印片細胞學及 DNA倍體分析對乳腺疾病的診斷價值

袁鳳霞 任 力 李 煒 李德昌 岳 穎 毛志遠 (河北北方學院,河北 張家口 075000)

乳腺腫瘤是女性的常見疾病,包括良性、交界性及惡性病變。這些病變中有些無論從臨床上、大體上,還是顯微鏡下均較難確定其良惡性。而細胞 DNA含量反映了細胞的狀態,其含量測定對腫瘤性質的判定具有重要意義。以往研究多采用的流式細胞儀對乳腺癌進行 DNA倍體分析〔1〕。現在已有應用DNA倍體全自動圖像分析儀判斷乳腺腫瘤性質的研究〔2〕。印片細胞學已在乳腺腫瘤術中診斷得到應用〔3〕。本文通過 DNA倍體全自動圖像分析儀、印片細胞學對乳腺腫瘤的性質進行判斷,探討組織印片細胞學與DNA倍體分析對乳腺疾病良惡性的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 材料 對 80例乳腺疾病患者術中送檢的標本進行組織印片,每例標本做 2張印片,分別用于組織印片細胞學檢查和印片細胞的 DNA倍體分析。同時充分取材進行常規組織病理檢查。

1.2 方法

1.2.1 組織印片細胞學方法 用載玻片在術中送檢的腫塊的新鮮剖面上病變典型處輕輕按壓組織數次,使載玻片與組織切面均勻密切接觸,切忌推拉,取足夠量細胞,制成細胞學印片,自然干燥,95%的酒精固定 10 min,蘇木素-伊紅(HE)染色,清水沖洗干凈后,封片后閱片。

1.2.2 印片細胞的DNA倍體分析方法 采用全自動圖像分析儀測定法。組織印片,Feulgen染色,每例 Feulgen染色切片在 20倍物鏡下的腫瘤區域任意選擇 10個光鏡視野作為待測細胞,以同例腫瘤組織中淋巴細胞核 DNA含量平均值為二倍體對照值進行測定,經攝像系統輸入計算機內進行 DNA倍體分析。人為的去掉那些看上去為重疊核或染色中的雜質以保證測定的準確性。

1.2.3 常規組織病理方法 充分取材,脫水,石蠟包埋,切片,HE染色。對病理診斷為可疑惡性的進行免疫組化染色。

1.3 統計學處理 應用 SPSS 13.0統計軟件進行處理,兩組數據間率的比較用 χ2檢驗。

2 結 果

2.1 印片細胞學 診斷標準〔4〕:①細胞成分多樣,細胞排列規則,胞質豐富,細胞核圓或卵圓,核仁不明顯為良性;②見到少量單個核大、深染、輕度異型的細胞為可疑惡性;③細胞彌漫或成團分布,成分相對單一,細胞大小不等,胞核明顯增大,核染色質不均,核仁明顯為惡性。見圖 1。根據以上標準印片細胞學診斷將 80例分為 3組:①55例良性病變;②7例為可疑惡性病變;③18例為惡性。見表 1。

2.2 全自動圖像分析儀測定法 診斷標準:①正常 2倍體(DNA定量為2c)細胞為主,未見異倍體細胞及異倍體細胞峰,為陰性;②出現 3個或 3個以上 ＞5 c的細胞或出現異倍體細胞峰,診斷為陽性。見圖 2～圖 4。根據以上標準將 80例分為2組:①55例未見 DNA倍體異常細胞,2例中 1例出現 1個細胞 ＞5 c,1例出現 2個細胞 ＞5 c但未達到陽性標準,診斷為陰性;②23例為陽性。見表 1。

2.3 根據WHO乳腺腫瘤診斷標準將 80例常規石蠟切片分為兩組 ①55例良性,包括纖維腺瘤、乳腺腺病、導管內乳頭狀瘤、腺病伴纖維腺瘤形成、乳腺腺瘤、炎癥性病變。②惡性病變25例,包括浸潤性導管癌、浸潤性小葉癌、導管內原位癌、黏液腺癌。

2.4 組織印片細胞學分析 對乳腺疾病良惡性診斷的特異性為 92.7%,敏感性72%,準確率 86.25%;DNA倍體分析的特異性為 100%,敏感性 92%,準確率 97.5%,具有統計學差異(P＜0.05)。見表 2。

表1 印片細胞學、DNA倍體分析與組織學結果對比

表2 印片細胞學與DNA倍體分析的統計學比較

圖1 細胞成團、異型性明顯(×400)

圖2 正常 2倍體單峰

圖3 可見大量 DNA倍體異常細胞

圖4 可見DNA異倍體多峰

3 討 論

腫瘤細胞的生長特點是 DNA含量增高,細胞癌變的本質是細胞迅速無限增殖和轉移,測定細胞核DNA含量,可作為惡性腫瘤的指標〔5〕。良性腫瘤是以 4倍體增多,惡性腫瘤是非整倍增多,因此測定腫瘤細胞核DNA含量可以判斷腫瘤的良、惡性〔6〕。本材料中通過應用全自動圖像分析儀測定腫瘤的 DNA含量,對腫瘤良惡性的診斷的準確率 97.5%。有文獻報道腫瘤異倍體的檢出率高于病理組織學診斷的陽性率,兩者互補,有助于早期診斷,避免或減少癌癥的漏診〔7〕。

