血液凝固試驗分析前質量控制和技術要求

彭祥云，楊 霞

(湖北洪湖市人民醫院檢驗科，湖北 洪湖 433200)

分析前質量控制是全面質量控制中至關重要的前提，各環節的質量控制直接影響檢驗結果的準確性，在可分析出原因的不準確的檢驗報告中有60%以上來自于分析前階段。對實驗室來講，測試前標本是否合格是實驗室全面質量控制的前提保證，凝血功能檢查對標本的要求尤為嚴格。因此必須強調實驗室測試前的技術要求。

1標本的采集 盡可能地保證每次采血都在同樣的條件下進行。采血時，盡量使患者處于室溫、平靜、空腹的狀態。避免劇烈運動后采血，因為劇烈的運動后Ⅷ因子活性快速上升，影響APTT的檢測結果。

1.1 最好采用真空采血管或者選擇合格的一次性塑料注射器，針頭短粗，避免或減少血小板、凝血機制和纖溶系統的激活。

1.2 應選取肘部較粗且彈性較好的靜脈采血，止血帶不可束縛過緊，束臂時間一般不宜超過1min，禁止用力拍打穿刺部位。

1.3 抽血應順利，速度要均勻。抽血速度過快易引起血細胞的損傷和凝血因子的激活，過慢血液易凝固。

1.4 采血完后應拔掉針頭，沿管壁將血液注入試管，用力不可太猛，且要避免氣泡產生，與抗凝劑顛倒充分輕柔混勻，避免用力震蕩，以免發生溶血。溶血后的標本會引起血小板活化和凝血時間縮短。

1.5 對于患者有多個檢驗項目需同時采樣時，凝血試驗樣本應采取第一管[1]。防止肝素、EDTA等的污染

1.6 確認標本量 對于采血量要求為1.8ml的采血管來講， 采血量少于 1.4ml時，PT、APTT、FIB、TT 的檢測結果均明顯降低;即使加入1.6ml的血量對檢測結果沒有顯著性影響，但對于處于臨界值的檢測結果或用于患者病情的動態觀察來說，還是值得注意的；采血量多于2.2m l，會使得FIB的檢測結果明顯增高，對于抗凝治療或血栓前狀態的評估，會造成假陽性判斷

2標本的運輸 應盡快送到實驗室檢測或直接在實驗室內進行。有條件的情況下最好在4℃運輸標本。

3標本的處理

3.1 離心條件 溫度控制在15～20℃，離心速度3.000r/min，離心時間10min得到乏血小板血漿。

3.2 及時檢測 全血貯存在4℃～10℃不超過2h。最好在1h內分離血漿，2h內測定完畢。若全部試驗不能在4h內完成，應放4℃冰箱保存，最多不能超過6h。如無法在此時間內完成，應將血漿分裝在小試管(0.5ml～1.0ml)中快速冷凍，貯存在-20℃或-70℃，冷凍過的標本復溶后不能再次冷凍。

3.3 檢查血漿 確認血漿有無凝塊、溶血、黃疸、脂血。標本中出現凝塊，不論大小均會干擾檢測結果，應重新采血；溶血標本，因紅細胞的磷脂表面具有凝血活酶的活性從而改變血漿凝固時間；黃疸和脂血標本因其色素和混濁干擾了光的散射，影響了凝固時間和纖維蛋白原的真實含量。

4抗凝劑的選擇和使用

4.1 抗凝劑的選擇 根據國際血液學標準化委員會(ICSH)及國際血栓與止血委員(ICTH)推薦使用3.2%枸櫞酸鈉作為凝血象檢查的抗凝劑。

4.2 抗凝比例 抗凝劑與血液的比例為1:9，由于1:9的概念是指基于當紅細胞壓積在20%～55%范圍內，實質是抗凝劑與血漿的比例，而不是與全血的比例。當紅細胞壓積＜20%或＞55%的血液標本要適當調整抗凝劑用量，以確?？鼓齽┰谘獫{中的絕對含量不變。公式為；抗凝劑用量(ml)=1.85×10-3×全血量(ml)×(100-患者紅細胞壓積%)[2]。

5試劑的選擇、使用和保存

5.1 試劑的選擇試劑的質量是保證檢驗結果可靠性的首要條件。試劑的選擇應根據所用檢測儀器的類型和對被檢測物的敏感度。同一品牌的不同成分的試劑和試劑重復性以及對被測物的敏感性。用于PT檢測的試劑必須提供國際敏感指標(ISI)值，理論上ISI值越接近1.0越好。

5.2 試劑使用 試劑使用時應嚴格按說明書進行操作，確認試劑批號與儀器定標曲線等是否匹配以及試劑的有效期等。在實驗和試劑準備中應使用蒸餾水或試劑級的去離子水，去離子水pH值應在6.0～7.0，pH值增高會使凝固時間延長。緩沖液的pH、離子強度、新鮮度直接影響測定。清洗液變質或效能減低能影響測定，一般要求清洗液用完時，應及時更換合格的清洗液。

5.3 試劑保存 試劑應放4℃冰箱保存，凍干試劑溶解后在4℃放置，隨時間的延長，試劑的效價會降低，從而影響PT、APTT、TT的測定結果。

6儀器的質量保證

6.1 儀器的安裝環境 應遠離熱源、震源，相對濕度<80%，最適溫度 15～30℃，電壓 220±10V，因為這些因素均能影響儀器的運行狀態或影響儀器的光學信號而影響測定。

6.2 儀器的調試與校正與儀器匹配的校正液，合理的校正點及校正參數，在儀器投入使用前，搬動、更換部件維修、更換不同廠家或不同批號的試劑，到校正周期，質控漂移找不出別的原因時，及時校正儀器。這樣才能確保儀器的準確性，檢測結果才能得到保證。使用新鮮混合血漿校正儀器時，其定值要直接或間接溯源至國際標準[3]。

6.3 參數的設置要準確、合理 如試劑量、樣本量、孵育時間、激活時間、反應溫度，這些都會影響結果的準確性。

6.4 儀器的質量 準確度：PT、APTT： 均值±15%，FIB：均值±25%.精密度：批內，PT＜2%，APTT＜3%，FIB＜5%； 批間，PT＜3%，APTT＜3%，FIB＜6%； 日間，PT＜4%，APTT＜5%，FIB＜7%。 攜帶污染率等指標要符合要求。

6.5 及時正確地保養和維護儀器 定時測試和校正儀器的性能，如溫度、波長，特別是對光源燈要定期檢查、校正，避免因光源燈光學性能衰減對測定的影響。同時要保持機械和光學部件的清潔，確保儀器良好的運行狀態。

[1]王 瑾.影響凝血試驗測定結果的因素分析[J].檢驗醫學與臨床,2008,5(16):1025.

[2]徐書芹.凝血試驗分析前質量控制中護理因素的影響及對策[J].檢驗醫學與臨床,2010,7(23):2652-2653.

[3]唐慧琴,劉忠民.凝血試驗項目室內質量控制方法評價和設計[J].血栓與止血學,2009,15(3):136-139.