癌的不同病理類型具有同樣或相似的分泌VEGF的特性,這與國(guó)內(nèi)外的報(bào)道是一致的[14-15]。

肺癌的病理及臨床TNM分期與肺癌的預(yù)后密切相關(guān),但是它們并不能完全準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后,需要一些新的指標(biāo)。在一些關(guān)于非小細(xì)胞肺癌研究中表明VEGF過高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展和較短的生存期有關(guān)[16-18]。作者在研究中觀察到肺癌患者血清VEGF水平與其生存期之間有顯著的負(fù)相關(guān),這些均說明血清VEGF水平能夠反映肺癌的惡性程度,可作為手術(shù)前或化療前判斷患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

肺癌患者血清VEGF含量增加的機(jī)制尚不清楚,相關(guān)研究表明和外周血白細(xì)胞數(shù)、中性白細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)及血小板數(shù)密切相關(guān)[19-20]。有研究[21-22]表明VEGF也可以從外周血細(xì)胞中被釋放出,尤其是血小板。國(guó)外的一些研究[23-24]也顯示腫瘤患者血清VEGF水平與血小板及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān),提示血小板是VEGF的重要儲(chǔ)存和運(yùn)輸者。Choi等[25]研究表明非小細(xì)胞肺癌患者淋巴細(xì)胞和血小板中包含高水平的VEGF,所以在肺癌患者中血清高水平的VEGF與外周血細(xì)胞釋放有關(guān)。在作者的研究中,肺癌患者血清VEGF水平與血小板之間有顯著的正相關(guān),這與孔德勇等[26]研究是一致的,表明在腫瘤血管形成過程中,VEGF與血小板之間可能存在相互作用,在肺癌患者中血小板可能是VEGF的一個(gè)重要運(yùn)輸者,血小板可能在腫瘤血管的形成過程中通過釋放血管生成因子(例如VEGF)扮演一個(gè)重要的角色。我們認(rèn)為肺癌患者血清VEGF增高機(jī)制可能為①肺癌組織中VEGF水平增高,癌細(xì)胞分泌的VEGF被單核細(xì)胞和血小板儲(chǔ)存,并隨穿過血管壁的細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)釋放有關(guān);②VEGF可導(dǎo)致血管通透性增加,從而加快VEGF的擴(kuò)散,導(dǎo)致外周血中VEGF含量增加;③腫瘤細(xì)胞本身可分泌相關(guān)因子,通過血小板聚集,促進(jìn)血小板分泌VEGF[27-28]。以上給我們帶來思考,臨床上適當(dāng)?shù)目寡“逯委熓欠衲芤种品伟┗颊哐錠EGF的水平,從而控制肺癌血管的生成,改善患者的預(yù)后?臨床上某些抗腫瘤藥物(如吉西他濱)是否具有間接的抑制肺癌血管生成,控制肺癌轉(zhuǎn)移的作用?這些問題有待于進(jìn)一步的研究。

綜上所述,肺癌患者血清VEGF異常增高,且與肺癌患者的生存期成負(fù)相關(guān),血清VEGF可作為評(píng)估肺癌患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。另外,肺癌患者血清VEGF水平與PLT水平呈正相關(guān),提示血小板在腫瘤血管形成的過程中起重要的作用。

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