本研究中印片細胞學診斷是介于組織切片與脫落細胞學涂片之間的一種診斷方法,能減少人工變形,具有結構清晰、組織受檢面廣、操作簡單、診斷快、準確率較高等優點。本材料中其準確率為 86.25%,可見組織印片細胞學對腫瘤良惡性的診斷具有重要意義。但印片屬于細胞學范疇,著重根據細胞大小、核漿比例、核染色深淺等變化來診斷,這對于需要結合生物學行為及組織學結構或需要根據是否存在胞膜浸潤而定性的腫瘤來說,印片細胞學顯得具有局限性。

而腫瘤細胞的DNA倍體分析可以彌補印片細胞學的局限性,可以獲得單純從形態上難以判斷的腫瘤生物學特征,為用形態學評估腫瘤生物學特性提供了必要的補充。本文乳腺惡性病變的組織印片中,4例被診斷為良性,1例是由于印片質量的原因,未能獲取足夠量的腫瘤細胞;1例是由于腫瘤壞死或分泌物較多,印片中這樣背景過強,瘤細胞減少,導致診斷為良性;2例常規石蠟證實分別為黏液腺癌和浸潤性小葉癌。黏液腺癌的形態特點是細胞呈簇狀漂浮在黏液湖內,細胞簇常由形態一致的圓形細胞組成,接近正常腺上皮。由于黏液腺癌的這樣的組織學特點,難以與良性上皮細胞鑒別。乳腺浸潤性小葉癌的組織學的特點,癌細胞一般較小,大小較一致,細胞間缺乏黏附性。癌細胞不易與炎細胞及間質細胞區分,導致診斷為良性病變。良性病變中被診斷為可疑惡性的 4例及惡性腫瘤中被診斷為可疑惡性的 3例,是由于印片中多為成片脫落的細胞團,有的細胞團可見雙極裸核的肌上皮,不易與導管內乳頭狀瘤相鑒別以及常規石蠟證實為局灶癌變。而DNA倍體分析則排除了假陰性及假陽性的診斷結果,良性腫瘤中印片細胞學診斷為可疑惡性的 4例,DNA倍體分析為正常 2倍體單峰;惡性腫瘤中,印片為良性及可疑惡性的 7例,DNA倍體分析 6例出現了大量大于 5 c的細胞,1例由于印片質量的原因出現了假陰性。組織學診斷為惡性病變中的2例,DNA倍體分析都出現了＞5 c的細胞,但未達到陽性標準,考慮可能是由于印片質量的原因。

本研究中采用的是全自動圖像分析儀,與流式細胞儀法相比,其具有標本制作程序簡單,檢測結果精確,因為標本為組織印片,所以具有很好的重復性及可控制性。全自動圖像分析儀能在顯微鏡下對每一個細胞做出逐個測量,在 DNA檢測的同時能對細胞形態參數,如核面積等做出準確的測量〔8〕。目前,DNA倍體全自動圖像分析儀已經應用于呼吸系統如惡性漿膜腔積液的診斷〔9〕;女性生殖系統,如宮頸癌的篩查與診斷〔10〕;男性泌尿生殖系統,如 DNA倍體分析結合尿液細胞學檢查對可疑膀胱癌患者的診斷等〔11〕。但 DNA倍體分析應用到手術中冰凍診斷的輔助診斷方法尚屬首次嘗試,通過與組織石蠟切片陽性率的比較,試圖探索出提高術中冰凍診斷準確性的一條新路。而且隨著影像技術及術前活檢技術的發展,DNA倍體分析可為術前正確診斷提供有力的證據。

1 左文述,魏 玲,王光武,等 .乳腺癌組織中 bcl-2蛋白表達及其與DNA倍體的關系〔J〕.中國腫瘤臨床,2005;32(3):151-7.

2 Abdalla FB,Boder JM,Buhmeide A,et al.Image DNA cytometry in FNABs of Libyan breast disease〔J〕.Anticancer Res,2010;30(1):175-81.

3 田希蘭.印片細胞學在乳腺腫瘤快速診斷中的價值〔J〕.現代診斷與治療,2005;16(4):217-8.

4 劉喜波,傅燕萍.乳腺手術中細胞印片的病理診斷價值〔J〕.中華病理學雜志,2005;34(10):683-5.

5 Haroske G,Baak JP,Danielsen H,et al.Fourth updated ESACP consensus report on diagnostic DNA image cytometry〔J〕.Anal Cell Pathol,2001;23(2):89-95.

6 Wachulska M,Kozlowska K,Cichorek M.The DNA ploidy and proliferative activity of transplantable melanoma cell in regard to their secretory function〔J〕.Neoplasma,2005;52(4):280-6.

7 李旭軍,毛國慶,劉東海,等.用DNA倍體分析乳腺腫瘤細胞的臨床意義〔J〕.現代實用醫學,2002;14(5):234-5.

8 喬 巖,孫麗華,馬吉勇,等.全自動細胞DNA定量分析在胸腔積液中的診斷價值〔J〕.臨床腫瘤學雜志,2007;12(11):850-5.

9 Osterheld MC,Liette C,Anca M.Image cytometry:an aid for cytological diagnosis of pleural effusions〔J〕.Diagn Cytopathol,2005;32(3):173-6.

10 孫小蓉,汪 建,Boecking A.DNA倍體分析系統用于宮頸癌及上皮內瘤變的診斷及預測〔J〕.中華病理學雜志,2005;34(7):435-7.

11 Liu J,Katz R,Shin HJ,et al.Use of mailed urine specimens in diagnosing urothelial carcinoma by cytology and DNA image analysis〔J〕.Acta Cytol,2005;49(2):157-62.