經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)法預(yù)測芍甘膠囊的有效期

董文燊，瞿發(fā)林，徐 波

1解放軍第102醫(yī)院，常州 213003;2南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210029

芍甘膠囊的處方出自《傷寒論》中的芍藥甘草湯，由芍藥、炙甘草（2︰1）兩味藥組成[1]；傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為芍藥甘草湯具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、益氣復(fù)脈之功效。現(xiàn)代藥理和臨床研究表明，芍藥甘草湯具有降低催乳素的作用[2]。近有報(bào)道[3]臨床用于各種原因引起的高催乳素癥的治療取得滿意療效。為方便患者攜帶和服用，提高患者服藥依從性，故將芍藥甘草湯由湯劑制成膠囊劑，便于更好地應(yīng)用于臨床，更好地服務(wù)于患者。本文以芍藥苷為指標(biāo)成分，采用經(jīng)典恒溫加速實(shí)驗(yàn)法，HPLC法對其進(jìn)行含量測定，預(yù)測制劑的有效期。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters系列高效液相色譜儀；Waters CapLC2487雙λ吸光度檢測器；Empower2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) （美國Waters公司）；FA1004型萬分之一電子天平 （上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠）；AE240s十萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

1.2 藥材與試劑

芍甘膠囊（0.35 g/粒，解放軍102醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，批號(hào)為20080130）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0736-9913）；水為蒸餾水；磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理

取同一批號(hào)（20080130）的芍甘膠囊 20粒，共17份，將各份樣品分別置于三角瓶中密封。除0號(hào)瓶外，其余16瓶分為4組，每組4瓶，各平放于65、75、85、95℃恒溫烘箱中，按各設(shè)定時(shí)間取出，放入干燥器中冷卻至室溫，備用。

2.2 芍藥苷的含量測定[4～5]

2.2.1 色譜條件SunfireTMC18(150mm×4.6mm，5μm)為色譜柱；乙腈-0.1%磷酸水溶液（14︰86）為流動(dòng)相；柱溫為25℃；流速為 1.0 mL·min-1；檢測波長為230 nm；靈敏度為2.0AUFS。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密稱取在60℃下減壓干燥4 h的芍藥苷對照品10.00mg，用甲醇溶解定容于 100mL 量瓶中，分別吸取 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置10mL量瓶中，以甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，依次分別進(jìn)樣20 μL進(jìn)行含量測定。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，以最小二乘法進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為：Y=17938X+10728，r=0.9997。 進(jìn)樣量在 0.4 μg～2 μg 范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 供試品溶液的制備取上述的三角瓶中芍甘膠囊10粒內(nèi)容物，研細(xì)，約取0.2 g，精密稱定,置50 mL量瓶中,加入適量甲醇,超聲處理10 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μL微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液1 mL定容至10 mL，即得供試品溶液。

2.2.4 相對含量計(jì)算每個(gè)時(shí)間點(diǎn)制備2份。精密稱定實(shí)際重量W（W0表示零時(shí)的實(shí)際重量）；每份測2次，取其平均值為該份的測量值A(chǔ)（A0為零時(shí)的峰面積），積分后取平均值IgC，進(jìn)行線性回歸。由于在恒溫加熱試驗(yàn)時(shí)，樣品失重，故每次試驗(yàn)前測定每個(gè)樣品重量，以便計(jì)算失重率f。各時(shí)間點(diǎn)的相對含量（CR）公式：CR=（W×A）/〔(W0-W0×f)×A0〕×100%。

2.3 結(jié)果

2.3.1 芍藥苷含量測定不同溫度和不同時(shí)間條件下，芍藥苷含量的測定結(jié)果見表1。

表1 不同溫度和不同時(shí)間條件下，芍藥苷含量的測定

2.3.2 計(jì)算K值將時(shí)間t與相對濃度的對數(shù)IgC進(jìn)行直線回歸，求得各溫度下的直線方程，符合方程IgC=－K/2.303t+IgC0，可確定本制劑中芍藥苷隨溫度、時(shí)間變化符合一級(jí)降解反應(yīng)。根據(jù)直線方程的斜率可求得各試驗(yàn)溫度下的反應(yīng)速度常數(shù)K值。結(jié)果見表1。

2.3.3 求室溫25℃下的有效期從表1的各溫度下的K值，用lgK和1/T作圖，得直線方程：lgK＝-4657.2/T+10.455，r=0.9956。外推可求得室溫25℃（T=273+25）時(shí)的 K25℃值為 6.7114×10-6h，進(jìn)一步求得在室溫25℃下有效成分減少10%所需的時(shí)間，即有效期。 可按公式求出：t0.9＝0.1054/K25℃＝15704.7 h＝1.79 a（年）。

3 討 論

由于芍甘膠囊在恒溫加速試驗(yàn)時(shí)，內(nèi)容物和膠囊殼中水份都會(huì)損失，為提高取樣準(zhǔn)確性，減少實(shí)驗(yàn)誤差，以失重率校正取樣誤差。失重率(f)：

其中W1為試驗(yàn)前平均整粒膠囊平均重量；W2為試驗(yàn)前空膠囊平均重量；W3為加速試驗(yàn)后整粒膠囊平均重量；W4為加速試驗(yàn)后空膠囊平均重量。

芍甘膠囊中主要有效成分為芍藥苷和甘草酸銨，預(yù)試驗(yàn)中比較芍藥苷和甘草酸銨的穩(wěn)定性，觀察到甘草酸銨的降解比芍藥苷少，表明甘草酸銨更加穩(wěn)定，所以選擇考察芍藥苷的穩(wěn)定性，來確定芍甘膠囊的有效期。

通過預(yù)試驗(yàn)確定芍藥苷的試驗(yàn)溫度和時(shí)間，并將試驗(yàn)溫度定位 65℃、75℃、85℃、95℃， 恒溫時(shí)間65℃時(shí)為 48 h，75℃時(shí)為 24 h，85℃時(shí)為 12 h，95℃時(shí)為6 h。試驗(yàn)中觀察到，隨著溫度升高，時(shí)間延長，樣品顏色加深，尤以95℃時(shí)現(xiàn)象最明顯。芍甘膠囊內(nèi)容物經(jīng)95℃恒溫加熱后在溶解過程中出現(xiàn)不溶性黑渣，且顏色越深，芍藥苷含量越低。經(jīng)試驗(yàn)，在密閉條件下，芍甘膠囊預(yù)測有效期為1.79年。

[1] 王靜蓉，馬琮瑜，嚴(yán)永清，等.芍藥甘草配伍化學(xué)變化研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000，11(2)：102-4.

[2] 袁海寧，王傳躍，馮秀杰，等.芍藥甘草湯治療高催乳素血癥對照研究[J].臨床精神醫(yī)學(xué)雜志，2005，15(6)：337-8.

[3] 袁海寧，周 方，羅小年.抗精神病藥物所致高催乳素血癥的治療[J].臨床精神醫(yī)學(xué)雜志，2005，15(4)：245-6.

[4] 瞿發(fā)林，董文燊，談麗娜，等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選芍甘膠囊提取工藝的研究[J]. 中國藥師，2008，11（1）：60-2.

[5] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].一部，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：9～68.