試劑質(zhì)量對血細(xì)胞分析的影響因素探討

陳啟斌

(云南省昭通市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昭通 657000)

很多文章報導(dǎo)了抗溶血紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞和聚集的血小板對白細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾，小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、血小板聚集、EDTA-K2依賴型聚集對血小板計(jì)數(shù)的干擾作，但試劑質(zhì)量對血細(xì)胞分析的影響鮮有描述。

當(dāng)懸液中一個細(xì)胞通過小孔時，由于血細(xì)胞具有極小的傳導(dǎo)性，細(xì)胞的導(dǎo)電性比等滲的稀釋液要低，在電路中小孔感應(yīng)區(qū)內(nèi)電阻增加，瞬間引起電壓的變化而出現(xiàn)一個脈沖信號，電壓增加的程度取決于細(xì)胞的體積，細(xì)胞的體積愈大，引起的電壓變化愈大，產(chǎn)生的脈沖振幅越高。記錄脈沖的數(shù)量可以得到細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果，這就是庫爾特原理，也被稱為電阻法。

三分群和五分類血細(xì)胞分析儀中，紅細(xì)胞和血小板的檢測都使用電阻抗法，紅細(xì)胞和血小板被稀釋液稀釋后通過同一個檢測孔，根據(jù)RBC閾值線(如果閾值線定在30fl)，大于30fl的顆粒被計(jì)數(shù)成紅細(xì)胞，小于30fl的顆粒被計(jì)數(shù)成血小板。紅細(xì)胞和血小板的檢測主要受稀釋液的影響。稀釋液的導(dǎo)電性、離子強(qiáng)度、pH值直接影響脈沖的變化，會造成直方圖的變化和檢測結(jié)果的不確定性。稀釋液的滲透壓如果不是等滲液，將會改變紅細(xì)胞和血小板體積的大小，高滲的稀釋液會使細(xì)胞皺縮，MCV和MPV減小，低滲的稀釋液會使細(xì)胞腫脹造成MCV和MPV 增大， 自然 HCT、MCH、MCHC、PCT 已會隨之變化。

三分群白細(xì)胞的檢測不但受儀器電壓、儀器的檢測孔電流、儀器脈沖的增益的影響；也受溶血劑的種類、溶血時間，稀釋液，清洗液的影響。紅細(xì)胞的數(shù)量是白細(xì)胞的幾百倍，如果溶血素有質(zhì)量問題，有1%的紅細(xì)胞不能被溶解，被計(jì)數(shù)成白細(xì)胞后使白細(xì)胞計(jì)數(shù)成倍增加。如果經(jīng)溶血素和稀釋液作用后，白細(xì)胞的“膜包核”的體積大小不能按從大到小分別落在中性粒細(xì)胞、中間細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的閾值范圍內(nèi)，將影響白細(xì)胞的準(zhǔn)確分類。

五分類白細(xì)胞的檢測，以希森美康XT-2000i為例，分兩個通道進(jìn)行：一個是WBC/BASO通道，完成白細(xì)胞總數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類，使用了嗜堿性分類溶血素和嗜堿性分類染色液；另一個是DIFF通道，完成中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分類，使用了白細(xì)胞分類溶血素和白細(xì)胞分類染色液。不論是那一個通道的溶血素或/和染色液有質(zhì)量問題，將影響本通道的分類和計(jì)數(shù)。

現(xiàn)將筆者在實(shí)際工作中遇到的試劑有質(zhì)量問題對血細(xì)胞分析的影響和大家分享。筆者使用雅培CD1800三分群血細(xì)胞分析儀時，遇到同一個批號的兩桶溶血劑出了質(zhì)量問題，紅細(xì)胞不能溶解，被計(jì)數(shù)成白細(xì)胞，超過機(jī)器的檢測線性，機(jī)器顯示白細(xì)胞檢測結(jié)果“>>>>”。同時由于紅細(xì)胞不能被溶解，影響血紅蛋白吸光度的檢測，血紅蛋白的檢測結(jié)果顯示“>>>>”。當(dāng)時筆者就懷疑溶血素有質(zhì)量問題，還做了個機(jī)器外溶血試驗(yàn)，將血液和有質(zhì)量問題的溶血素加入同一只玻璃試管，紅細(xì)胞不能被溶解，試管內(nèi)一直呈渾濁狀態(tài)，顯微鏡下紅細(xì)胞密集。將剛被換下的做出正常結(jié)果的溶血素 (試劑桶里還剩下一小點(diǎn))，同時做了機(jī)器外溶血試驗(yàn)，紅細(xì)胞被全部溶解，試管內(nèi)呈紅色澄清狀態(tài)，顯微鏡下無紅細(xì)胞。還有一次，雅培CD1800的稀釋液用完后，筆者科室一位同事錯將清洗液當(dāng)成稀釋液換上后，檢測結(jié)果白細(xì)胞分類中間細(xì)胞(中值細(xì)胞)比例一直高達(dá)30%～40%；最后將正確的稀釋液換上后，中間細(xì)胞(中值細(xì)胞)比例立刻就降到正常。

筆者科室還有一臺希森美康XT-2000i五分類血細(xì)胞分析儀，有一次換上白細(xì)胞分類染色液(FFS)，正常做了幾個標(biāo)本，之后的標(biāo)本白細(xì)胞分類不出結(jié)果，DIFF(白細(xì)胞分類)散點(diǎn)圖呈灰色向高熒光區(qū)域延伸，當(dāng)時機(jī)器報警白細(xì)胞分類溶血素(FFD)消耗完了；但是換上新的FFD后標(biāo)本白細(xì)胞分類還是不出結(jié)果，白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖和以前相同。最后經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，證實(shí)是換上的白細(xì)胞分類染色液(FFS)有質(zhì)量問題。為什么正常做了幾個標(biāo)本，才出現(xiàn)之后的標(biāo)本白細(xì)胞分類不出結(jié)果呢？是因?yàn)闄C(jī)器的試劑管道里還殘留有換試劑之前質(zhì)量正常的試劑。

總結(jié)，我們在使用血細(xì)胞分析儀時，除了對機(jī)器的工作原理爛熟于心，還要對每一種試劑的分析原理應(yīng)當(dāng)了解，熟悉哪種試劑對哪些血細(xì)胞檢測項(xiàng)目有影響，以便我們分析是哪種試劑有質(zhì)量問題。當(dāng)血細(xì)胞分析的直方圖、散點(diǎn)圖有問題或分析結(jié)果與復(fù)檢結(jié)果誤差較大時，除了機(jī)器故障，還要高度懷凝試劑有質(zhì)量問題。換上正常試劑后，要進(jìn)行排空或深度灌注，使機(jī)器管道里殘留的有問題的試劑消耗完，才能得到正確的結(jié)果。必須使用機(jī)器的原裝試劑，以保證血細(xì)胞分析結(jié)果的準(zhǔn)確。